Совместная работа студента с преподавателем

Самостоятельная работа студентами выполняется под непосредственным контролем преподавателя. После выполнения задания студенты должны представить тетради на проверку преподавателю.

Контрольные вопросы

1. Какие основные параметры регулируют при оптимизации биосинтеза продуцентов БАВ?

2. Какое значение имеет питательная среда для биосинтеза продуцента?

3. Как изменяется состав среды в начале биосинтеза?

4. Какие свойства биообъекта могут совершенствоваться при получении промышленных штаммов?

5. Каковы условия безопасности работы с продуцентами?

6. На какие стадии разделяют развитие культуры продуцента в течение всего процесса культивирования?

7. Какие две стадии развития продуцента существует? Как отличаются цитоморфологических клетки продуцента на этих стадиях?

8. Как определить качество посевного материала?

Лабораторная работа 15

Тема занятия: Ферменты. Их свойства и области применения. Выращивание биопродуцентов ферментов на агаризованных и жидких питательных средах. Определение активности ферментных препаратов по ГФ СССР Х1 издания (стр. 25-29), том 2.

Цель: Освоить методику определения ферментной активности лекарственных и ветеринарных препаратов биотехнологического производства

Задачи обучения:

• знать определение ферментов как белковых соединений, их классификацию и общую характеристику;

• знать правила формирования названий ферментных препаратов и их индексации;

• ознакомиться с номенклатурой лекарственных ветеринарных, диагностических ферментных препаратов, получаемых биотехнологическим синтезом;

• ознакомиться с общей принципиальной технологической схемой получения внутриклеточных и внеклеточных ферментов;

• основные показатели, характеризующие ферментационный процесс, и условия проведения ферментации;

• группы предшественников роста продуцентов и биосинтеза ферментов.

• стандартизацию ферментов;

• пользоваться научной, методической и справочной литературой в области биотехнологии;

• проводить анализ ферментативной активности лекарственных ферментных препаратов.

ЗАДАНИЕ 1. Провести определение белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом для препаратов:

А) Террилитин; Б) α-Амилаза; В) Пенициллиназа.

Методика определения белка колориметрическим методом

с биуретовым реактивом

Ферменты по своей сути представляют собой белки. Белки – высокомолекулярные природные органические вещества, построенные из L-аминокислот.

Для количественного определения белка используют колориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях пользуются определением белка по содержанию общего азота в препарате.

Метод основан на образовании в щелочной среде окрашенного в фиолетовый цвет комплекса ионов двухвалентной меди и пептидными связями молекулы белка.

Биуретовую реакцию нельзя проводить в присутствии солей аммония из-за образования медно-аммиачных комплексов.

1 мл раствора препарата, содержащего 1-10 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 4 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре.

Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны в диапазоне от 540 до 650 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 1 до 10 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность растворов при выбранной длине волны.

Приготовление биуретового реактива. 0,75 г меди сульфата и 3 г натрия-калия тартрата растворяют в 250 мл воды в мерной колбе вместимостью 1 л, затем при энергичном перемешивании прибавляют 150 мл 10 % раствора едкого натрия, свободного от углекислоты, 1 г калия йодида, перемешивают и доводят объем водой до метки. Раствор хранят в емкости из полиэтилена.