Вопрос 1. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней : бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический , аллергический, собственно иммунный. Их достоинства и недостатки.

Бактериоскопический метод-(микроскопический).

Цель: обнаружение микроба возбудителя в патологическом материале больного путем микроскопии.

Этапы:

1.Готовим мазки из патологического материала.

2.Окраска простыми и сложными методами и идентификация возбудителя по морфологическим и тинкториальным свойствам. Этого не достаточно в большинстве случаев, потому что по этим свойствам многие бактерии сходны друг с другом.

«-» малая информативность , малая чувствительность (т к должно быть не менее 100000 в 1 мл), не используется в качестве самостоятельного вида диагностики.

«+» быстрота, простота, дешевизна.

Бактериологический метод-

Цель: выделить микроб возбудитель в чистой культуре и идентифицировать его по совокупности многих биологических свойств.

Этапы:

1.Выделение чистой культуры.

Микроскопия окрашенного препарата по Грамму.Получение отдельных изолированных колоний. Для этого патологический материал больного засеивают на элективные твердые питательные среды методом механического разобщения, чтобы получить изолированные колонии.(описание макро и микроскопических признаков колоний.

2.Накопление чистой культуры. Для этого из подозрительных колоний делаем высев на скошенный агар.

3.Приготовить мазки окрасить по Грамму. Сделать посев на дифференциально диагностическую среду. Идентификация по морфологическим , тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным, фаголизабельным факторам патогенности.

«+» Высокая информативность, высокая чувствительность, 1000 микробных клеток в 1 мл. Возможно определить чувствительность бактерий к антибиотикам и антисептикам.

Биологический метод-

Биологический метод состоит в заражении различным материалом (клиническим, лабораторным) лабораторных животных для индикации возбудителя, а также для определения некоторых свойств микроорганизмов, характеризующих их патогенность (токсигенность, токсичность, вирулентность). В качестве лабораторных животных используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов и др.

Воспроизведение заболевания у животного — абсолютное доказательство патогенности выделенного микроорганизма (в случае бешенства, столбняка и др.). Поэтому биологическая проба на животных является ценным и достоверным диагностическим методом, особенно при тех инфекциях, возбудители которых в исследуемых биологических средах организма человека содержатся в малых концентрациях и плохо или медленно растут на искусственных средах.

Серологический метод-

это обнаружение антител к определенному антигену в сыворотке

больного и определение их титра. Используются серологические

реакции: реакция агглютинации (РА), реакция непрямой

гемагглютинации (РНГА), реакция связывания комплемента (РСК), и др.

Существует два способа подтверждения диагноза заболевания

серологическим методом: 1 – определения наличия антител в

диагностическом титре; 2 – определение природы антител. По природе

антитела могут быть: инфекционные, прививочные,

анамнестические. Природу антител определяют при исследовании

парных сывороток. Парные сыворотки – это две сыворотки, взятые у

больного с интервалом в 5-10 дней. Титр инфекционных антител в

парных сыворотках возрастает в 4 раза и более, что подтверждает

клинический диагноз заболевания. Титр анамнестических и

прививочных антител в парных сыворотках не меняется или меняется

незначительно. Для обнаружения антител необходимы известные

антигены. Диагностические препараты, содержащие антитела и

используемые для серологической диагностики, называются

диагностикумы. Диагностикумы могут содержать взвесь убитых

микробов, отдельные антигены микробов, эритроциты с нагруженным

на их поверхность антигеном (эритроцитарные диагностикумы).

Реакция агглютинации – склеивание корпускулярных антигенов под

действием антител в присутствии электролита. Реакция агглютинации

используется для идентификации бактерий по антигенной структуре, в

этом случае она ставится на предметном стекле (ориентировочная

реакция), для идентификации бактерий по антигенной структуре

необходимы диагностические агглютинирующие сыворотки.

Диагностические сыворотки – это сыворотки крови кроликов,

иммунизированных определенными микробными антигенами.

Реакция агглютинации используется также для определения титра и

природы антител в серологическом методе диагностики. В этом случае

ставится развернутая РА с использованием диагностикумов.

