Первый этап культурального метода исследования – получение изолированного роста чистой культуры

1. Для засева берут чашку Петри (или несколько) с застывшим и подсушенным агаром (МПА, либо агаром Эндо, средой Левина или Плоскирева) и пробирку с патологическим материалом.

2. В правую руку возьмите бактериологическую петлю и стерилизуйте ее в пламени спиртовки.

3. В левую руку возьмите пробирку с патологическим материалом, откройте, пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края.

4. Введите петлю в пробирку, охладите ее, касаясь изнутри стенок пробирки.

5. Погрузите прокален­ную и охлажденную петлю в патологический материал, стряхните избыток жидкости (прикасаясь несколько раз к внутренней стенке пробирки), пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края, пробирку закройте проб­кой, поставьте в штатив.

6. Левой рукой приоткройте крышку чашки Петри. Внесите петлю с исследуемым материалом и сделайте параллельные штрихи по ¼ поверхности агара, скользя петлей от одного края до другого. Петлю держите плашмя, не царапая питатель­ной среды.

7. По окончании первой серии посева петлю обожгите, поверните чашку против часовой стрелки приблизительно на 90 градусов и сделайте следующую серию параллельных штрихов по незасеянной поверхности агара, начиная от конца предыдущего посева (серии штрихов), процедуру повторите еще два раза, каждый раз обжигая петлю после окончания нанесения серии штрихов.

8. По окончании посева петлю обожгите, поставьте в штатив, чашку переверните вверх дном, под­пишите и поставьте в термостат на 24 ч при темпера­туре 37 ⁰С.

Второй этап культурального метода исследования – накопление чистой культуры

1. Берут чашку с изолированными колониями (чистой культурой), набира­ют петлей посевной материал (снимают приблизительно 1/3 колонии).

2. В левую руку берут пробирку со скошенным МПА (либо со средой Рассела, Клиглера, Олькеницкого), вынимают из нее ватную пробку, проносят открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края.

3. В пробирку вносят петлю с посевным материалом, делают посев уколом в столбик агара, а затем делают посев штрихом – распределяя материал зигзагообразным движением по скошенной по­верхности агара.

4. Проносят открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края, пробирку закрывают проб­кой, ставят в штатив.

5. Петлю стерилизуют в пламени го­релки и тоже ставят в штатив.

6. Пробирки с посевами надписывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры) и ставят в термостат.

Третий этап культурального метода исследования – окончательная идентификация чистой культуры

Изучение ферментативных признаков.

Для определения способности микроорганизмов ферментировать углеводы используют короткий и длинный «пестрый» ряд. Первый включает в себя среды Гисса с моно- и дисахаридами: глю­козой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с шестиатомным спиртом — маннитом. В длинный «пестрый» ряд вводят до­полнительно среды с моносахаридами (арабинозой, ксило­зой, рамнозой, галактозой и др.), а также с полисахаридами (инули­ном, крахмалом, гликогеном и др.) и спиртами (глицерином, дульцитом, инозитом и др.). В качестве индикатора во все среды добавляют реактив Андреде или другой индикатор.

1. Для посева используют пробирки со средой Гисса.

2. Стерильной петлей делается забор небольшого количества материала чистой культуры, выращенной (накопленной) на скошенном агаре и делается посев уколом в пробирку со средой Гиса.

3. При этом нужно помнить о необходимости стерилизовать петлю перед забором материала и после посева, а также края обеих пробирок перед забором материала и посевом и после забора материала и посева.

Колонии, выращенные на пластинчатом МПА, описывают с использованием следующих характеристик для S- или R- формы:

• морщинистая, гладкая;

• блестящая, матовая;

• сухая, влажная;

• гомогенная, гетерогенная;

• круглая, неправильная форма;

• неровные края, ровные края;

• врастает в среду, находится на поверхности среды.