- •Введение 6
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Характеристика энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii
- •1.2 Характеристика отряда Homoptera (равнокрылые)
- •1.2.1 Семейство Aleyrodinea – белокрылки
- •1.3 Инфицирование и развитие микозов
- •1.4 Изучение процесса патогенеза с помощью электронной
- •1.5 Факторы, влияющие на процесс патогенеза
- •1.6 Влияние ультрафиолетового облучения
- •1.7 Разработка препаративных форм биоинсектицидов на основе спор энтомопатогенных грибов
- •2 Цели и задачи исследования
- •3 Экспериментальная часть
- •3.1 Объекты исследования
- •3.1.1 Культура гриба Verticillium lecanii
- •3.2 Материалы и методы
- •3.2.1 Питательные среды
- •3.2.2 Культивирование гриба Verticillium lecanii
- •3.2.3 Определение титра спор
- •3.2.4 Получение образца биопрепарата гриба
- •Verticillium lecanii на ферментационной установке
- •3.2.5 Получение препаративных форм
- •3.2.6 Определение жизнеспособности спор гриба
- •3.2.7 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.8 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.9 Определение биологической эффективности
- •3.2.10 Изучение процесса патогенеза с помощью
- •3.2.11 Изучение влияния уф-излучения на
- •3.2.12 Изучение влияния уф-облучения на
- •3.3 Статистическая обработка результатов
- •4 Результаты исследований и их обсуждение
- •4.1 Результаты оценки влияния добавок к препаративным формам на жизнеспособность спор гриба Verticillium lecanii
- •4.2 Результаты опыта по изучению биологической
- •4.3 Результаты оценки влияния уф-излучения
- •4.4 Результаты опыта по изучению влияния уф-облучения
- •4.5 Результаты опыта по изучению процесса патогенеза с помощью электронной сканирующей и световой микроскопии
- •5 Выводы
- •Технико-экономическая оценка результатов исследования
- •Б.2 Расчет затрат на проведение исследовательской работы
- •В.3.2 Основные правила безопасности работы в лаборатории При работе с едкими веществами:
2 Цели и задачи исследования
Цель работы: Повышение эффективности препаративных форм вертициллина за счёт внесения новых добавок и ультрафиолетовых протекторов и изучение особенностей процесса патогенеза при использовании композиций на основе спор гриба.
Задачи работы:
1 изучить процесс патогенеза, вызванного спорами гриба и композициями с помощью световой и электронной сканирующей микроскопии;
2 оценить влияние новых добавок на жизнеспособность спор гриба и вирулентность препаративных форм;
3 изучить влияние УФ-излучения на жизнеспособность спор гриба и эффективность препаративных форм;
4 оценить эффективность препаративных форм в лабораторных и производственных условиях на оранжерейной белокрылке.
3 Экспериментальная часть
3.1 Объекты исследования
3.1.1 Культура гриба Verticillium lecanii
В работе использовалась культура гриба Verticillium lecanii Vl-21 из Государственной коллекции полезных и вредных организмов Всероссийского НИИ защиты растений, лаборатории микробиологической борьбы с вредителями и болезнями растений. Штамм хранился при температуре 5 оС в пробирках на скошенном агаре Сабуро. Видовое название культуры: Lecanicillium muscarium (Zimmerm.) Zare & W.Gams (=Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas). Штамм был выделен из личинок оранжерейной белокрылки T. vaporariorum (Homoptera: Aleyrodidae), собранной в поселке Раменское Московской области в 1981 году. Штамм образует хорошо развитый воздушный мицелий белого цвета. Реверзум бледно-желтого цвета. Поверхность колоний слабоморщинистая. Конидиеносцы мутовчато-разветвленные с 1-2 фиалидами. Фиалиды удлиненные, у основания расширены, несут по 1-2 конидии. Конидии одноклеточные, удлиненно-цилиндрические с закругленными концами. Размер конидий (1,5-2,8) мкм [24].
Штамм хорошо растет на среде Чапека, сусло-агаре, среде с пептоном, среде Сабуро. Диаметр колоний через 14 суток роста 45 мм. Из источников углерода штамм хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, крахмал, растет на инозите, маните. В качестве источника азота утилизирует нитраты, аммонийный азот, пептон, дрожжевой экстракт, сою, БВК. Оптимальная температура роста (26-28) С [25].
3.2 Материалы и методы
3.2.1 Питательные среды
В работе использовались следующие питательные среды [26]:
1 твердая питательная среда Чапека (г/л): сахароза – 20; NaNO3 – 2; MgSO4 – 0,5; KH2PO4 – 1; KCl – 0,5; FeSO4 – 0,01; агар – 20 г, вода, рН=6,5;
2 жидкая питательная среда Сабуро (г/л): пептон – 10, глюкоза – 20, дрожжевой экстракт – 2, водопроводная вода, рН=6,5;
3 твердая питательная среда Сабуро (г/л): пептон – 10, глюкоза – 20, дрожжевой экстракт – 2, агар-агар – 20, водопроводная вода, рН=6,5;
4 1%-ный агар (г/л): агар – 10, водопроводная вода.
3.2.2 Культивирование гриба Verticillium lecanii
Для получения посевного материала гриб выращивали в течение 7 суток на твердой агаризованной среде Сабуро в чашках Петри при качалочных колбах объемом 750 мл. В каждую колбу вносили по 100 мл жидкой питательной среды Сабуро, которая предварительно стерилизовалась при давлении 50662,5 Па, температуре 110 оС и в течение 180 минут. На поверхности чашки Петри с грибом Verticillium lecanii вырезались диски диаметром 10 мм и переносились в каждую колбу (2 диска на 100 мл среды). Биомасса гриба выращивалась методом глубинного культивирования на качалке с частотой вращения (200-220) мин-1 в течение 5 суток, при температуре 27 оС. Далее бластоспоры и мицелий гриба отделяли от культуральной жидкости с помощью вакуум-фильтрации на бязевом фильтре, биомассу промывали дистиллированной водой, взвешивали и использовали для приготовления препаративных форм [26].