Нагрузочные реакции иммунитета – реакции, в которых антиген

нагружается на какой-либо носитель. В качестве носителя антигена

используются эритроциты (РНГА), частицы латекса (латексная

агглютинация), убитые микробные клетки (коагглютинация), частицы

активированного угля (угольная конгламерация).

Реакция Кумбса. Реакция Кумбса используется для определения

неполных антител. Неполные антитела – антитела с одним активным

центром (одновалентные антитела), они не дают видимых реакций при

взаимодействии с антигеном. В реакции Кумбса используется

антиглобулиновая сыворотка (АГС), с помощью которой можно увидеть

результат реакции по выявлению неполных антител.

Аллергический-

аллергический   метод  направлен на выявление повышенной чувствительности организма к специфическому аллергену, которым является возбудитель заболевания. Примером этого метода является постановка кожно-аллергических проб. В основе метода лежит феномен гиперчувствительности замедленного типа. Аллергические диагностические пробы — диагностические реакции, выявляющие состояние повышенной чувствительности организма к соответствующим аллергенам. Сенсибилизированный организм отвечает на введение аллергена необычной реакцией местного или общего характера, степень которой определяется видовыми и индивидуальными свойствами организма, особенностями аллергена и способами его введения (см. Аллергия, Анафилаксия). Аллергическое состояние возникает при ряде инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, пневмококковая пневмония, сап, токсоплазмоз и др.), однако практическое применение аллергические диагностические пробы получили при ограниченном числе заболеваний. Диагностическая ценность А. д. п. определяется их специфичностью, чувствительностью и безопасностью для человека или животного. Аллергическое состояние возникает через некоторое время после начала инфекции, что необходимо учитывать при постановке А. д. п. Диагностическая ценность А. д. п. заключается в том, что с их помощью удается выявить атипичные и хронические случаи заболеваний, когда установление диагноза по клиническими микробиологическим данным затруднительно. Так как аллергическое состояние организма сохраняется в течение длительного срока после перенесенного заболевания, то А. д. п. могут быть использованы также для постановки ретроспективного диагноза.

Собственно иммунный- Цель метода – индикация и

идентификация антигенов возбудителя в исследуемом материале.

Используются РП, РИФ, ИФА, РСК. Собственно иммунный метод – это

экспресс-диагностика, результат исследования получается в течение

нескольких часов или одних суток.

Реакция преципитации – это осаждение мелкодисперсного растворимого

антигена под действием антител в присутствии электролита. Реакция очень

чувствительна в отношении антигена, она позволяет обнаруживать и

идентифицировать буквально следы антигена. Варианты постановки: реакция

кольцепреципитации, реакция преципитации в геле (агаре). Модификации

РП: иммуноэлектрофорез, радиальная иммунодиффузия по Манчини,

иммуноблотинг. Реакция преципитации применяется для индикации и

идентификации антигена в исследуемом материале. РП получила

распространение в судебно-медицинской экспертизе, используется для

определения принадлежности пятен биологических жидкостей по видовой

принадлежности белка. РП в агаре используется для определения

токсигенности культур микроорганизмов (при диагностике дифтерии,

стафилококкового токсикоза). Метод радиальной иммунодиффузии по

Манчини используется для определения разных классов иммуноглобулинов в

сыворотке крови. Иммуноэлектрофорез используется для определения

белковых фракций сыворотки крови.

Преципитирующие сыворотки получают иммунизацией кроликов антигенами

бактерий, их экстрактами и токсинами. Титром преципитирующей сыворотки

называется то максимальное разведение антигена, при котором идет реакция

преципитации. Преципитирующие сыворотки выпускаются с высоким

титром - не менее 1:100000. Это связано с тем, что антиген, определяемый в

реакции преципитации, имеет мелкодисперсную структуру и в единице

объема его может содержаться больше, чем в таком же объеме сыворотки -

антител.

Специфические преципитирующие сыворотки применяются при диагностике

инфекционных заболеваний (сибирская язва, чума, туляремия, дифтерия, и

др.), в судебно-медицинской экспертизе для определения видовой

принадлежности белка, в санитарной практике для обнаружения соответствия

белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию).

