Порядок выполнения работы.
В стакан или колбочку отмеривают 10 мл мочи и 10 мл дистиллированной воды, перемешивают, подкисляют 20 каплями 10% раствора хлористоводородной кислоты и титруют 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до розовой окраски, на этом основан принцип метода реакции. Расчет содержания аскорбиновой кислоты в моче проводят по формуле:
,
где Х – содержание аскорбиновой кислоты, мг/сут; 0,088 – содержание аскорбиновой кислоты, мг; А – результат титрования 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, мл; Б – объем мочи, взятый для титрования, мл; В – среднее суточное количество мочи (для мужчин – 1500 мл, для женщин – 1200 мл).
Вывод: записать результаты опыта и расчётных данных.
Опыт 2. Количественное определение витамина Р в чае.
Известно несколько соединений, оказывающих Р-витаминное действие (рутин и др.). В основе их лежит скелет флавона.
Наиболее изучены строение и свойства рутина:
Действие витамина Р и витамина С взаимосвязано, они участвуют в окислительно-восстановительных процессах. Терапевтическое действие витамина С более эффективно в присутствии витамина Р. При недостатке в организме витамина Р у человека повышается проницаемость капилляров.
Рутин – кристаллическое вещество желто-оранжевой окраски. Содержится в тех же продуктах, что и витамин С: в чае, фруктах и ягодах – бруснике, клюкве н др. Количественное определение витамина Р проводят в вытяжке из чая.
Принцип метода. Рутин способен окисляться перманганатом калия; в качестве индикатора применяется индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом калия после того, как окислится весь рутин. Экспериментально установлено, что 1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия окисляет 6,4 мкг рутина.
Порядок выполнения работы.
К 100 мг чая приливают 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстракцию в течение 5 мин. 10 мл экстракта чая отмеривают в стаканчик или колбочку, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 5 капель индигокармина (появляется синее окрашивание). Титруют из микробюретки 0,05 н. раствором КМпО4 до появления устойчивой желтой окраски.
Определяют процентное содержание рутина в чае. Расчет производят по следующей формуле:
,
где Х – содержание витамина Р в препарате, %; 3,2 – стандартный пересчетный коэффициент; А – результат титрования 0,05 н. раствором перманганата калия, мл; V1 – объем, в котором растворена взятая для анализа навеска, мл; 100 – общее количество вещества для расчета процентного содержания, г; V2 – объем раствора, взятого для титрования, мл; Р – навеска, мг; 1000 – перевод .микрограммов в миллиграммы (Р = 30 – 50мг/100 г).
Вывод: краткое описание хода работы, записать результаты опыта и расчётных данных.
Качественные реакции на жирорастворимые витамины.
Опыт 1. Реакция на витамин А (ретинол).
Качественные реакции на витамин А основаны на образовании окрашенных соединений сложной структуры.
Принцип метода. В основе приведенной реакции лежит способность серной кислоты отнимать от витамина А воду с образованием цветных продуктов реакции.
Порядок выполнения работы.
В сухую пробирку вносят 1 каплю рыбьего жира и 4-5 капель хлороформа. Смесь хорошо перемешивают встряхиванием и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется сине-фиолетовое окрашивание, быстро переходящее в красно-бурое.
Вывод: записать результаты опыта.
Опыт 1.1. Реакция витамина А с сульфатом железа.
Принцип метода. При взаимодействии ретинола с FeSО4 в кислой среде образуется соединение розово-красного цвета. Каротины дают в этой реакции зеленоватое окрашивание.
Порядок выполнения работы.
К 1-2 каплям рыбьего жира осторожно (работают под тягой) прибавляют 5-10 капель насыщенного раствора сульфата железа (FeSO4, приготовленного на ледяной уксусной кислоте, и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, постепенно переходящее в розово-красное.
Вывод: записать результаты опыта.
Опыт 1.2. Реакция витамина А с треххлористой сурьмой
В результате водоотнимающего действия хлорида сурьмы (SbCl3 витамин А превращается в соединение синего цвета. Эта цветная реакция используется для количественного определения витамина А колориметрическим методом.
Порядок выполнения работы.
В совершенно сухую пробирку помещают 1 каплю рыбьего жира и 4-5 капель насыщенного (33%-го) раствора хлорида сурьмы (III) в безводном хлороформе. Появляется синее окрашивание, которое постепенно переходит в розово-фиолетовое.
Внимание! Пробирка должна быть сухой, так как в присутствии воды реакция не идет из-за способности хлорида сурьмы (III превращаться в таких условиях в хлороксид сурьмы, который не может реагировать с ретинолом, вызывая помутнение раствора. Для устранения следов влаги в пробу можно добавить 1-2 капли уксусного ангидрида.
Вывод: записать результаты опыта.