Определение бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах.

Метод основан на использовании сред обогащения для увеличения роста сальмонелл, их выделении на специальных агаровых средах, идентификации с использованием биохимических и серологических методов.

Для посева используют то количество продукта, в котором регламентируется отсутствие бактерий рода Salmonella. Перед посевом проводят инкубацию продукта в фосфатном буферном растворе.

Компоненты детских сухих молочных продуктов засевают без предварительной инкубации, непосредственно в колбу со средой для селективного обогащения.

Продукт взвешивают в стерильных условиях в стакане и затем для предварительного обогащения навеску асептически переносят в колбу с разбавленным фосфатным буфером. Соотношение массы продукта и буферного раствора 1:10, рН доводят до 7,0±0,2 1н раствором гидроокиси натрия, перемешивают и встряхивают.

К приготовленной таким образом взвеси продукта добавляют 0,1% водный раствор бриллиантового зеленого в количестве 2% к объему (т.е. 20,0см³ раствора красителя к 1000,0см³ взвеси продукта), перемешивают и выдерживают в термостате при температуре 37⁰С от 18 до 24 часов;

На следующий день 1,0см³ выдержанной в термостате смеси переносят в пробирки с 10,0см³ магниевой среды или среды Мюллера и инкубируют при температуре 37⁰С в течение 18-24 часов.

Прямой посев в среды для селективного обогащения.

Асептически сделанные навески сухих компонентов продукта засевают в колбы с магниевой средой или средой Мюллера, соблюдая соотношение продукта и среды 1:9.

Для жидких продуктов допускается использование среды с двойной концентрацией ингредиента при соотношении продукта и среды 1:1.

В обоих случаях колбы с посевами инкубируют в течение 18-24 часов при 37⁰С, после чего производят высев на поверхность чашки дифференциально-диагностической средой – Плоскирева. Чашки с посевами инкубируют при 37⁰С в течение 24-48 часов, причем просмотр посевов осуществляют дважды: через 24 и 48 часов после инкубации.

При наличии смешанного роста необходимо сделать повторный пересев на питательный агар для выделения чистых культур и получения изолированных колоний.

Типичные колонии сальмонелл на среде Плоскирева – бесцветные, прозрачные, плоские. При отсутствии типичных колоний сальмонелл на каждой из сред результат анализа считают «отрицательным», т. е. в исследуемой массе продукта сальмонелл нет. При наличии на чашках Петри типичных для сальмонелл колоний или колоний, подозрительных на сальмонелл, производят их дальнейшее изучение.

Для этого выбирают хорошо изолированную колонию и засевают на пробирки с трехсахарным агаром с мочевиной или средой Клиглера и инкубируют при 37⁰С в течение 24 часов. Идентификацию выделенных культур проводят, соответственно, по ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы и расщеплению мочевины:

– покраснение или пожелтение скошенной части столбика трехсахарной среды (при посеве уколом) говорит об образовании кислоты в результате ферментации лактозы или сахарозы;

– покраснение столбика трехсахарной среды указывает на расщепление глюкозы;

– бледно-розовый цвет столбика трехсахарной среды указывает на расщепление мочевины;

– об образовании сероводорода судят по почернению в столбике трехсахарной среды.

Если культуры сбраживают лактозу с образованием газа и расщепляют мочевину, то они не принадлежат к бактериям рода сальмонелл, поэтому дальнейшему изучению подвергаются культуры, не ферментирующие лактозу и не расщепляющие мочевину, но ферментирующие глюкозу (с образованием или без образования газа).

Культуры, ферментирующие глюкозу без образования газа, подозрительны как брюшнотифозные сальмонеллы или дизентерийные бактерии.Культуры, ферментирующие глюкозу с образованием газа, т. е. дающие в среде пузырьки, и продуцирующие сероводород, могут принадлежать к роду сальмонелл. Если во всех пробирках отсутствует характерная для сальмонелл реакция, результат считают отрицательным и дают заключение об отсутствии в исследуемой массе продукта бактерий рода сальмонелл.