Реакция нейтрализации – способность антител нейтрализовать токсины,

вирусы, яды змей. Используется для индикации и идентификации токсинов,

для идентификации вирусов, и др. РН не дает видимого результата in vitro,

поэтому она учитывается по биопробе на животных или в культуре ткани. РН

in vivo может быть использована для определения степени напряженности

антитоксического иммунитета в организме человека (пробаШика).

Реакция флоккуляции (РФ) - используется для титрования

антитоксических сывороток, токсинов и анатоксинов. В реакции

флоккуляции в качестве антигена участвует токсин или анатоксин. При

смешивании их в эквивалентных соотношениях с антитоксической

сывороткой появляется помутнение, а затем рыхлый осадок. Механизм РФ

сходен с таковым реакции преципитации.

В реакциях нейтрализации и флоккуляции участвуют в качестве компонентов

токсины, анатоксины, антитоксины (антитоксические сыворотки).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Разработана А. Кунсом и носит

его имя (метод Кунса). Это один из методов исследования, в котором

используются меченные антитела. В качестве метки используется краситель,

дающий свечение в ультрафиолетовых лучах (изоцианат флюоресцеина или

просто флюорохром). Риф используется в двух модификациях: прямой

метод Кунса и непрямой метод Кунса. Прямой метод: исследуемый

материал, зафиксированный на предметном стекле, обрабатывается меченой

флюорохромом диагностической сывороткой; обязательный этап реакции –

отмывка от непрореагировавших антител; если в исследуемом материале есть

искомый антиген, меченные антитела фиксируются на антигене и после

отмывки такой комплекс выявляется по свечению при просматривании

препарата под люминесцентным микроскопом. Непрямой метод: в этом

случае реакция идет в два этапа – на первом этапе используется немеченая

диагностическая сыворотка, на втором этапе используется меченая

флюорохромом антиглобулиновая сыворотка; с помощью непрямого метода

можно выявлять в исследуемом материале как наличие антигена, так и

наличие и титр специфических антител.

Люминесцирующие (флюоресцирующие) сыворотки представляют собой

иммунные сыворотки, содержащие специфические антитела, меченые

флюоресцирующими красителями. При приготовлении люминесцирующих

сывороток проводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной

сыворотки флюорохромов путем прочной химической связи. Люминес

цирующие сыворотки используют при постановке РИФ.

Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуног-

лобулинам сыворотки человека или кролика - в зависимости оттого, какая

иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем

иммунизации животных иммуноглобулинами человека или кролика. Такие

сыворотки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реак-

ции Кумбса.

РСК отличается высокой чувствительностью и специфичностью и применяется для; 1) серологической диагностики инфекционных заболеваний 2) идентификации бактерии и др. микробов. РСК относится к сложным серологическим реакциям, в которых участвуют, кроме АГ- АТ-, ещё гемолитическая система (р. гемолиза), выявляющая результат реакции.

РСК проводится в два этапа при участии двух систем: 1) Первая система — АГ+АТ-(-комплемент — обуславливает связывание комплемента в том случае, если АТ соответствует АГ, В случае же несоответствия АТ и АГ комплемент остаётся свободным; 2) Вторая система (индикаторная) — гемолитическая сыворотка (гемолизины) + эритроциты — показывает исход реакции в первой системе: в случае положительного результата реакции в первой системе (образования комплекса АГ+АТ+комплемент) во второй системе не произойдет гемолиза ввиду отсутствия комплемента (эритроциты оседают на дно пробирки). В случае отрицательного результата в первой системе вторая сопровождается гемолизом, т.к. образуется комплекс эритроциты + гемолизины + комплемент.

Компоненты реакции: 1) испытуемая сыворотка (предварительно инактивируют нагреванием при 56 «С в течение 30 минут); 2) антиген (изготавливается из взвесей убитых микробов, лизатов микробов, полных АГ, гаптенов, экстрактов тканевых липидов); 3) комплемент; 4) гемолитическая сыворотка; 5) 3 % взвесь эритроцитов барана, 6) физиологический раствор; 7) контрольная сыворотка.

