Тромбоциты

Обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) готовится в течение 6 часов после взятия крови путем мягкого центрифугирования (т. е. 2.000 g в течение 3 минут) резервуара цельной крови, собранной с CPDA-1. Супернатант переносят в дополнительный мешок, используя экстрактор плазмы. Срок хранения - до 3-х дней при 3-6°С и постоянном встряхивании (1,3-7).

Подбор донора - реципиента по группам крови (совместимость)

Окончательную уверенность в том, что эритроциты донора действительно подходят реципиенту и впоследствии будут эффективно выполнять функцию переносчика кислорода в организме могут дать только результаты перекрестной пробы. Эта процедура состоит из двух этапов (3, 4, 6-8).

Большая перекрестная проба

Эритроциты донора (промытые три раза и взвешенные в 3-5% физ. растворе) приводятся в контакт с гепаринизированной плазмой или сывороткой крови реципиента (одна или две капли каждая). Более быстрая версия пробы, использующая мазки крови, менее пригодна, так как только сыворотка или плазма с высоким титром антиэритроцитарных антител будет демонстрировать агглютинацию или гемолиз (видимый уже через несколько минут) (Рисунок 3). При выполнении в лабораторных пробирках или на хороших платах тест занимает больше времени, зато позволяет определить низкий титр антиэритроцитарных антител при агглютинации или гемолизе (Рисунок 4-6). Такие реакции указывают на несовместимость групп крови донора и реципиента.

Рисунок 3 Метод приготовления четких слайдов, использованный для тестирования совместимости крови. Одна капля (50-100 мкл) сыворотки или гепаринизированной плазмы и одна капля 3-5% суспензии эритроцитов в физ. растворе помещаются на каждое предметное стекло. На слайде 1 можно видеть гемагглютинацию, на слайде 2 - отрицательную или контрольную реакцию и на слайде 3 - гемолиз.

Рисунок 4 Пробирочный метод для тестирования совместимости крови. Две капли (100-200 ил) сыворотки или гепаринизированной плазмы и две капли 3-5% эритроцитарной суспензии в физ. растворе поменяются в каждую пробирку. Гемагглютинация может быть видна в пробирке 1, отрицательная или контрольная реакция - в пробирке 2, и гемолиз - в пробирке 3.

Рисунок 5 Метод микротитровальных плат,использованный длятестирования совместимости крови, иллюстрирующий гемагглютинацию.25 ил сыворотки или гепаринизированной плазмы и 25 ил 3% суспензии эритроцитов в физ. растворе добавляются в каждую лунку. Микротитровальную плату затем помещают в термостат при 37С и результат реакции виден через 15 и 30 минут. Плата слегка наклоняется, позволяя небольшой массе осажденных на дне лунки эритроцитов подойти к "линии", указывающей на отрицательную реакцию (номера лунок А2; В1, 2, 3, 4, 5; Cl, 2, 3, 4. 5, 6, 7; D7). Положительные реакции наблюдают в тех лунках, где небольшая масса осадка эритроцитов в "полулунной "форме (агрегат) видна на нижней стороне лунки (номера лунок А), 3, 4, 5. 6, 7; В6, 7; DI, 2, 3, 4, 5, 6).

Рисунок 6 Метод микротитровальных плат, использованный для тестирования совместимости крови, иллюстрирующий гемолиз. 25 ил сыворотки или гепаринизированной плазмы и 25 ил 3% суспензии эритроцитов в физ. растворе добавляются в каждую лунку. Температура инкубации и время чтения реакции, как на Рисунке 5.Отрицательные реакции наблюдаются в лунках, где пока еще может быть видна осажденная эритроцитарная масса (номера лунок А1, 2, 3, 4, 5, 6, 7; С4, 5; D4, 5, 6, 7). Положительные реакции можно наблюдать в лунках с одинаковым розовым окрашиванием, где эритроцитарная масса исчезала вследствие гемолиза (номера лунок В1, 2, 3, 4, 5, 6, 7; Cl, 2, 3, 6, 7; DI, 2, 3).