- •Учебно-методический комплекс
- •Раздел 3. Методические рекомендации для студентов, в том числе для самостоятельной аудиторной и внеаудиторной работы Ижевск 2008
- •Раздел 1: морфология микроорганизмов. Лабораторное занятие №1.
- •Работа № 1: Правила работы в бактериологической лаборатории.
- •Работа №2: Устройство оптического микроскопа. Иммерсионная система.
- •Работа №3: Правила приготовления микропрепаратов. Приготовление микропрепаратов из чистой культуры.
- •Работа № 4: Приготовление мазков из культур с плотной питательной среды и окраска их простым методом.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №2.
- •Работа №1: Отличия прокариот и эукариот:
- •Работа №2: Сложные методы окраски бактерий. Метод Грама.
- •Работа № 4: Методы определения подвижности микробов. Темнопольная микроскопия.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №3.
- •По Граму.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие № 4.
- •Раздел 2. Физиология микроорганизмов. Лабораторное занятие № 5
- •Работа № 1: Способы получения чистых культур бактерий.
- •Работа № 2: Основные требования к питательным средам
- •Работа № 3: Жидкие и плотные питательные среды.
- •Работа № 4: Методы механического разобщения бактерий. Техника посева бактерий бак.Петлей.
- •Работа № 5: Схема выделения чистой культуры аэробных бактерий (зарисовать)
- •Работа № 6: Характер роста бактерий на жидких питательных средах
- •Работа №7: Описание полонии (паспорт колонии).
- •Работа №1: Среды для определения сахаролитических свойств бактерий.
- •Работа № 2: «Пестрый ряд» кишечной палочки
- •Работа № 3: Факторы патогенности стафилококка
- •Работа 5: Среды для выращивания анаэробов
- •Работа № 7: Схема выделения чистой культуры анаэробов.
- •Работа № 8: Изучение чистой культуры, выделенной самостоятельно при проведении уирс
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие № 7
- •Работа № 1: Техника овоскопии, заражения и вскрытия куриного эмбриона.
- •Работа №2: Культуры клеток для культивирования вирусов.
- •Работа №3: Питательные среды для культур клеток:
- •Работа №4: Методы индикации вирусов
- •Работа №5: Строение бактериофага.
- •Работа № 6: Получение бактериофагов.
- •Работа № 7: Методы титрования фагов.
- •Работа №8: Методы фагодиагностики:
- •Работа № 9: Диагностические и лечебно-профилактические фаги.
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №8.
- •Лабораторное занятие №9
- •Работа № 4: определение лизоцима в биологических жидкостях методом титрования
- •Основные понятии по теме
- •Работа № 1: ориентировочная реакция агглютинации (ра) для определения неизвестной культуры
- •Работа №2: развернутая реакция агглютинации (ра) при определении неизвестной культуры
- •Работа № 4: Реакция непрямой гемагглютинации (рнга) при серодиагностике инфекций
- •Работа № 5: Реакция иммунофлюоресценции (риф)
- •Работа № 7: диагностические препараты, используемые для постановки изучаемых реакций
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторное занятие № 11
- •При определении антител в сыворотке больного
- •Работа №6: реакция нейтрализации in vivo на белых мышах при диагностике ботулизма
- •Работа №7: иммунопрепараты по теме занятия
- •Вопросы для самоконтроля:
- •Лабораторное занятие №12
- •Работа №1: кожно-аллергические пробы (кап) с инфекционными аллергенами
- •Иммуномодуляторы:
- •Работа №2: иммуноферментный анализ (ифа) для определения антител в парных сыворотках
- •Работа №3: реакции розеткообразования (е-рок, еас-рок) и бластной трансформации лимфоцитов (рбтл)
- •Работа №4: оценка иммунного статуса человека и иммунограмма здорового человека
- •Работа №5: реакция торможения гемагглютинации (ртга) для идентификации вируса гриппа
- •Работа №6: ртга в парных сыворотках на определение антител при серодиагностике гриппа
