Этапы приготовления фиксированного мазка

1. Обезжиривание стекла

2. Приготовление мазка

3. Высушивание мазка

4. Фиксация мазка с целью: а)________________________________________

б)________________________________________

5. Окраска простым или сложным способом

Тинкториальные свойства - __________________________________________ __________________________________________________________________

Простые методы окраски - ___________________________________________

__________________________________________________________________

Сложные методы окраски - ___________________________________________

___________________________________________________________________

Общая схема сложных (дифференциальных) методов окраски:

основной краситель

дифференциальное вещество

дополнительный краситель

Окраска по граму

Этап	Вещество	Время обработки
Основной краситель	Генцианвиолет (кристаллвиолет)	1 мин
Фиксатор	Р-р Люголя	1 мин
Дифференцирующее вещество	Спирт этиловый 96	5-10 сек
Промывка	Вода	5-10 сек
Дополнительный краситель	Водный фуксин	1 мин
Промывка	Вода	5-10 сек

Принцип метода:

Генцианфиолет связывается с пептидогликаном клеточной стенки. Толстый слой пептидогликана грамполодительных бактерий связывает много красителя, тонкий слой - грамотрицательных - мало. Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются, а грамположительные - остаются окрашенными в синий цвет. Дополнительный краситель окрашивает граотрицательные микроорганизмы в красный цвет.

Рисунок 3- Строение клеточной стенки грамположительных (А) и грамотрицательных (Б) бактерий(схема). У грамположительных бактерий (А) основной слой - пептидогликан - многослойный и пронизан тейхоевыми кислотами (толстая клеточная стенка); у грамотрицательных бактерий (Б) тонкий пептидогликан и над ним расположена внешняя мембрана, содержащая липиды (тонкая клеточная стенка). 

	Бактерии
Морфология	грамположительные	грамотрицательные
Строение клеточной стенки 1.Пептидогликан (муреин)
2. Тейхоевые кислоты
3. Липополисахаридный слой
Окраска по Граму	Сме	сь