Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции Выявление и идентификация Pseudomonas aeruginosa.

Метод основан на выявлении бактерий вида Pseudomonas aeruginosa с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выделенных культур бактерий по биохимическим свойствам.

Методика проведения анализа.

10,0см³ исследуемого материала из разведения 1:10 вносят в стеклянный флакон объемом 200,0см³, содержащий 100,0см³ мясопептонного бульона с 0,1% глюкозой (среда накопления). Смесь перемешивают и инкубируют при температуре 37⁰С в течение 24-48 часов.

При наличии признаков роста на МПБ с 0,1% глюкозой (диффузное помутнение) петлей делают высев на мясопептонный агар (МПА) с 0,1% глюкозой для выделения чистой культуры. Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 24 часов.

При наличии роста зеленоватых, флюоресцирующих колоний, обладающих характерным запахом и окрашивающих среду, из них готовят мазки и окрашивают по Граму.

Колонии, подозрительные по морфологии (каждую отдельно), пересевают петлей на скошенный агар (МПА с 0,1% глюкозой) для накопления чистой культуры. Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 24 часов.

Накопленные выделенные культуры проверяют на чистоту путем микроскопии, а чистые культуры затем исследуют на наличие цитохромоксидазы (оксидазный тест).

Оксидазоположительные культуры пересевают на две чашки со средой Кинг-А – среда для выявления пигмента пиоцианина.

На этой среде культура Pseudomonas aeruginosa образует проникающий в среду пигмент феназинового ряда, имеющий буроватый оттенок с вариантами от сине-зеленого (пиоцианин) до коричнево-красного.

Одну чашку с посевами на среде Кинг-А инкубируют при температуре 37⁰С в течение 24-48 часов (стандартные условия).

Вторую чашку с посевами на среде Кинг-А для дополнительного подтверждения принадлежности к виду Pseudomonas aeruginosa инкубируют при температуре 42⁰С в течение 24 часов.

При данных условиях культура Pseudomonas aeruginosa растет с образованием сине-зеленого пигмента.

Если в результате исследований обнаружены колонии грамотрицательных неспорообразующих палочек, дающих положительную оксидазную реакцию, образующих пигмент или без него и дающие рост при 42⁰С, считают, что парфюмерно-косметическое средство контаминировано Pseudomonas aeruginosa.

Санитарно-микробиологическое исследование аптечного оборудования и лекарственных средств Определение стерильности лекарственных средств.

Определение микробной обсемененности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием.

Пробу для исследования отбирают в количестве не менее чем 50,0г или 50,0мл препарата.

10,0г или, соответственно, 10,0мл отобранной пробы разводят стерильно 0,1М фосфатным буфером (рН 7,0) или соответствующей питательной средой, доводя конечный объем до 100,0мл.

1,0мл препарата, разведенного 1:10, вносят в 2 пробирки с 4,0мл расплавленного и охлажденного до 40-45⁰С МПА с 0,1% глюкозой. Смесь перемешивают и выливают в 2 чашки Петри с аналогичной питательной средой (МПА с 0,1% глюкозой).

Полученные чашки инкубируют при 37⁰С в течение 5 суток, после чего подсчитывают общее число колоний бактерий, затем находят среднее арифметическое для двух чашек и таким образом, высчитывают количество бактерий в 1,0г (1,0мл) образца.

Определение стерильности инъекционных препаратов.

Из каждой серии препарата из 10 000 флаконов берут 3 флакона и дополнительно по 1 флакону от каждых последующих 10 000 флаконов.

Для посева используют МПБ с 0,5% глюкозы, среду Китт-Тароцци, среду Сабуро.

Для проверки стерильности все среды после стерилизации выдерживают в термостате при 37⁰С в течение 5 суток, а среду Сабуро в течение 24 часов.

Определение стерильности антибиотиков.

Перед посевом содержимое каждого флакона с препаратом растворяют в стерильной дистиллированной воде и засевают в 15 пробирок с МПБ и глюкозой, а в 5 пробирок со средой Сабуро по 0,2мл, создавая концентрацию антибиотика 2500 ЕД.

Засеянные среды культивируют 5 суток при ежедневном просмотре при различных температурах:

– при 37⁰С – 10 пробирок с МПБ и глюкозой,

– при 24⁰С – 5 пробирок со средой Сабуро.

С целью проверки инактивации антибиотика одну из проб с МПБ с глюкозой одновременно засевают 18-часовой культурой соответствующего тест-микроорганизма из расчета 250 микробных клеток на 1,0мл среды и выдерживают при 37⁰С в течение 5-ти суток.

При наличии роста на питательной среде (диффузное помутнение) через 18 часов культивирования посев повторяют из удвоенного количества образцов на двойном количестве сред.

При наличии роста хотя бы в единичных пробах препарат считают нестерильным.

Определение стерильности препаратов, не обладающих бактериостатическим действием.

Препарат, не обладающий бактериостатическим действием, засевают:

– по 0,5мл в 5 пробирок с МПБ с глюкозой,

– по 0,2мл в 3 пробирки с МПА;

– по 0,5мл в пробирки со средой Китт-Тароцци – для выделения анаэробов;

– по 0,5 мл в 3 пробирки со средой Сабуро – для выявления плесневых и дрожжевых грибов.

Засеянные среды культивируют 7 суток при ежедневном просмотре при различных температурах:

– при 37⁰С – МПБ с глюкозой (3 пробирки), МПА (3 пробирки), среда Китт-Тароцци (3 пробирки);

– при 24⁰С – МПБ с глюкозой (2 пробирки), среда Сабуро (3 пробирки);

При наличии роста на средах посевы повторяют из удвоенного количества образцов на двойном количестве сред.

Определение стерильности препаратов, обладающих бактериостатическим действием.

По 5,0мл препарата вносят в колбы с 200,0мл МПБ с глюкозой и инкубируют в течение 3 суток.

После этого делают высев так же, как и препаратов, не обладающих бактериостатическим действием.

Дальнейшее исследование проводят, как и в предыдущем случае, с препаратами, не обладающими бактериостатическим действием.

22