Совместная работа студента с преподавателем

Самостоятельная работа студентами выполняется под непосредственным контролем преподавателя. После выполнения задания студенты должны представить тетради на проверку преподавателю.

Контрольные вопросы

• Какие методы отделения антибиотика от культуральной жидкости в соответствии с его свойствами вы знаете?;

• Как проводится хроматографическое разделение и обнаружение антибиотиков?

• Как проводится кислотно-основное титрование?

• Как рассчитывается количественное содержание антибиотика в культуральной жидкости?

• Как можно классифицировать омомицин, галтамицин и фузидовую кислоту?

• Какие методы определения подлинности антибиотиков вам известны?

• Как идентифицируется омомицин, галтамицин, фузидовая кислота в экстрактах культуральной жидкости?

• Укажите, что может содержать культуральная среда (жидкость) помимо целевого продукта?

Лабораторная работа № 12

«Качественное и количественное определение антибиотиков омомицина и галтамицина в экстрактах культуральной жидкости с помощью ТСХ на пластинках «Силуфол»

Тема занятия: Качественное и количественное определение антибиотиков омомицина и галтамицина в экстрактах культуральной жидкости с помощью ТСХ на пластинках «Силуфол»

Цель: выработать практическое умение обоснованно выбирать и практически применять определенный метод анализа антибиотиков на примере омомицина и галтамицина.

Задачи обучения:

• Знать методы определения подлинности антибиотиков (качественный анализ);

• Освоить методы количественного анализа антибиотиков.

• Выбирать метод определения антибиотика в культуральной жидкости в соответствии с его свойствами;

• Проводить хроматографическое разделение и обнаружение антибиотиков;

• Проводить кислотно-основное титрование:

• Рассчитывать количественное содержание антибиотика в культуральной жидкости.

Задание № 1. Установить подлинность фузидовой кислоты.

Фузидовая кислота (фузидин) – противомикробное средство, применяемое при пневмониях, отитах, остеомиелите. Образуется продуцентом Fusidium coccineum. Это антибиотик стероидной структуры. Количественное определение фузидовой кислоты в субстанции можно провести как прямым алкалиметрическим титрованием, так и методом потенциометрического титрования. Антимикробную активность фузидовой кислоты можно определить биологическим методом диффузии в агар со стандартной микробной тест-культурой.

Задание № 2. Провести определение количественного содержания фузидовой кислоты в образце, полученном с биотехнологического производства (например, в культуральной жидкости), путем титрования кислотно-основным методом.

Материальное обеспечение работы

• Раствор щелочи (0,1 н NAOH);

• Фузидовая кислота:

• Пропиловый спирт:

• Фенолфталеин, 1% раствор.

• Установка для титрования;

• Аналитические весы.

Прочие материалы: - фильтровальная бумага; - горелка; - колбы для титрования: - цилиндры: - капельница с раствором фенолфталеина.

Порядок выполнения работы

Качественный анализ фузидовой кислоты

На пластинку силикагеля «Силуфол» наносят каплю спиртового раствора фузидовой кислоты, высушивают феном и хроматографируют в системе растворителей (петролейный эфир-ацетон, 2:1). Пластинку высушивают и просматривают в лучах УФ-лампы (254 нм). Фузидовая кислота обнаруживается в виде фиолетового пятна на зеленом флуоресцирующем фоне.

Хроматограмму (ТСХ) выдерживают в парах йода: фузидовая кислота обнаруживается в виде коричневого пятна, которое можно закрепить (чтобы не выцвело), опрыснув слабым (0,01%) водным раствором KMnO₄. Пятно становится фиолетовым и со временем не исчезает.

ТСХ с фузидовой кислотой также можно опрыснуть насыщенным раствором KMnO₄. На месте фузидовой кислоты образуется ярко-желтое пятно на розовом фоне, которое при прогревании ТСХ над пламенем становится коричневым.

Количественное определение фузидовой кислоты

Точную навеску (0,25-0,5 г) растворяют в 5 мл пропилового спирта. Проводят прямое титрование с индикатором фенолфталеином, 0,1 моль/л раствором щелочи (NAOH) до светло-розового окрашивания (окончание титрования).

Расчет проводят, используя титриметрический фактор пересчета, по средним показателям объема титранта из 3 титрований (1 мл 0,1 моль/л NAOH соответствует 0,05167 фузидовой кислоты).

Результаты работы оформляют в протоколе.