- •Работа №7: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» при идентификации вируса полиомиелита
- •Работа №8: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» на определение антител при серодиагностике полиомиелита
- •Работа №9: иммунопрепараты по изучаемой теме
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторное занятие № 16
- •Работа № 1: классификация вакцин
- •Работа №2: Календарь профилактических прививок приказ от 27.06.2001 № 229
- •Работа №3: приготовление убитой вакцины
- •Других иммунопрепаратов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Лабораторное занятие № 17
- •Цель: оценить степень усвоения теоретического материала и практических навыков по теме: «Инфекция и иммунитет»
- •Практическое занятие № 2
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов а и в
- •Лабораторная диагностика брюшного тифа
- •Возбудители сальмонеллезных токсикоинфекций
- •Возбудители внутрибольничных сальмонелезных инфекций
- •Возбудитель кишечного иерсиниоза
- •Возбудители кишечного кампилобактериоза
- •Возбудитель холеры
- •Методы экспресс- диагностики:
- •Возбудитель ботулизма
- •Лабораторная диагностика ботулизма
- •Возбудитель протейной токсикоинфекции
- •Стафилококки
- •Лабораторная диагностика
- •Проблема госпитальной стафилококковой инфекции
- •Возбудители:__________________________________________________________________________________________________________
- •Стрептококки
- •Гломерулонефрит
- •Менингококковая инфекция
- •Менингококковый сепсис
- •Менингит
- •Практическое занятие № 6
- •Микоплазмы пневмонии
- •Хламидии пневмонии
- •Лабораторная диагностика
- •Гемофильная палочка
- •Бактериологический метод диагностики
- •Возбудитель столбняка
- •Возбудители анаэробной газовой инфекции
- •Диагностика раневой анаэробной инфекции
- •Лабораторная диагностика
- •Практическое занятие № 8
- •Возбудитель дифтерии
- •Лабораторная диагностика
- •Определение антитоксического иммунитета:
- •Лабораторная диагностика
- •Рнга практическое занятие № 9
- •Возбудители туберкулеза
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудители актиномикоза
- •Лабораторная диагностика
- •Бактериологический.
- •Серологический.
- •Лабораторная диагностика
- •Практическое занятие № 10
- •Возбудители бруцеллеза
- •Лабораторная диагностика
- •Ра: Реакция Хеддельсона
- •Ифа, рнга, рск, кап
- •Прямая риф, рнга, рск, кап
- •Алгоритм ответа
- •Культивирование: лабораторные животные
- •Работа 1: Культура фибробластов в норме и при цпд вируса.
- •Работа 4. Идентификация вируса гриппа в ртга
- •Работа 6: рск при диагностике кори.
- •Сравнительная характеристика возбудителей вирусных респираторных инфекций (таблица)
- •Лабораторное занятие №13
- •Работа 1: Реакция нейтрализации «цветня проба» при идентификации вируса полиомиелита в исследуемом материале.
- •Работа реакция нейтрализации по типу «цветной пробы» на определение антител при серодиагностике полиомиелита
- •Работа 1: Оценить готовый результат ифа в парных сыворотках при серодиагностике клещевого энцефалита (определение IgM)
- •Работа3.: Метод флюоресцирующих антител-мфа (н риф) при серодиагностике глпс.
- •Практическое занятие № 15.
- •Работа 1: тельца Пашена и тельца Гварниери при натуральной оспе Работа 2: структура вируса вич Антигены вич
- •Работа 3: иммуноблотинг при диагностике вич-инфекции
- •Практическое занятие № 16.
- •Практическое занятие № 17
- •Гонококк
- •Бледная трепонема
- •Возбудители урогенитального хламидиоза
- •Возбудители риккетсиозов
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудители возвратного тифа
- •Лабораторная диагностика
- •Список основной литературы
Работа №2: Сложные методы окраски бактерий. Метод Грама.
Для выявления определенных структур бактерий применяют сложные методы окраски, в основе которых лежит учет химических особенностей этих структур и использование контрастных красителей.
