- •Методическое пособие к занятию по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований № 9. Тема: «качественное обнаружение гормонов-белков и гормонов, производных аминокислот»
- •Инсулин
- •Биологическое действие инсулина
- •I. Влияние на обмен углеводов:
- •III. Влияние на обмен белков:
- •IV. Влияние на минеральный обмен:
- •Глюкагон
- •Биологическое действие глюкагона
- •I. Влияние на обмен углеводов:
- •Адреналин
- •Биологическое действие адреналина
- •I. Влияние на углеводный обмен (прежде всего в скелетных мышцах, а затем в печени):
- •Гормональные механизмы реализации стресса
- •Тиреоидные гормоны
- •Биологическое действие йодтиронинов
- •Практическая работа
- •Инсулин
- •Глюкагон
- •Биологическое действие глюкагона
- •Адреналин
- •Гормональные механизмы реализации стресса
- •Тиреоидные гормоны
- •Практическая работа
Биологическое действие йодтиронинов
1. Индуцируют биосин тез более 100 окислительно-восстановительных ферментов, активируя
тканевое дыхание.
2. Активируют ферменты челночных переносов водорода из цитозоля в митохондрии, усиливая
активность ЦПЭ.
3. Активируют процессы репликации ДНК.
4. Активируя аденилат-циклазу, затем каскадным механизмом:
а) активируют гликогенфосфорилазу, вызывая распад гликогена, повышают уровень глюкозы в
крови; снижают биосинтез гликогена, инактивируя гликогенсинтазу;
б) активируют ТАГ-липазу, усиливают липолиз (распад) триацилглицеринов.
Активируют протеолиз белков в тканях.
Активируют работу натрий-калиевого насоса.
Через повышение генерации АТФ усиливают теплопродукцию.
Оказывают пролиферативный эффект.
Влияют на дифференцировку тканей.
В крови основная часть йодтиронинов находится в связи с белками: тироксинсвязывающим глобулином (ТСГ), тироксинсвязывающим преальбумином (ТСПА), тироксинсвязывающим альбумином (ТСА). Гормональное действие оказывают лишь свободные формы гормонов. Биосинтез белков, связывающих йодтиронины, активируется половыми гормонами, поэтому при климаксе, после удаления яичников, снижении выделения половых гормонов увеличивается в крови количество свободных форм йодтиронинов, что ведет к агрессивным состояниям.
Т4 функционирует 15 дней, Т3 функционирует 3 дня.
Катаболизм йодтиронинов происходит вначале в печени, сердце, почках, мышцах под влиянием трансами-назы, йодтирониндегалогеназы и тироксиндегалогеназы, что ведет к образованию дифенильных производных, которые после образования фенолов в печени подвергаются реакции конъюгации с ФАФС и УДФ ГК с образованием парных серных и глюкуроновых кислот, выделяемых почками с мочой.
Патология:
гиперфункция щитовидной железы - Базедова болезнь (болезнь Гревса),
гипофункция щитовидной железы - микседема,
эндемический зоб.
Практическая работа
Работа №1 Обнаружение инсулина биуретовой реакцией
В пробирку к 5 каплям раствора инсулина прибавляют 5 капель 10% -го раствора едкого натра и 1 каплю 1 % -го раствора сернокислой меди. Перемешивают, встряхивают. Наблюдают появление фиолетового окрашивания.
Объяснить механизм реакции, сделать выводы.
Работа №2 Обнаружение инсулина реакцией с сульфосалициловой кислотой
В пробирку вносят 1 мл раствора инсулина, добавляют 5 капель 20% -го раствора сульфосалициловой кислоты. Наблюдают выпадение осадка белого цвета.
Объяснить механизм реакции, сделать вывод.
Работа №3 Обнаружение инсулина реакцией Фоля
В термостойкую пробирку вносят 5 капель раствора инсулина, 5 капель 30%-го раствора едкого натра и 1—2 капли 5% -го раствора уксуснокислого свинца. При длительном нагревании жидкость в пробирке буреет и выпадает черный осадок сернистого свинца.
Объяснить механизм реакции, сделать вывод.
Работа №4 Реакция Геллера на инсулин
К 10 каплям концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки приливают равный объем (10 капель) раствора инсулина. Пробирку наклоняют под углом 45° так, чтобы жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виде небольшого кольца.
Работа №5 Качественные реакции обнаружения адреналина
а) Реакция с хлоридом железа (III).
В пробирку вносят 1 мл адреналина (1:1000), прибавляют 1 каплю 3% -го раствора хлорида железа (III) и перемешивают. Появляется изумрудно-зеленое окрашивание, затем добавляют 1 каплю 10%-го раствора едкого натра - возникает вишнево-красное окрашивание.
Объясните механизм реакции, сделайте вывод.
б) Реакция с диазореактивом.
К 1 мл 1%-й сульфаниловой кислоты прибавляют 1 мл 5%-го раствора нитрита натрия (получается диазореактив). К диазореактиву добавляют 1,5 мл раствора адреналина (1:1000) и 1мл 10%-го раствора карбоната натрия. Перемешивают. Раствор окрашивается в красный цвет.
Объясните механизм реакции, сделайте вывод.
Работа №6 Реакция на гормоны щитовидной железы (тироксин)
В фарфоровой ступке измельчают 5 таблеток тиреоидина или 100 мг высушенной щитовидной железы. Образованную массу переносят в колбу с помощью 5 мл воды, добавляют 5 мл 10%-го раствора едкого калия и кипятят 15 мин на электрической печи с асбестовой сеткой. К 3 мл охлажденного гидролизата добавляют 10%-й раствор серной кислоты до кислой реакции по лакмусу. Затем приливают 5 капель 1 %-го раствора крахмала и 1 мл раствора йодата калия для окисления йодида калия. Молекулярный йод, который выделяется, дает синее окрашивание с крахмалом. Сделайте вывод.
4 курс 1 с с/с
МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ К ЗАНЯТИЮ ПО ОСНОВАМ БИОХИМИИ С МЕТОДАМИ КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ № 9.
Тема: «КАЧЕСТВЕННОЕ ОБНАРУЖЕНИЕ ГОРМОНОВ-БЕЛКОВ И ГОРМОНОВ, ПРОИЗВОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ»
Гормоны-белки: инсулин, пролактин, соматотропин, фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), лютеинизирующий гормон (ЛГ) и др.
Гормоны-пептиды: глюкагон, адренокортикотропный гормон (АКТГ), вазопрессин и др.
Гормоны, производные аминокислот: адреналин, тироксин, трийодтиронин.