Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом.

Титрационный метод может быть использован в следующих случаях:

– при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом мембранных фильтров;

– при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;

– при наличии в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.

Титрационный метод основан на накоплении бактерий при посеве установленного (определенного) объема воды в жидкую питательную среду с последующим пересевом на среду Эндо.

Учет результатов анализа (рост колоний) проводится после инкубации посевов на среде Эндо при 38±1⁰С в течение 18-20 часов.

Если нет роста, то посевы оставляют в термостате и повторно просматривают через 48 часов.

При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий (темно-красных, красных с металлическим блеском, выпуклых с красным центром), дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном объеме среды.

Для определения наличия термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) делают посев 2-3 изолированных типичных лактозоположительных колоний (темно-красных, красных с металлическим блеском) в пробирки, содержащих среду с лактозой, предварительно прогретую до 44⁰С.

После засева пробирки инкубируют при 44±0,5⁰С в течение 24 часов, хотя уже через 4-6 часов допускается первичный учет результатов роста бактерий – образования кислоты и газа.

При выявлении кислотообразования и газообразования у выделенных культур бактерий выдают положительный ответ о наличии в исследуемом объеме воды термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ).

При отсутствии кислоты и газа при учете (просмотре) посевов инкубацию проводят в течение еще 24 часов при 44⁰С и выдают окончательный ответ.

Определение спор сульфитредуцирующих клостридий методом фильтров.

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие облигатно анаэробные палочковидные микроорганизмы рода Clostridium, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при 44±1⁰С в течение 16-18 часов.

Метод определения содержания сульфитредуцирующих клостридий основан на выращивании посевов из анализируемых проб воды на железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа выросших колоний.

Исследуемую пробу воды (20,0мл) для исключения возможности развития вегетативных форм бактерий прогревают при 75⁰С в течение 15 минут в пробирке на водяной бане.

Прогретую пробу фильтруют через мембранный фильтр, который затем помещают на железосульфитный агар (чашки Петри залиты питательной средой тонким слоем) фильтрующей поверхностью вниз – так, чтобы под фильтром не было пузырьков воздуха. Затем всю поверхность среды с фильтром заливают расплавленным железосульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий.Посевы культивируют при 44±1⁰С в течение 16-18 часов, хотя окончательный результат получают через 24 часа и выражают его числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфитредуцирующих бактерий в 20,0мл воды. Если не отмечен рост черных колоний на всех фильтрах, то в протоколе анализа дают ответ «сульфитредуцирующих клостридий не обнаружено в 20,0мл воды».

При наличии черных колоний бактерий – их подсчитывают на всех фильтрах, а результат анализа вычисляют по формуле:

X = (a х 20) / V, где

Х – число клостридий в 20,0мл;

а – число подсчитанных колоний;

V – профильтрованный объем воды.