2. Реакции преципитации.

Реакцией преципитации (РП), называют осаждение из раствора антигена при воздействии на него иммунной сывороткой, и эритроцитами. С помощью Р.П. можно выявить антиген в разведении 1:100000 и более.

Преципитиногены представляют собой очень мелкие частицы белково-полисахаридной природы, очень термоустойчивые и поэтому их поучают кипячением.

Для реакции преципитации используют жидкие прозрачные антигены. Преципитирующие сыворотки обычно получают гипериммунизацией кроликов.

Типы реакции преципитации.

А) Реакция Асколя

В узкую пробирку осторожно наливает 0,5 мл сыворотки, а затем пипеткой осторожно, по стенке наливают 0,5 мл антигена. При положительной реакции через 5-10 минут на границе между двумя средами появляется диагностическое кольцо.

Эту реакцию применяют для диагностики сибирской язвы, туляремии и чумы.

Б) Реакция Оухтерлони.

Реакцию ставят на чашки Петри в луночках агарового геля (хорошо отмытым I % агар). Луночки делают на некотором расстоянии друг от друга. Антигена и сыворотки наливает в луночки отдельно. Реакцию читают через 24 -48 часов. При положительной реакции наблюдается движение антигена и антитела навстречу друг другу, при соединении они образуют комплекс в виде белой полосы. Широко применяют для диагностики болезней, возбудители которых образуют экзотоксин (дифтерия и т.д.).

3. Реакции связывания комплемента. (рск)

Сложные двухэтапные серологические реакции. Используют 5 ингредиентов, составляющих 2 системы.

а) антиген, антитело, комплемент

б) эритроциты барана, сенсибилизированные гемолитической сывороткой содержащей специфическое к ним антитело. Общее правило постановки реакции:

Исследуемая сыворотка подогревается на водяной бане до 50 градусов в течение 30 минут для активации собственного комплемента и разводится, начиная с 1:5 и т.д.

Антигеном является культуры бактерий, их лизиты, вирусы и вируссодержащие материалы

Комплемент - сыворотка морских свинок (сейчас применяют сухой комплемент)

Гемолитическая система состоим из смешанных в равном объеме гемолитической сыворотки в тройном тигре и 3% взвеси эритроцитов барана по осадку.

Реакцию ставят в объеме 2,5 миллилитров, из каждого ингредиента добавляя рабочую дозу, содержащую 0,5 мл.

В первую пробирку вносят сыворотку антиген и комплемент (первая система) Во вторую - сыворотку, комплемент и изотонический раствор. Вторая и третья пробирка - контрольные. Пробирки ставят в термостат на I час при температуре 37 градусов. Одновременно готовят гемолитическую систему, смешивая поровну гемолитическую сыворотку в тройном титре и 3% взвесь эритроцитов барана, которые добавляют по I мл во все три пробирки, после извлечения штатива из термостата. Затем их вновь ставят в термостат на 1 час.

Реакцию отмечает +.

1. + -слабоположительная реакция, жидкость равномерно окрашена, на дне пробирки не значительное количество эритроцитов.

2. ++ положительная реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки небольшое количество эритроцитов.

3. +++ положительная реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки большое количество эритроцитов.

4. ++++ резко положительная реакция, жидкость прозрачная, эритроциты повреждены все.

5. - реакция отрицательная, полный, гемолиз эритроцитов, жидкость интенсивно окрашена.

РСК, несмотря на её сложность, очень чувствительная специфическая реакция и широко применяется для диагностики многих инфекционных заболеваниях.