50. Методы изучения фагоцитоза. Показатели фагоцитарной реакции, их определение и значение в клинической практике.

А. Прямым морфологическим методом. Микробы смешиваются с фагоцитами в пробирке или в организме лабораторных животных, через 15—120 минут из смеси приготавливаются микропрепараты на предметных стеклах, окрашиваются по Романовскому-Гимзе и подсчитываются число фагоцити­рующих фагоцитов и число фагоцитированных микробов. По ним производят расчет следующих показателей:

ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЕЛЬ = 100%*(число фагоцитирующих фагоцитов/общее число фагоцитов)

ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО = (число фагоцитированных микробов/число активных фагоцитов)

ПОКАЗАТЕЛЬ ЗАВЕРШЕННОСТИ ФАГОЦИТОЗА= (ФЧ(через 15мин)-ФЧ(через 120мин))/ФЧ(через15мин)*100%

Б. Непрямыми методами

Они основаны на определении функциональной активности различных стадий фагоцитарного процесса. Определение хемотаксического индекса позволяет установить способность фагоцитов к направленному передвижению в сторону хемоаттрактанта –активированного комплемента, экстракта микробов, казеината натрия. Подсчитывается отношение количества фагоцитов, проникающих через микропористые фильтры в опыте и в контроле. Аттракция фагоцитирующегося объекта к поверхности фагоцита определяется по изменению степени метаболизма фагоцита, которая суммарно определяется в тесте хемилюминесценции. Бактерицидность фагоцитов определяется по активности бактерицидных систем, заключенных в гранулах клеток: перекиси водорода - пероксидазы, супероксидных ионов - супероксиддесмутазы, лизоцима. Переваривающая способность фагоцитов оценивается по активности лизосомальных ферментов, кислой и щелочной фосфатаз, катепсина.

51. Антигенпрезентирующие клетки. Дендритные клетки. Естественные киллеры и механизмы цитотоксичности.

Профессиональными АПК для Т-лимфоцитов являются дендритные клетки, В-лимфоциты и макрофаги. Роль АПК могут также выполнять эндотелиальные клетки, фибробласты, кератиноциты и некоторые другие клетки.

Основная функция: презентация - представление антигена Т-лимфоцитам осуществляется следующим образом:

• поглощение антигена антигенпрезентирующей клеткой

• расщепление антигена в цитоплазме клетки ферментами

• связывание образующихся антигенных пептидов с молекулами ГКГС I или II

• транспортировка и выход образовавшегося комплекса на поверхность мембраны клетки, где антиген (пептид) распознается рецепторами лимфоцитов.

Дендритные клетки.

• Отростчатые, ветвистые клетки; основные представители АПК. Они активируют наивные Т-лимфоциты при первом контакте их с антигеном.

• Дендритные клетки костномозгового происхождения находятся в слизистых оболочках и коже (клетки Лангерганса) Они более активны, чем макрофаги, в индукции иммунного ответа.

• Дендритные клетки некостномозгового происхождения - фолликулярные дендритные клетки находятся в первичных и вторичных фолликулах лимфоузлов, селезенки и лимфоидной ткани слизистых оболочек.

Естественные киллеры

• Естественные киллеры (ЕК) или нормальные киллеры. Являются клеточным фактором естественного иммунитета. Идентифицируются как CD16/CD56 –клетки

• ЕК – лимфоциты (5-20% лимфоцитов периферической крови), содержащие белок перфорин и сериновые эстеразы-гранзимы.

• Основное свойство ЕК – способность лизировать клетки-мишени без предварительного контакта с антигеном.

• Клетками-мишенями для ЕК являются практически все ядросодержащие клетки, но наибольшая активность ЕК проявляется по отношению к опухлевым и пораженным вирусом клеткам.

Механизм цитотоксичности ЕК:

• Для лизиса клеток-мишеней ЕК выделяют белок перфорин. Связываясь с мембраной клетки перфорин формирует в ней трансмембранный канал, через который в клетку впрыскиваются гранзимы, активирующие в ней каспазы (сериновые протеазы), а они активируют эндонуклеазы, осуществляющие фрагментацию ДНК – апоптоз.

• Процесс лизиса осуществляется за 1-2 часа – прямая (спонтанная) клеточно-опосредованная цитотоксичность.

• Действуют совместно с гамма-интерфероном и ИЛ-2.