Метод Грама позволяет выявить особенности строения клеточной стенки бактерий.
1. Генцианвиолет (бумажки по Синеву) смочить водой _____мин.
2. Раствор Люголя –_______ мин.
3. Этиловый спирт –________________
4. Промывание водой
5. Фуксин Пфейффера – ____ мин.
6. Промыть водой.
При этом методе окраски одни бактерии не обесцвечиваются спиртом и сохраняют окраску_____________ красителя, вторые обесцвечиваются спиртом и окрашиваются _____________ красителем.
В зависимости от строения клеточной стенки все микроорганизмы подразделяются на Грам (+) и Грам (-). Способность Грам (+) бактерий удерживать генцианвиолет в комплексе с йодом связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с краской.
Особенности строения клеточной стенки Грам (+)и Грам (-) бактерий.
Признак
|
Грам (+) |
Грам (-) |
Толщина КС
|
|
|
Пептидогликан |
|
|
% ПГ от КС
|
|
|
Тейхоевые кислоты |
|
|
Липиды |
|
|
Белки-порины |
|
|
Грам (+) бактерии окрашиваются в _____________________цвет, потому, что__________________________________________________
____________________________________________________________.
Грам (-) бактерии окрашиваются в ____________________цвет,
потому, что __________________________________________________
____________________________________________________________.
Грам (+)_____________________
Грам (- )_____________________
Работа №3: Техника окраски другими сложными методами.
1/Метод Нейссера позволяет определить зерна волютина.
ацетат синьки Нейссера (кислый краситель)- ___ мин.
Люголь - _____ сек.
Промыть водой.
Везувин (щелочной краситель)- ____мин.
Промыть водой.
Зерна волютина, как щелочные образования, окрашиваются кислым красителем в_____________ цвет. Цитоплазма бактериальной клетки окрашивается щелочным красителем в_______________ цвет.
Коринебактерии дифтерии
Зерна волютина
2/Метод Циля-Нильсена позволяет определить
кислотоустойчивые бактерии.
Карболовый фуксин Циля - _____ мин.
Промывание водой.
5% серная кислота – _____ мин.
Промывание водой
Метиленовая синь - ______ мин.
Промывание водой.
Кислотоустойчивые бактерии ________________________________, поэтому окрашиваются в ______________________цвет.
Кислотонеустойчивые бактерии и структуры ______________________, поэтому красятся в ___________________________цвет.
Туберкулезные палочки в мокроте
Волокна мокроты
Лейкоциты
3/Метод Ожешко позволяет окрасить споры бактерий.
На нефиксированный мазок 0,5% соляной кислоты - 3 мин.
с прогреванием (протрава)
Промывание водой (осторожно)
Фиксация в пламени спиртовки.
Окраска по Цилю-Нильсену.
Спора, как кислотоустойчивая структура красится в ______________ цвет, а цитоплазма клетки, как кислотонеустойчивая структура – в __________________________цвет.
Споры бацилл сибирской язвы.
4/Метод Бурри-Гинса позволяет выявить капсулу бактерий (называется негативным, так как капсула не прокрашивается).
1. В каплю черной туши, внести культуру, смешать и 2 стеклом
со шлифованным краем приготовить мазок, как из крови.
2. Высушить.
З. Зафиксировать (_________________________________)
3. Фуксин Пфейффера - __________ мин.
Капсула не воспринимает красители, поэтому окрашиваем бактерии и окружающий фон. Фон окрашивается тушью в _________ цвет, а возбудитель фуксином в __________ цвет, при этом капсула видна в виде __________________ ободка вокруг бактерий.
Клебсиеллы пневмонии
капсула.
Капсулу можно выявить и при простом методе окраски, если исследовать мазки-отпечатки из органов. При этом клетки органов создают окрашенный фон, что позволяет увидеть капсулу вокруг прокрашенных бактерий.
Бациллы сибирской язвы в мазке-отпечатке
капсула
клетки органов