Комплемент, В качестве комплемента в РСК применяют свежую и высушенную сыворотку морской свинки, т. к. в крови морской свинки комплемент содержится в наибольшем количестве и присутствует постоянно, чем у др. животных. Перед постановкой РСК следует проводить титрование комплемента в реакции гемолиза (эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент, физ. раствор) и определение рабочей дозы.

Титр комплемента — наибольшее разведение комплемента, которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки.

Рабочая доза комплемента — количество комплемента, которое выше тира на 25 %.

Гемолитическая сыворотка готовится путём иммунизации кроликов 50 % взвесью эритроцитов барана. Полученную сыворотку инактивируют нагреванием при 56 °С. Определяют титр и рабочую дозу.

Титр сыворотки — максимальное разведение сыворотки, которая вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии комплемента. В качестве рабочей дозы берут гемолитическую сыворотку в тройном титре.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) во многом напоминает РИА, но включает использование коммерческих реагентов — Аг или AT, маркированных ферментами (например, пероксидазой или щелочной фосфатазой). После образования иммунного комплекса в систему вносят субстрат, расщепляемый ферментом, что приводит к окрашиванию среды в жёлто-коричневый (при использовании псроксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).

По сравнению с классическими методами выявления Аг, иммуноферментный анализ ( ифа ) позволяет непосредственно регистрировать взаимодействие Аг с AT в специфической фазе, а не анализировать вторичные проявления взаимодействия — агглютинацию, преципитацию или гемолиз. Метод отличает высокая чувствительность — обычно достаточно присутствия Аг в концентрации I нг/мл. К настоящему времени созданы многочисленные модификации базовой методики.

Наибольшее распространение получил гетерогенный иммуноферментный анализ ( ифа ) на твёрдой фазе (твердофазный ИФА). Для этого коммерческие моноклональные AT или Аг фиксируют на лунках пластиковых панелей, куда затем вносят исследуемый материал (содержащий Аг или AT).

Вопрос №2

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет выявить единственную молекулу ДНК бледной трепонемы среди сотен тысяч других молекул. Суть метода состоит в амплификации (размножении) в пробирке отдельных участков ДНК трепонемы в процессе повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе вновь синтезированные молекулы копируются ферментом ДНК-полимеразой, что приводит к многократному удвоению специфических фрагментов ДНК. Детекция этих фрагментов проводится методом электрофореза в агаровом геле (разделение молекул ДНК по молекулярному весу). Классическим примером ПЦР-теста является выявление ДНК бледной трепонемы. Он высокоспецифичный, чувствительный и воспроизводимый, при грамотном техническом исполнении и хорошей подготовке образцов практически не дает ложных результатов и оправдан для диагностики сифилиса при небольшом количестве трепонем в исследуемом материале, что особенно ценно при диагностике врожденного сифилиса

Метод ДНК-зондирования или гибридизации нуклеиновых кислот базируется на использовании, как и в методе ПЦР, искусственно синтезированных нуклеотидов, которые называются зондами. Вначале из образцов клинического материала выделяют ДНК, потом ее кипятят (денатурируют) и фиксируют на нитроцеллюлозном фильтре. Затем идет этап гибридизации с ДНК-зондом, способным специфически гибридизироваться с ДНК искомого возбудителя. На концах зонда имеются метки в виде сульфоновых групп или биотина, против которых образуются моноклональные антитела. После окончания гибридизации фильтр проявляют иммуноферментным методом путем последовательного добавления конъюгата и субстрата. Окрашивание в соответствующих точках свидетельствует о наличии тестируемой ДНК в исследуемом образце.

Вопрос №3

Материал для микробиологического исследования/ выбор, взятие транспортировка/ особенности взятия материала из полости рта Первый этап любого микробиологического исследования составляет правильный выбор материала для исследования. Его определяют свойства возбудителя и патогенез вызываемого им заболевания. При поражениях отдельных органов и систем целесообразно отбирать материал соответствующей локализации.

При отсутствии поражений исследуют кровь, а затем отбирают образцы с учётом клинической картины заболевания и доступности материала для исследования. Так, при лихорадке неясного генеза первоначально проводят посев крови; затем, при появлении симптомов более конкретных проявлений, например пневмонии, проводят забор мокроты.

