Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Граму

1. На зафиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу, пропитанную раствором генцианвиолета.

2. Нанесите на нее 2-3 капли воды так, чтобы бумага хорошо намокла и плотно прилегала к поверхности предметного стекла.

3. Через 2 мин снимите фильтровальную бумагу, слейте остатки красителя в кювету.

4. Нанесите раствор Люголя на 1 мин, слейте в кювету.

5. Обесцвечивание – нанесите на мазок несколько капель спирта на 20 сек.

6. Тщательно промойте препарат водой.

7. Нанесите водный раствор фуксина на 2 мин.

8. Промойте препарат водой.

9. Просушите фильтровальной бумагой.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет.

Грамотрицательные микроорганизмы окрашиваются в красный цвет.

Занятие № 3

Морфология и ультраструктура бактериальной клетки (продолжение). Особенности морфологии актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм Окраска по Цилю-Нильсену

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из культуры бацилл.

2. Окраска мазка по Цилю-Нильсену, микроскопия и зарисовка препарата.

3. Микроскопия мазков из культуры клебсиелл, окрашенных по Бурри-Гинсу.

4. Микроскопия мазков из культуры стрептомицетов, окрашенных фуксином.

5. Микроскопия мазков из культуры микобактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену.

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Цилю-Нильсену

1. На фиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу.

2. Нанесите на бумагу 3-4 капли карболового фуксина Циля.

3. Удерживая предметное стекло рукой за один из концов, нагрейте препарат над пламенем спиртовки до появления пара (повторите эту процедуру 3 раза).

4. После охлаждения стекла снимите фильтровальную бумагу и промойте мазок водой.

5. Погрузите препарат аккуратно в 1% раствор серной кислоты (для окраски спор) - три раза по 1 секунде.

6. Обильно промойте препарат водой.

7. Нанесите на мазок 2-3 капли водного раствора метиленового синего на 3 мин.

8. Промойте препарат водой. Просушите фильтровальной бумагой.

Вегетативная клетка бацилл окрашивается в синий цвет, споры - в красный.

Занятие № 4

Физиология прокариот Окраска по Нейссеру

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из культуры коринебактерий.

2. Окраска по Нейссеру, микроскопия и зарисовка препарата.

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Нейссеру

1. На фиксированный мазок нанесите 2-3 капли ацетата метиленового синего Нейссера. Окрашивайте от 3 до 5 минут. Слейте краситель (можно промыть водой).

2. Нанесите раствор Люголя на мазок на 30 сек. Слейте краситель.

3. Промойте препарат водой.

4. Для докрашивания на мазок нанесите раствор везувина на 5 мин.

5. Промойте препарат водой. Просушите фильтровальной бумагой.

Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет (выглядят коричневыми на фоне желтой цитоплазмы).

Цитоплазма бактерий окрашивается в желтый цвет.

Занятие № 5

Физиология прокариот (продолжение). Бактериофаги Культуральный метод исследования. Фаготипирование бактерий

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Освоить основные этапы, выполнения культурального метода исследования.