5. Количественное определение флавоноидов в экстрактах шиповника в пересчете на рутин

Для количественного определения флавоноидов использовали спектрофотометрический метод, в качестве эталона использовали чистый препарат рутина. В электронном спектре поглощения рутина имеется наличие двух максимумов при 256 и 364 нм, что согласуется с литературными данными.

• Методика приготовления спиртового раствора рутина (С=1,98·10^-5 г/мл)

Навеску рутина 0,00215г разбавили 5 мл ацетона. Тщательно перемешали до полного растворения при нагревании. Из полученного раствора дозатором отобрали 230 мкл и разбавили 5 мл ацетона.

УФ-спектр рутина относительно спирта (С=1,98·10^-5 г/мл)

Определение содержания флавоноидов сводится к определению светопоглощения исследуемых экстрактов в пересчете на светопоглощение калибровочных растворов рутина. С этой целью строили калибровочные кривые спектров поглощения ацетоновых растворов рутина. Для построения калибровочных кривых готовили серию растворов, содержащих рутин с концентрациями (%):1,98 ∙10^-5; 0,99∙10^-5; 0,596∙10^-5. Раствором сравнения служил ацетон. Калибровочные кривые представлены ниже.

Калибровочный график рутина при λ=358 нм

Из данного уравнения прямой выражаем Х – количество флавоноидов (г/мл)

Х=

Где Y – оптическая плотность экстракта при λ=358 нм.

Суммарное содержание флавоноидов в экстрактае шиповника в пересчете на рутин:

6. УФ-спектры экстрактов шиповника с хлоридом алюминия относительно ацетона

Для минимизации вклада сопутствующих веществ в оптическую плотность испытуемого раствора, количественное определение флавоноидов проводят по методике, в которой использована реакция комплексообразования флавоноидов с хлоридом алюминия. В этом случае наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов, который обнаруживается в УФ-спектре в виде максимума в области 358-361 нм, что подтверждается следующими спектрами:

УФ-спектр ацетонового раствора рутина (С=2·10^-5 г/мл)

• Методика приготовления раствора экстракта для снятия спектров

К 1,5 мл экстракта (с которого снимали УФ-спектр относительно спирта) добавляли 1,5 мл 2% спиртового раствора AlCl₃, оставляли на 30 минут. Далее снимали спектр в диапазоне λ=320-800 нм. Раствор сравнения – ацетон.

7. Дифференциальная спектрофотометрия

Для определения количественного содержания флавоноидов предлагается метод дифференциальной спектрофотометрии. Суть этого метода заключается в измерении оптической плотности комплексов (возникающих между молекулами флавоноидов и ионами Al(III)) в максимуме поглощения (чаще всего он наблюдается в пределах 390 - 410 нм). Измерение проводят относительно аналогично приготовленного раствора фитоизвлечения, но без добавки комплексообразователя. При этом практически полностью нивелируется мешающее влияние на количественное определение флавоноидов других, присутствующих в анализируемом фитообъекте, фенольных и прочих соединений.

Приведем дифференциальный спектр стандартного образца рутина (С=1,98·10^-5 г/мл).

Дифференциальный спектр рутина (С=1,98·10^-5 г/мл)

УФ-спектров ГСО рутина показало, что раствор данного стандарта в присутствии хлорида алюминия имеет максимум поглощения при 411 нм, в том числе и в дифференциальном варианте.

Дифференциальный спектр экстракта шиповника