 Образцы материала для микробиологического исследования следует забирать до назначения антимикробной терапии, с соблюдением правил асептики для предупреждения загрязнения материала. Каждый образец следует рассматривать как потенциально опасный. При заборе, транспортировке, хранении и работе с ним необходимо соблюдать правила биологической безопасности. Материал собирают в объёме, достаточном для всего комплекса исследований. Микробиологические исследования следует начинать немедленно после поступления образца в лабораторию.

Повторимся, что взятие материала предпочтительно проводить до начала антибактериальной терапии. На фоне антибактериальной терапии материал забирают перед очередным введением антимикробных препаратов, то есть в момент, когда их концентрация в организме минимальна.

При взятии пробы следует строго соблюдать правила асептики, во избежание ее случайной посторонней контаминации.

Для взятия проб следует использовать стерильные инструменты, а для их транспортировки стерильные пробирки или контейнеры. Использование нестерильных сухих, чистых пробирок допускается только для отбора и транспортировки крови на серологические исследования.

Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования.

Транспортировка материала должна осуществляться в максимально короткие сроки: как правило, не более 1,5 — 2 часов.

Всегда следует стремиться использовать транспортные системы со средой (консерванты), что позволяет пролонгировать время транспортировки до 24 часов и более или осуществлять посев непосредственно у постели больного (кровь, ликвор и др.);

Материал для исследования на неспорообразующие анаэробы, доставляемый без использования транспортных систем со средой (консервантов) должен транспортироваться:

· в специальном герметично закрытом флаконе, заполненном инертным газом, в который проба вносится путем прокола крышки иглой шприца;

· в одноразовом шприце, из которого удален воздух, и кончик которого закрыт либо стерильной резиновой пробкой, либо иглой, с надетым на нее штатным защитным колпачком.

Взятый материал необходимо как можно быстрее доставить в лабораторию. Допускается хранение образцов в

течение 1 суток при температуре +2..+8°С. При невозможности доставки образцов в лабораторию в течение

суток материал подлежит замораживанию до -20°С.

Транспортировка образцов должна осуществляться с соблюдением необходимого температурного режима:

охлаждённые образцы транспортируются при температуре +2…+8°С, транспортировка замороженных

образцов осуществляется при температуре -20°С. Размораживание образцов в ходе хранения и

транспортировки недопустимо (поскольку может привести к потере материала и получению

ложноотрицательных результатов исследования)

особенности взятия мазка из полости рта особенности: При взятии материала соблюдают следующие правила: не полоскать лекарственными средствами полость рта до взятия материала, перед взятием - прополоскать полость рта теплой водой, очистить поверхность язвы стерильным марлевым тампоном, брать материал из раны, либо с поверхности слизистой , немедленно направить материал в лабораторию.

Мазок берут стерильным пластиковым аппликатором с дакроновым тампоном вращательными

движениями с поверхности миндалин, нёбных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного

полоскания полости рта тёплой водой или изотоническим раствором NaCl.

После взятия материала тампон (рабочую часть аппликатора с дакроновым

тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку (эппендорф) с

прозрачной транспортной средой (стандартная пробирка с транспортной

средой, предоставляемая ИНВИТРО для проведения ПЦР-исследований).

Конец аппликатора отрезают ножницами таким образом, чтобы он позволил

плотно закрыть крышку пробирки до характерного щелчка (звук закрытия

замочка). Перед отправкой эппендорфа на хранение или транспортировку

необходимо убедиться, что эппендорф закрыт герметично.

ВНИМАНИЕ! Рекомендуется совмещать мазки из полости носа и ротоглотки в

одном эппендорфе. Для этого рабочие концы аппликаторов после взятия

мазков у пациента помещаются в один эппендорф и исследуются как один образец. Для предотвращения

возможных потерь материала при транспортировке и хранении рекомендуется также дублировать соскобы (по

возможности). Т. е. желательно, чтобы проба от одного пациента содержала два эппендорфа, каждый из них -

с двумя аппликаторами (один с материалом из носа, второй из ротоглотк

4 Условно-патогенные микроорганизмы, их общая характеристика. Условия возникновения гнойно-воспалительных заболеваний вызванных условно-патогенной микрофлорой. Методы микробиологической диагностики.

