Расщепление гидроген пероксида каталазой крови. Определение каталазного числа крови

Задание 1. Выявить действие каталазы.

Ход работы. В пробирку наливают 10-15 капель 3% раствора Н₂О₂ и прибавляют 1 каплю крови. Происходит бурное выделение кислорода: жидкость пенится и пена заполняет всю пробирку.

Задание 2. Определить каталазное число крови.

Принцип. Метод основан на определении количества гидроген пероксида, расщепленного ферментом за определенный промежуток времени. О количестве расщепленного гидроген пероксида судят по разности количества КМnО₄, израсходованного на титрование до и после действия каталазы:

2КМnО₄ + 5Н₂О₂ + 3Н₂SO₄ → 5О₂ + 2МnSО₄ + K₂SО₄ + 8H₂O

Ход работы. В две колбы для титрования наливают по 1 мл разбавленной крови (1:1000) и прибавляют по 7 мл Н₂О (дист.). Затем в исследуемую пробу прибавляют 2 мл 1% Н₂О₂, а в контрольную – 5 мл 10% раствора Н₂SО₄. Действие каталазы в кислой среде (в контрольной пробе) прекращается, поскольку она действует при рН=7,4. Обе пробы оставляют при комнатной температуре на 30 минут. Потом наливают в исследуемую колбу 5 мл 10% Н₂SO₄ , а в контрольную – 2 мл 1% раствора Н₂О₂. Содержимое каждой колбы титруют 0,1н раствором КМnО₄ до слабо розовой окраски. Рассчитывают каталазное число (КЧ) по формуле:

КЧ (ед) = (В)∙ 1,7, где А – количество 0,1н КМnО₄, пошедшее на титрование контрольной пробы, мл; В – количество 0,1н КМnО₄, пошедшее на титрование исследуемой пробы, мл; 1,7 – количество Н₂О₂, эквивалентное 1 мл 0,1 н КМnО₄, мг (1 мл 0,1н КМnО₄ эквивалентен 1 мл 0,1н Н₂О₂).

Клинико-диагностическое значение работы. Каталаза (КФ 1.11. 1.6) – геминовый фермент, который расщепляет гидроген пероксид на молекулярный кислород и воду. Показателем активности каталазы является каталазное число - количество миллиграмм гидроген пероксида, которое расщепляется одним микролитром (10^-6 л) крови за определенный промежуток времени. В норме каталазное число колеблется от 10 до 15 единиц. Оно снижается при ряде заболеваний, сопровождающихся кахексией (рак, анемия, туберкулез).

Литература

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 122-136.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 157-174.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 256-286.

4. Вороніна Л.М. та ін. Біологічна хімія. – Харків: Основа, 2000. – С. 172-228.

5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 305-316.

6. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 264-280.

7. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998. – С. 199-212, 222-231.

8. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Кобилянська Л.І. та ін./ За ред. О.Я. Склярова.–К.:Здоров’я,2002.–С.67-88.

9. Лабораторні та семінарські заняття з біологічної хімії: Навч. посібник для студентів вищих навч. закл. / Л.М. Вороніна, В.Ф. Десенко, А.Л. Загайко та ін. – Х.: Вид-во НФаУ; Оригінал, 2004. – С. 107-123.