1. Реакции агглютинации (склеивания)

Агглютинацией называю склеивание бактерий при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Её применяют для определения вида отдельных бактерий в сыворотке крови больного.

В качестве диагностикума применяют монорецепторную, типоспецифическую, абсорбированную сыворотку. Реакции ставят на покровном стекле.

Типы реакций агглютинации.

А) Ориентировочная реакции агглютинации.

Эту реакцию применяют для того, чтобы отобрать из общей группы не агглютинирующиеся колонии. При агглютинации образуются хлопья, а если она отсутствуют, и реакции нет, то жидкость остается равномерно мутной.

Б) Развернутая реакция агглютинации.

Эту реакцию проводят для идентификации бактерий в нескольких пробирках, в которых находятся двукратно разведенные диагностические сыворотки (1:100,1:200.1:400 т.д.) в которые добавляют по 1-2 капли взвеси бактерий. Реакцию читают через 18-20 часов выдерживания в термостате.

Интенсивность реакции выражается в «+».

В) Реакция агглютинации для серологической диагностики инфекций. (РА)

При использовании реакции агглютинации (РА) для выявления в сыворотке больных антител к соответствующему патогенному микроорганизму берут 5 мл. крови пациента, получают сыворотку, разводят в изотоническом растворе от 1:50 до 1:1600 так как в концентрированном растворе могут быть нормальные антигены у здоровых людей или больных со схожими болезнями и выдерживают в термостате в течении 20 минут для инактивации посторонних белковых примесей.

В качестве антигена используют взвесь известных убитых микроорганизмов (диагностикум) с которыми безопасно работать. Реакцию ставят, как и развернутую реакции агглютинации в пробирках.

Диагностическое значение имеют разведения титра 1:200-1:400 и более. Чем больше разведение, тем реакция более достоверна. Обычно используют, метод парных сывороток, – проводя, идентичную реакцию спустя 5-7 дней и сравнивают, полученные результаты. Титр агглютинации должен повышаться и реакция должна происходить в больших разведениях, чем предыдущая, т.к. происходит накопление антител.

Г) Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Ставится для обнаружения в сыворотки крови больного полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий, и вирусов и антигенные комплексы которых с иммуноглобулинами при классической реакции агглютинации увидеть не удается.

Для РНГА готовят в научно исследовательских институтах (НИИ) эритроцитарные антигенные диагностикумы. Для этого на эритроциты барана, после предварительной их обработки, искусственно насаждают антигены. Для проведения реакций используют специальные луночковые пластмассовые пеналы. Сыворотку больного разводят от 1:10 до 1:1280 и далее разливают по луночкам, туда же добавляют по 0,25 мл диагностикума. Результаты читают через 2 часа и оценивают в +.

а) ++++ эритроциты равномерно покрывают всю лунку в виде зонтика.

б) +++ эритроциты в виде зонтика, в центре небольшое кольцо из нескольких эритроцитов.

в) + + то же самое, но не связанных эритроцитов больше.

г) + преобладают в основном не склеенные эритроциты.

д) - сплошные не склеенные эритроциты в виде диска, или пуговицы.