Условно-патогенные микроорганизмы – это большая группа

микроорганизмов, которые в норме никаких заболеваний у человека не

вызывают. Патогенное действие их на организм человека они оказывают при

проникновении во внутреннюю среду организма в большом количестве или

резком снижении иммунобиологической резистентности, или заноса их в

другую экологическую нишу.

Большинство видов условно-патогенных микробов являются нормальными

обитателями кожи и слизистых оболочек тела человека, составляя его

нормальную микрофлору, не оказывая на организм человека патогенного

влияния.

В последние годы в этиологии гнойно-воспалительных заболеваний

значительно возрос удельный вес заболеваний вызываемых условно-

патогенными грамотрицательными микроорганизмами, в особенности

синегнойной палочкой, капсульной палочкой, протеями и кишечной

палочкой.

Микроорганизмы ротовой полости играют большую роль в развитии кариеса зубов, стоматита, воспаления мягких тканей. В начальной стадии воспалительного процесса преобладают кокки, бактероиды, актиномицеты. По мере развития кариеса к ним присоединяются гнилостные бактерии – протеи, клостридии и др. Чаще из этой группы микроорганизмов встречаются S.aureus, S.epidermidids, E.coli, Ps.aeruginosa, Pr.vulgaris, Pr.hominis, Klebsiella ap., C.albicans. Из спорообразующих – B.subtilis, B.mesentericus.

Известно, что стафилококки вызывают у людей гнойную инфекцию, которая характеризуется разнообразием клинических проявлений. Эти бактерии могут быть причиной ринитов, фурункулезов, абсцессов, фарингитов, трахеитов, бронхитов, пневмоний, флегмон и пр.

Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) является классическим возбудителем сепсиса с гнойными метастазами. В наше время стафилококковый сепсис, как у детей, так и у взрослых, вызывается штаммами, обладающими в подавляющем большинстве множественной резистентностью к антибиотикам.

Факторами, способствующими возникновению и развитию стафилококкового сепсиса, являются остеомиелит, септичный артрит, пневмония, пиодермия, применение кортикостероидов и антибиотиков, к которым стафилококки устойчивы. St. aureus чаще всего вызывают метастатические менингиты, как следствие существующего в организме стафилококкового процесса (абсцесса, остеомиелита, отита, септичных тромбозов и пр.).

В последнее время увеличился процент инфекций, обусловленных грамотрицательной микрофлорой.

E.coli часто обнаруживаются при бактериурии, энтероколите, при хирургических вмешательствах в области живота. Они могут проникать в кровь, обуславливать метастатические образования в суставах и мозгу. У новорожденных и грудных детей нередко являются причиной сепсиса. Считается, что при наличии в 1 мл. крови более 50 бактериальных клеток E.coli, жизнь ребенка находится в опасности.

Эшерихии вызывают очень тяжелые менингиты у детей грудного и старшего возраста.

В реанимационных отделениях клебсиеллы очень часто являются возбудителями бактериемии. E.coli, Proteus sp., Ps.aeruginosa, Kl.pneumoniae нередко являются этиологическим фактором тяжело протекающих пневмоний.

Ведущая роль среди грамотрицательных палочковидных бактерий, обуславливающих развитие гнойно-воспалительных процессов, принадлежит Ps.aeruginosa. Синегнойная палочка вызывает тяжело протекающие септические процессы при наличии больших ожоговых площадей, лейкопении, поражения поджелудочной железы, наркомании и других факторов.

Обладая хорошо выраженной резистентностью к бактерицидному действию сыворотки крови, эти микроорганизмы могут продолжительное время находиться в крови. Нередко сепсис развивается у больных, находящихся на стационарном лечении и получающих внутривенно растворы, загрязненные микробами.

Поскольку Ps.aeruginosa обладают высокой естественной резистентностью к антибиотикам, инфекции, вызванные этими микробами, трудно поддаются лечению и могут длиться месяцами.

