5. Реакции лизиса (растворения)

Антиген – лизис обладает способностью растворять соответствующие микробные клетки. Лизисы способны на это только в присутствии комплемента.

Радиоиммунологический метод (РИМ).

Метод высокочувствителен, основан на применении меченных радиоактивным йодом антигенов. Чаще используют метод, при котором, меченые антигены адсорбированы на твердом носителе (твердофазовый вариант). Сущность метода заключается в определении количестве связанного антителами сыворотки крови пациента, меченного радиоактивным йодом антигена.

Выявления антигенов возбудителей, с помощью диагностических сывороток.

Выявления антигенов возбудителей – это нахождение в сыворотке крови токсинов возбудителей. Методы выявления антигенов возбудителей очень информативны и из-за легкости проведения и скорости получения конечного результата и относятся к быстрым методам (экспресс - методам) лабораторной диагностики.

Для диагностики чаще используются: РИФ; РНИФ; РА; РП; ПЦР; ИФА:

Реакция иммунофлюоресценции и реакция непрямой иммунофлюоресценции (РИФ, РНИФ).

Прямая РИФ.

На обезжиренном предметном стекле из сыворотки крови делают тонкие мазки-отпечатки, подсушивают и фиксируют, затем наносят диагностическую сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, ополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят в +.

РНИФ

При РНИФ с целью выявления антигенов мазок-отпечаток обрабатывают специфической не меченой сывороткой. Затем наносят люминесцирующую сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, ополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят также в +.

Методы просты, высокочувствительны и позволяют получить результат через 1-2 часа в даже условиях поликлиники.

Реакции агглютинации для обнаружения возбудителей (РА)

Агглютинацией называю склеивание возбудителей при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Её применяют для определения вида отдельных возбудителей в сыворотке крови больного.

В качестве диагностикума применяют монорецепторную, типоспецифическую, абсорбированную сыворотку.

Типы реакций агглютинации.

Ориентировочная реакция агглютинации.

Эту реакцию применяют для того, чтобы отобрать возбудитель из общей группы колонии. При агглютинации образуются хлопья, а если она отсутствуют, и реакции нет, то жидкость остается равномерно мутной.

Развернутая реакция агглютинации.

Эту реакцию проводят для идентификации бактерий в нескольких пробирках, в которых находятся двукратно разведенные диагностические сыворотки (1:100,1:200.1:400 т.д.) в которые добавляют по 1-2 капли взвеси возбудителей. Реакцию читают через 18-20 часов выдерживания в термостате.

Интенсивность реакции выражается «+».

Реакции преципитации.(2)

Реакцией преципитации (РП), называют осаждение из раствора антигена при воздействии на него иммунной сывороткой, и эритроцитами. С помощью РП можно выявить антиген в разведении 1:100000 и более.

Преципитиногены представляют собой очень мелкие частицы белково-полисахаридной природы, очень термоустойчивые и поэтому их получают кипячением.

Для реакции преципитации используют жидкие прозрачные антигены.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Модулярный метод диагностики.

Сущность метода заключается в многократном копировании фрагментов ДНК (РНК) возбудителя ферменном ДНК-полимеразой. Реакция проходит несколько циклов, в результате которых количество точных копий фрагментов ДНК (РНК) увеличивается, и многократно превышают количество всех остальных продуктов реакции. Реакция очень сложная, идет в 4 этапа, требует специального оборудования и специально подготовленных лаборантов.

Достоинствами метода является высокая чувствительность и специфичность позволяющая определить не только тип возбудителя, но и его подтип (квазивид).

С помощью ПЦР можно диагностировать многие заболевания, и он является наиболее перспективным методом лабораторной диагностики инфекционных болезней.

Метод иммуноферментативного анализа (ИФА).

Высокочувствительный метод, легко воспроизводим даже в условиях поликлиники, и не требует больших экономических затрат. Принцип метода заключается в использовании конъюгатов, который присоединяясь к иммунным комплексам, способствует их выявлению. Результаты анализа учитываются визуально и инструментально по оптической плотности окрашенных продуктов реакции.

Метод широко используется для нахождения токсинов вирусного гепатита В, иерсиниозных токсинов и т.д.

Иммунологические исследования (ИФА).

Исследуется иммунологический статус организма.

Иммуноферментативный анализ.

С помощью ИФА определяют антитела, относящиеся к классам IgM и IgG.

Определение различных классов иммуноглобулинов позволяет не только диагностировать болезнь, но и определить период течения инфекционного процесса. IgM появляются через 7-10 дней от начала заболевания, а IgG появляется в более поздние сроки, сохраняется длительно и обуславливают постинфекционный иммунитет.

С помощью ИФА можно различить многих возбудителей и определить характер течения многих инфекционных заболеваний (ВИЧ-инфекция, токсоплазмоз, герпетическая инфекция, микоплазмоз, ОРВИ и другие).

Реакция иммуноблотинга.

Также как и реакция РИФА применяется в основном для диагностики вирусных инфекций в крупных ЛПУ и НИИ.