4. Реакции иммунофлюоросцентции. ( риф).

Выделяют прямую и непрямую РИФ.

А). Прямая РИФ - простая реакция, но требующая большое количество меченых антимикробных сывороток.

Б). Непрямая РИФ - более сложная, но нужна одна меченая сыворотка.

При этом антиген с начало обрабатывают обычной иммунной сывороткой, а затем к иммунному комплексу добавляют меченую флюоросцентную сыворотку

Обычно идентификация антигена на первом этапе проводят иммунной кроличьей сывороткой. На втором этапе используется меченая сыворотка, полученная путем иммунизации иммуноглобулином кроликов и других животных.

А). Прямая РИФ.

На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки-отпечатки, подсушивают и фиксируют, затем наносят сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, ополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят +.

1. ++++ - очень яркое свечение вокруг микроорганизмов.

2. +++ - яркое свечение вокруг микроорганизмов.

3. ++ - обычная флюоресценция.

4. + - слабое свечение

5. Реакции лизиса (растворения)

Антиген – лизис обладает способностью растворять соответствующие микробные клетки. Лизисы способны на это только в присутствии комплемента.

Обнаружение возбудителей вирусных инфекций.

Наличие вируса в эмбрионе определяют с помощью 2 реакций:

1. Реакция связывания компонента.

2. Реакция гемагглютинации

Чаще применяется реакция гемагглютинации. В основе реакции лежит адсорбция вируса на поверхности эритроцитов, с дальнейшим их склеиванием. Активную гемагглютинацию вызывают вирусы гриппа, парагриппа и оспы. Иногда применяют реакцию торможения гемагглютинации – противоположную реакцию, тормозящую склеивание эритроцитов.

Наличие вирусов в культуре тканей чаще определяют с помощью двух реакции:

1. Реакция нейтрализации вирусов на культуре клеток.

2. Реакции торможения гемагглюнации (Р.Т.Г.А)

Реакция нейтрализации вирусов на культуре клеток.

Обычно используются нейтрализующие сыворотки.

Для этого полученный вирус накапливают в культуре клеток, и различные его разведения смешивают с не разведенной противовирусной сывороткой или делают наоборот – разводят сыворотку. Смесь инкубируют в термостате при 37 градусах 1-2 часа.

После этого смесью заражают культуру клеток, куриные эмбрионы или чувствительных животных и следят за реакцией. Отсутствие лизиса в культуре клеток тканей и патологических изменений в эмбрионе говорит о гибели вирусов, что и подтверждает достоверность поставленного диагноза.

Можно так же в серологической диагностике Р.Н.В. вводить вирусонейтролизующие антитела в организме больного человека с помощью известных диагностических штампов вирусов.

Обычно применяют метод «парных сывороток». О заболевании говорит 4-х и более кратное нарастание титра сывороток.

Реакция гемагглютинации.

В лунках планшета готовят 2-х кратно возрастающее разведение материала. Жидкость, в объеме 0,5 миллилитров, добавляя 0.25 миллилитров эритроцитов. Для контроля такую же смесь эритроцитов готовят в изотермическом растворе. Смеси культивируют в инкубаторе при температуре 37 градусов 30-60 мин. Результаты РГА по характеру агглютинации эритроцитов +.

1. ++++ - эритроциты в виде звездочки в осадке.

2. +++ - осадок с просветом.

3. ++ - осадок с большим просветом.

4. + - хлопьевидный осадок.

5. - - эритроциты в осадке в виде пуговицы.

РГА является группоспецифической, и не дает возможность определить вид вируса. Для этого применяют реакцию торможения гемагглютинации.