Инфекции, вызванные Ps.aeruginosa , могут возникнуть после люмбального прокола, после операций на органах центральной нервной системы, кишечнике, половых органах, почках. Псевдомонады постоянно выделяются при варикозных язвах, при ожогах. Эти микроорганизмы чаще чем другие виды, вызывают тяжелые поражения роговицы.

Сегодня синегнойную инфекцию можно рассматривать как типичную внутрибольничную инфекцию ожоговых, педиатрических, хирургических, акушерских, стоматологических и других стационаров.

Наиболее благоприятными факторами для развития синегнойной инфекции являются больные с тяжелыми ожогами лица, больные, получавшие медикаментозное лечение и рентгенотерапию при злокачественных новообразованиях, больные лейкозом, стоматологические больные после инокуляции зуба, люди с недостаточно качественным питанием, новорожденные и особенно недоношенные дети. Нередко пересадка органов осложняется синегнойной инфекцией.

Candida albicans обнаруживаются в крови при тяжело протекающем основным заболеванием, во время или после длительного лечения антибиотиками, при кандидозе ротовой полости, пищевода, бронхов, половых органов, обширных поражениях кожи, при длительной венозной катетеризации. Эти микроорганизмы всегда выделяются при хроническом синусите, тонзиллите..

В последние годы увеличилось количество внутрибольничных инфекций, вызванных условно –патогенными микроорганизмами.

Выделение условно – патогенных микроорганизмов не только из гнойного материала, но и из воздуха палат, коридоров, перевязочных, манипуляционных, с поверхности мягкого и твердого инвентаря, выделение с рук и слизистых носоглоток больных и обслуживающего персонала указывает на их широкую циркуляцию в стационарах. Источником при этом могут быть как больные с гнойно-воспалительными процессами, так и носители условно – патогенных микроорганизмов.

Носителями возбудителей внутрибольничных инфекций в лечебных учреждениях среди больных 60 – 70%, среди медперсонала 40 55%. При этом медсестры и санитары являются носителями чаще, чем врачи.

Гнойно-воспалительные процессы могут быть вызваны не только аэробами, факультативными анаэробами образующими и не образующими споры, облигатными анаэробами образующими споры, но и большой группой облигатных анаэробов не образующих споры.

Для анаэробных инфекций характерны некоторые признаки:

- анаэробная инфекция, как правило, обуславливается ассоциацией микроорганизмов, среди которых кроме анаэробов обнаруживаются и факультативные анаэробы ( стафилококки, протеи, псевдомонады);

- инфекция чаще всего развивается в закрытых пространствах в виде локализованных абсцессов (в легких, мозгу, тазовых органах, брюшине), но может распространиться и в ткани;

- нередко развиваются септический тромбофлебит и метастатические абсцессы;

- развитию анаэробных инфекций способствуют нарушение кровообращения, некроз ткани и снижение окислительно-восстановительного потенциала.

В лабораторной диагностике основная роль принадлежит выделению чистых культур в строго анаэробных условиях. Большую роль при этом играет методика забора и посева исследуемого материала, поскольку контакт даже с небольшим количеством кислорода воздуха в процессе забора материала может обусловить гибель анаэробных не образующих спор, микроорганизмов. И при фактическом их наличии в зоне гнойно-воспалительного процесса рост их на питательных средах будет отсутствовать.

Материал (кровь, гной, мокрота и др. в зависимости от кинической формы инфекции), взятый врачом или медицинской сестрой у больного, следует сразу же внести в элективную питательную среду.

Культивирование не образующих спор анаэробов проводят, используя сложные элективные питательные среды в анаэростатах при наличии 10% углекислого газа.

Дифференцирование выделенных возбудителей проводят по биологическим показателям.

Вопрос №6

1. Клебсиелла (лат. Klebsiella) — род условно-патогенных бактерий, относящихся к семейству Enterobacteriaceae.

2. Род состоит из 4 видов:

Klebsiella oxytoca,

Klebsiella planticola,

Klebsiella pneumoniae ,

Klebsiella terrigena.

Экологическая ниша: Представители рода встречаются в фекалиях человека, на коже и слизистых дыхательных путей, в почве, воде, фруктах и овощах.

