2. Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге.

1. На полосе хроматографической бумаги отмечают линию старта (1-1.5 см от края бумаги), а также места нанесения стандартных растворов аминокислот и анализируемой смеси.

2. Микропипеткой наносят на хроматографическую бумагу по 20 мкл раствора каждой аминокислоты. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей, что определяют по исчезновению просвечивания бумаги в точке нанесения.

3. Точки старта высушивают.

4. Параллельно готовят 20 мл растворителя, состоящего из н-бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 12:3:5. К растворителю добавляют несколько кристаллов нингидрина для окрашивания хроматограммы во время проявления.

5. Растворитель заливают в хроматографическую камеру, герметично закрывают и оставляют на некоторое время для насыщения парами.

6. Бумажную полоску помещают в хроматографическую камеру. Проявление заканчивают когда фронт растворителя переместится к противоположному концу полоски (2-3 см от края).

7. Хроматограмму высушивают.

8. Определяют значения R_f аминокислот. Идентифицируют аминокислоты, содержащиеся в анализируемой смеси.

Тема II.

1. Качественные реакции на аминокислоты.

Приготовление 1% раствора белка для проведения качественных реакций

1. Отделяют белок куриного яйца от желтка, считая, что масса белка в одном яйце в среднем составляет 30г, а его концентрация 10%.

2. Белок помещают в мерный цилиндр и добавляют девятикратный объем дистиллированной воды.

3. Полученный раствор тщательно перемешивают и фильтруют через нейлоновое сито.

 Нингидриновая реакция

1. В четыре пробирки наливают 2 мл 1% раствора белка, 2 мл 0.01% раствора глицина, 2 мл 0.01% раствора -аланина и 2 мл воды, соответственно.

2. Во все пробирки добавляют по 10 капель 0,1% раствора нингидрина.

3. Растворы перемешивают и оставляют в водяной бане при 70˚С на 5 минут.

4. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.

Ксантопреновая реакция

1. В четыре пробирки наливают 1 мл 1% раствора белка, 1 мл 0.01% раствора триптофана, 1 мл 1% раствора желатина и 1 мл воды соответственно.

2. Во все пробирки добавляют по 5-6 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно нагревают.

3. После охлаждения в пробирки осторожно (по стенке) приливают избыток 10% раствора NaOH.

4. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.

Реакция Фоля

1. В три пробирки наливают 2 мл 1% раствора белка, 2 мл 0.02% раствора цистеина и 2 мл 1% раствора желатина, соответственно.

2. Во все пробирки добавляют по 1 мл 10% раствора NaOH.

3. Пробирки осторожно нагревают до кипения, кипятят в течение 2 мин.

4. Далее в каждую пробирку добавляют по 3 капли раствора Pb(CH₃COO)₂.

5. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.

Качественные реакции на триптофан