- •Методическое пособие к занятию по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований № 9. Тема: «качественное обнаружение гормонов-белков и гормонов, производных аминокислот»
- •Инсулин
- •Биологическое действие инсулина
- •I. Влияние на обмен углеводов:
- •III. Влияние на обмен белков:
- •IV. Влияние на минеральный обмен:
- •Глюкагон
- •Биологическое действие глюкагона
- •I. Влияние на обмен углеводов:
- •Адреналин
- •Биологическое действие адреналина
- •I. Влияние на углеводный обмен (прежде всего в скелетных мышцах, а затем в печени):
- •Гормональные механизмы реализации стресса
- •Тиреоидные гормоны
- •Биологическое действие йодтиронинов
- •Практическая работа
- •Инсулин
- •Глюкагон
- •Биологическое действие глюкагона
- •Адреналин
- •Гормональные механизмы реализации стресса
- •Тиреоидные гормоны
- •Практическая работа
Тиреоидные гормоны
Йодтиронины - тироксин (тетрайодтиронин) - Т4 и трийодтиронин Т3 - синтезируются в щитовидной железе под влиянием тиреотропина, выделяемого гипофизом. На выделение тиреотропина гипофизом влияет тиреолиберин, секретируемый гипоталамусом. Химическая природа йодтиронинов - йодированные производные аминокислоты тирозина. Клетками-мишенями для йодтиронинов являются гепатоциты печени, адипоциты жировой ткани, клетки мышечной ткани, в том числе миокарда. Нет рецепторов к йодтиронинам в клетках соединительной ткани, мозга.
Механизм действия: 10% - мембранно-внутриклеточный, 90% - цитозольный.
БИОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ЙОДТИРОНИНОВ
Активируют Активирует Активирует Влияет на
биосинтез более репликацию протеолиз белков дифференцировку
100 окислительно- ДНК в тканях ткани
-восстановительных
ферментов (тканевое дыхание)
Оказывает
пролиферативный
эффект
Вывод: стимулируют основной обмен и биологическое окисление.
Практическая работа
Работа №1 Обнаружение инсулина биуретовой реакцией
В пробирку к 5 каплям раствора инсулина прибавляют 5 капель 10% -го раствора едкого натра и 1 каплю 1 % -го раствора сернокислой меди. Перемешивают, встряхивают. Наблюдают появление фиолетового окрашивания. Объяснить механизм реакции, сделать выводы.
Работа №2 Обнаружение инсулина реакцией с сульфосалициловой кислотой
В пробирку вносят 1 мл раствора инсулина, добавляют 5 капель 20% -го раствора сульфосалициловой кислоты. Наблюдают выпадение осадка белого цвета. Объяснить механизм реакции, сделать вывод.
Работа №3 Обнаружение инсулина реакцией Фоля
В термостойкую пробирку вносят 5 капель раствора инсулина, 5 капель 30%-го раствора едкого натра и 1—2 капли 5% -го раствора уксуснокислого свинца. При длительном нагревании жидкость в пробирке буреет и выпадает черный осадок сернистого свинца. Объяснить механизм реакции, сделать вывод.
Работа №4 Реакция Геллера на инсулин
К 10 каплям концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки приливают равный объем (10 капель) раствора инсулина. Пробирку наклоняют под углом 45° так, чтобы жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виде небольшого кольца.
Работа №5 Качественные реакции обнаружения адреналина
а) Реакция с хлоридом железа (III).
В пробирку вносят 1 мл адреналина (1:1000), прибавляют 1 каплю 3% -го раствора хлорида железа (III) и перемешивают. Появляется изумрудно-зеленое окрашивание, затем добавляют 1 каплю 10%-го раствора едкого натра - возникает вишнево-красное окрашивание. Объясните механизм реакции, сделайте вывод.
б) Реакция с диазореактивом.
К 1 мл 1%-й сульфаниловой кислоты прибавляют 1 мл 5%-го раствора нитрита натрия (получается диазореактив). К диазореактиву добавляют 1,5 мл раствора адреналина (1:1000) и 1мл 10%-го раствора карбоната натрия. Перемешивают. Раствор окрашивается в красный цвет. Объясните механизм реакции, сделайте вывод.
Работа №6 Реакция на гормоны щитовидной железы (тироксин)
В фарфоровой ступке измельчают 5 таблеток тиреоидина или 100 мг высушенной щитовидной железы. Образованную массу переносят в колбу с помощью 5 мл воды, добавляют 5 мл 10%-го раствора едкого калия и кипятят 15 мин на электрической печи с асбестовой сеткой. К 3 мл охлажденного гидролизата добавляют 10%-й раствор серной кислоты до кислой реакции по лакмусу. Затем приливают 5 капель 1 %-го раствора крахмала и 1 мл раствора йодата калия для окисления йодида калия. Молекулярный йод, который выделяется, дает синее окрашивание с крахмалом. Сделайте вывод.