Приготовление и применение микробных аллергенов

Туберкулин - концентрированный стерильный фильт­рат бульонных культур микобактерий туберкулеза чело­веческого и бычьего видов, осажденный трихлоруксусной кислотой и растворенный после обработки этанолом и эфиром в изотоническом растворе натрия хлорида с фос­фатным буфером, твином-80 (стабилизатор) и фенолом (консервант). Аллергеном в нем является туберкулопроте-ин. Вводят туберкулин внутрикожно в ладонную поверх­ность предплечья, по Манту, в объеме 0,1 мл, содержащем туберкулиновые единицы. Результаты реакции учиты­вают через 72 ч, оценивая ее по диаметру возникающей на месте введения туберкулина папулы, которая при поло­жительной пробе составляет 5 мм и более. При отрица­тельной реакции папула не образуется или имеет точеч­ные размеры.

Тулярин - убитая нагреванием при температуре 70 °С взвесь 2-суточной культуры туляремийных бактерий в 3 %-ном глицерине. В 1 мл взвеси содержится 100 млн бактерийных тел. Вводят тулярин внутрикожно в среднюю треть предплечья в количестве 0,1 мл. Реакцию учи­тывают через 24-36-48 ч. Если результат положитель­ный, на месте введения тулярина возникает отек или ин­фильтрат различной интенсивности. Вместо внутрикож-ной пробы можно пользоваться накожной, для воспроиз­ведения которой применяют тулярин, содержащий в 1 мл 2 млрд убитых бактерийных тел. На продезинфицирован­ную кожу предплечья наносят 2 капли препарата, через которые делают поверхностные насечки и слегка втирают его. Реакцию оценивают через 24-36 ч. Кроме тулярина реакцию воспроизводят также туаллергеном, извлечен­ным из бактерий химическим путем. Вводят его внутри­кожно или накожно. У больных туляремией положитель­ная реакция возникает в ближайшие 5 мин, но ее учиты­вают спустя 40-60 мин.

Бруцеллин - фильтрат 3-недельной культуры бруцелл (Brucella abortus, В. melitensis ), прогретый при 80 °С в те­чение 1 ч. Его вводят внутрикожно в область предплечья. Реакцию, которую называют пробой Бюрне, учитывают через 24-48 ч. При латентном бруцеллезе на месте введе­ния бруцеллина возникает отечность диаметром 10 мм, а при клинически выраженной форме болезни она может достигать 60 мм.

Антраксин - гидролизат сибиреязвенных бацилл. Вво­дится внутрикожно в ладонную поверхность предплечья в количестве 0,05 мл. Положительная реакция характери­зуется появлением гиперемии и инфильтрата. Реакция оценивается плюсами в зависимости от размера гиперемированного участка: « + » - диаметр около 15 мм; «++» ^_ 16-25 мм; «+++» - 26-50 мм; «++++» - более 51 мм.

Гонококковый аллерген - гретая взвесь убитых гоно­кокков в изотоническом растворе натрия хлорида, содер­жащая в 1 мл 100 млн м. т. Его применяют при диагности­ке хронических форм гонореи, вводя внутрикожно 0,1 мл. Положительная реакция, возникающая через 24 ч, прояв­ляется гиперемией и припухлостью в месте инъекции ал­лергена.

Актиномицетные аллергены - экстракт актиномице-тов или актиномицетная вакцина, содержащая в 1 мл 250 млн м. т. Аллерген вводят внутрикожно. Результат учитывают через 24 ч. Положительная реакция проявля­ется покраснением и образованием папулы.

Фавин, трихофитии, микроспории - консервирован­ные фильтраты 2-3-месячных бульонных культур соответ­ствующих грибов. Применяются в диагностике фавуса, трихофитии, микроспории.

Токсоплазмин - специально обработанная перитони-альная жидкость белых мышей, зараженных внутрибрюшинно токсоплазмами. Аллерген вводят внутрикожно по типу аллергической реакции Манту. Учитывают ее через 24-48ч.

Определение сенсибилизации организма in vitro

Аллергизацию организма in vitro можно выявить в ре­акциях торможения миграции, бласттрансформации лей­коцитов, розеткообразования и многих других. К наибо­лее простым относятся реакции дегрануляции базофильных гранулоцитов и тучных клеток под влиянием аллергена в присутствии сыворотки больного.

Реакция дегрануляции базофилов (тест Шелли) ста­вится на предметном стекле в спиртовом растворе нейт­рального красного, путем смешивания в нем равных объ­емов: 1) лейкоцитов человека (кролика), сыворотки больного и аллергена (опыт); 2) лейкоцитов, сыворотки больного и изотонического раствора натрия хлорида; 3) лейкоци­тов, аллергена и того же изотонического раствора (конт-роли). Капли накрывают покровными стеклами и заклю­чают в парафин. Препараты выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре и в иммерсионном микро­скопе подсчитывают 20-25 базофилов. При дегрануляции трети из них в опытной пробе базофильный тест считают положительным.

Реакция дегрануляции тучных клеток ставится так *e, как тест Шелли. Обычно используется для определе­ния лекарственной аллергии. Тучные клетки получают °т крыс. С этой целью в брюшную полость наркотизированного животного вводят 10 мл теплого изотонического раствора, 1-2 мин массируют крысе живот и, сделав по­средине разрез, собирают стекающую жидкость с петель кишечника в пробирку с гепарином. Получив взвесь туч­ных клеток, ее наносят по 0,03 мл на три предметных стекла, покрытых сухим слоем нейтрального красного, и смешивают с такими же объемами исследуемого антибио­тика-аллергена (контроль № 1), сыворотки пациента (контроль № 2), антибиотика-аллергена и сыворотки (опытная проба). Накрыв взвеси клеток покровными стеклами, их на 15 мин помещают в термостат, после че­го под иммерсионным микроскопом подсчитывают в пре­паратах количество дегранулированных тучных клеток. При низких значениях дегрануляции тучных клеток в контроле показатель 10 % и более в опыте указывает на гиперчувствительность организма к исследуемому антибиотику.