3. Распространенность:Убиквитарно

4. Устойчивость: устойчив

5. Морфология:   короткая, толстая, неподвиж­ная грамотрицательная палочка, есть капсула

6. Культуральные свойства: на жидких питательных средах образуют равномерное помутнение. На плотных питательных средах образуют крупные, блестящие, выпуклые, слизистые колонии.

7. Отношение к кислороду: факультативный анаэроб.

8. Биохимические свойства: высокая сахаролитическая ак­тивность, низкая протеолитическая активность.

9. Антигенная структура: О- и К-антигены (капсульные полисахариды)

10. Факторы патогенности: основным фактором патогенности является эндотоксин (повышение температуры, понижение давления, ДВС-синдром).

11. Эпидемиология: эндогенные инфекции, антропоноз, источник инфекции – больные и носители, заражение – через респираторные пути.

12. Клиника: ГВЗ, является возбудителем пневмонии, риносклеромы, озоны, поражения мочеполовых органов, мозговых оболочек, развитие сепсиса. 

13. Диагностика: микроскопия (по Бури-Гимсу), бактериологический метод.

14. Иммунитет:  вызывают гуморальный и клеточный иммунный ответ.

15. Профилактика: специфической вакцинопрофилактики нет.

16. Лечение: антибиотики – цефалоспорины.

7 Протей

Род Proteus

Протеи растут на простых питательных средах, температурный оптимум 35-37 "С, оптимум рН 7,2-7,4. Рост протей сопровождается появлением гнилостного запаха. На твёрдых средах жгутиковые (Н-) формы характеризуются сплошным ростом. При посеве бляшкой бактерии дают феномен «роения» — образуют концентрически расходящиеся зоны роста голубовато-серого цвета (рис. 18-8).

На среде Плоскирева протеи формируют желтовато-розовые колонии (в зоне роста среда подщелачивается и желтеет). На висмут-сульфитном агаре через 48 ч образуют серо-коричневые колонии (с чёрно-коричневой зоной под ними).

На агаре Эндо протеи формируют бесцветные колонии. Вызывают помутнение жидких питательных сред.

Возбудителем гнойно-воспалительных заболеваний является вид P. mirabilis.

Это полиморфные грамотрицательные палочки с закругленными концами, факультативные анаэробы. Капсулообразование отсутствует. Имеют перитрихиально расположенные жгутики.

Н-формы этих бактерий отличаются высокой подвижностью, хотя встречаются и неподвижные (О-формы).

Нетребовательны к питательным средам. На мясопептонном агаре Н-форма протея дает характерный ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета (феномен роения), затягивающий всю поверхность сплошным налетом без образования отдельных колоний. В жидкой питательной среде дает рост в виде диффузного помутнения. При культивировании характерен гнилостный запах.

В окружающей среде устойчивы, могут сохранять жизнеспособность в слабых растворах дезинфектантов. Широко распространены в природе. Являются обитателями кишечника человека и животных.

Биохимические свойства:

1) ферментируют глюкозу до кислоты;

2) не разлагают маннит и лактозу;

3) продуцируют сероводород;

4) разжижают желатин, расщепляют мочевину с образованием аммиака;

5) обладают протеолитической и пептолитической активностью.

Протеи в небольших количествах могут обнаруживаться в кишечнике здорового человека, поэтому протейная инфекции может развиваться как эндогенная.

Основным местом их обитания являются объекты внешней среды, гниющие продукты, сточные воды, почва. Источниками инфекции для человека могут быть больной и бактерионоситель.

Бактерии участвуют в развитии гнойно-воспалительных заболеваний мочевыводящих путей, быстро распространяются по ожоговой поверхности, давая характерный гнилостный запах.

Постинфекционный иммунитет нестойкий.

Диагностика: основной метод – бактериологическое исследование; материал определяется локализацией очага поражения. Посев по методу Шушкевича в каплю конденсированной влаги свежескошенного мясопептонного агара; характерен рост в виде вуали по всей поверхности среды.

Этиотропная терапия:

1) антибиотики, нитрофураны, фторхинолоны;

2) протейный или колипротейный бактериофаг;

3) убитая лечебная стафило-протейно-синегнойная вакцина.

Специфическая профилактика не разработана.