Вопрос № 53. Бифидобактерии

Бифидобактерии (Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium bifidum и др.) являются облигатной, пробиотической микрофлорой кишечника грудных детей, изначально выделены из фецес (содержимого кишечника) новорожденных детей. Морфологически представляют собой неспорообразующие, мелкие, грамположительные палочки. В старых культурах могут встречаться грамотрицательные варианты. Для бифидобактерий характерна форма слегка изогнутых и разветвленных палочек с бифуркациями, булавовидными и гантелевидными утолщениями на концах. Часто встречаются скопления в виде «китайских иероглифов», «римских пятерок», в неблагоприятных условиях образуют разбухшие, инволюционные формы. В микропрепаратах бифидобактерии бывает трудно найти и рассмотреть.

Бифидобактерии – прихотливые микроорганизмы, их приходится культивировать на специальных, плотных питательных средах (кукурузно-лактозная, гидролизатно-молочная среда, среда Блаурокка, бифидоагар, жидкая бифидо-среда). Бифидобактерии образуют колонии в виде «гречишных зерен». «гвоздиков» в глубине среды, в пробирках. Они являются строгими анаэробами, однако в процессе культивирования приобретают способность развиваться в присутствии некоторого количества кислорода. Чаще бифидобактерии выращивают при глубинном посеве в столбике специальной среды или в анаэростате. Для большинства штаммов оптимальной для развития является температура 36-38^oС. Основными продуктами метаболизма бифидобактерий являются уксусная, молочная кислота с небольшой примесью муравьиной и янтарной кислот. Поэтому считается, что бифидобактерии – наиболее активные антагонисты гнилостной микрофлоры и патогенных энтеробактерий, а также синегнойной палочки, грибов кандида в кишечнике. Кисломолочные продукты с бифидофлорой обладают выраженными диетическими свойствами. Большинство штаммов бифидобактерий не сквашивают стерильное молоко, а если и сквашивают – то только через 4 сут. Поэтому для приготовления кисломолочных продуктов с ними применяют многоштаммовые, многокомпонентные закваски, содержащие также S.lactis, S.cremoris, S. lactis subsp. аcetoinicus, и другие.

Важные свойства бифидобактерий:

• Обладают высокой антагонистической активностью в отношении условно патогенных и патогенных микроорганизмов.

• Ассоциируясь со слизистой оболочкой кишечника, бифидобактерии осуществляют физиологическую защиту кишечного барьера от попадания во внутреннюю среду организма токсинов и микробов.

• Синтезируют белки и аминокислоты, пантотеновую кислоту, витамин К и витамины группы В.

• Принимают участие в активизации пристеночного пищеварения и утилизации пищевых субстратов.

• Способствуют усилению процессов всасывания витамина D, ионов железа и кальция через стенки кишечника. Данные бактерии широко применяют при изготовлении лекарственных препаратов, предназначенных для противодиарейной терапии и нормализации микрофлоры кишечника.

Вопрос № 31. Среда Виноградского

Среда Виноградского – относится к специальным питательным средам, изготовляемым по особой рецептуре. Это специальная жидкая и плотная (на силикагеле) синтетическая питательная среда для культивирования бактерий - анаэробных фиксаторов азота);

содержит глюкозу, двузамещённый фосфат калия, сульфат магния, следы поваренной соли, сульфатов железа и марганца, а также мел.

Среда Виноградского для целлюлозоразлагающих бактерий (специальная жидкая синтетическая питательная среда для выявления у бактерий способности разлагать клетчатку в аэробных условиях)

содержит двузамещенный фосфат калия, сульфаты магния, железа и марганца, поваренную соль, мел и нитрат калия, а в качестве источника клетчатки используется фильтровальная бумага.

Если необходимо, чашки с гелем заворачивают в пергаментную бумагу и, не переворачивая, стерилизуют в автоклаве при 112^оС 15 мин. Чашки с силикагелем хранят в сосудах под водопроводной водой.

Силикагель (кремнекислый гель).

Используют в качестве твёрдой основы для синтетических сред для почвенных микроорганизмов, например, для азотфиксирующих клубеньковых бактерий (среда виноградского). К соляной кислоте добавляют при перемешивании равный объём жидкого стекла (раствор Na₂SiO₃) того же удельного веса. Смесь разливают в чашки Петри по 25-30 мл в каждую. Чашки оставляют на горизонтальной поверхности на несколько часов для образования геля. Как только гель станет плотным, открытые чашки помещают в стеклянный или эмалированный сосуд и промывают проточной водой для удаления хлоридов. Наличие хлоридов проверяют качественной реакцией с 1-1,5% раствором AgNO₃. Поскольку водопроводная вода содержит значительное количество ионов хлора, гель перед проведелние реакции с нитратом серебра несколько раз промывают горячей дистиллированной водой. Последний смыв наливают в чистую пробирку, туда же добавляют 2-3 капли раствора AgNO₃. В присутствии хлоридов образуется белый осадок или помутнение. Если помутнения нет, то гель готов к употреблению.