Определение сахаролитических свойств микробов

Свойство расщеплять углеводы и многоатомные спирты, которые принято объединять в одну группу, именуемую сахарами, присуще многим микроорганизмам. Под действием сахаролитических ферментов сахара расщепляются на альдегиды и кислоты. Конечными продуктами их расщепления являются углекислый газ и вода. Различные микробы обладают разной способностью расщеплять сахара. Одни микробы расщепляют сахара до конечных продуктов, другие только до кислот. Эти свойства учитывают при определении вида микроба.

Сахаролитические свойства у микробов изучают при выращивании на средах Гисса, в полужидком агаре (ПЖА) с углеводами и индикатором ВР и в других углеводных средах, а также в молоке.

В средах Гисса расщепление сахара до промежуточных продуктов (кислот) определяют по покраснению среды, до конечных продуктов (газов) – по накоплению пузырьков газа в специальных газовичках, помещенных в среду. При отсутствии ферментации сахара рост микробов выражается в равномерном помутнении среды без изменения цвета.

В полужидком агаре с индикатором ВР о расщеплении сахаров до кислот судят по изменению цвета среды с серо-розового до голубого. Образующийся при расщеплении сахара газ накапливается в толще среды.

На среде Эндо в результате расщепления лактозы, входящей в состав этой среды, происходит восстановление цвета индикатора основного фуксина, в результате чего выросшие колонии микробов окрашиваются в красный цвет. Аналогично учитывают результаты на средах Левина и Плоскирева. Лактозоположительные колонии окрашиваются на этих средах в цвет индикатора: в фиолетовый или черный на среде Левина, в розовый на среде Плоскирева. Лактозоотрицательные не окрашиваются.

В молоке при расщеплении микробом лактозы, то есть при наличии у него фермента лактазы, происходит свертывание в результате накопления кислых продуктов.

Определение окислительно-восстановительных ферментов

В культуре микробов важно определить наличие окислительно-восстановительных ферментов, связанных с функцией дыхания. Диагностическое значение имеет наличие у микробов оксидазной и каталазной активности, а иногда - редуцирующей способности.

Определение оксидазы – проводят несколькими методами, например, по Ковачу. В этом случае на поверхность колоний суточной агаровой культуры наносят несколько капель реактива Ковача, содержащего диметил-парафенилендиамин. Через несколько секунд оксидазоположительные колонии окрашиваются в темно-красный (пурпурный) цвет. Оксидазоположительная - синегнойная палочка, оксидазоотрицательная - кишечная палочка, сальмонелла.

Определение каталазы. В культуру вносят 1-2 мл 3% перекиси водорода. При наличии у микроба каталазной активности происходит пенообразование в результате расщепления перекиси водорода под действием каталазы на кислород и воду. Каталазной активностью, например, обладают возбудители листериоза и кампилобактериоза. Не обладают - стрептококки.

Определение редуцирующих свойств

Исследуемую культуру высевают на питательную среду, содержащую органическую краску (лакмусовую настойку, метиленовый синий, нейтральный красный и другие). При наличии у микроба ферментов дегидраз происходит отщепление водорода от субстрата и присоединение его к краске, в результате краситель восстанавливается и превращается в бесцветное соединение. По обесцвечиванию краски в присутствии микроба судят о редуцирующих свойствах исследуемой культуры. Например, этим свойством обладает возбудитель листериоза и не обладает возбудитель рожи свиней, что учитывают при их дифференциации.