3.2.2. Исследование влияния камфоры на активность дыхательной цепи митохондрий обонятельных клеток

При стимуляции обонятельной выстилки камфорой в 4 опытах из 13 интенсивность синего свечения снижалась в среднем на 8,3% . Этот факт можно, очевидно, объяснить повышением содержания НАД+ в митохондриях обонятельных клеток. Однако в 54% экспериментов интенсивность собственной флуоресценции НАДН на 7,7% усиливалась (рис. 60 а), что свидетельствует об увеличении митохондриального пула восстановленных пиридиннуклеотидов. Следовательно, можно предположить, что в результате воздействия камфорой на обонятельные клетки НАД+ в их митохондриях восстанавливается.

Из данных, представленных на рис.60 б, видно, что стимуляция камфорой в 40% опытов приводила к увеличению на 23,7% желто-зеленого свечения, которое связано с повышением содержания окисленных форм флавопротеидов. Однако в 46% случаев интенсивность собственной флуоресценции ФП на 11,1% снижалась, то есть увеличивалось содержание восстановленных флавопротеидов.

Таким образом, результаты наблюдений позволяют заключть, что камфора изменяла окислительно-восстановительное состояние переносчиков электронов в дыхательной цепи митохондрий обонятельных клеток.

Чтобы ответить на вопрос о том, прямо или опосредованно камфора изменяет окислительно-восстановительное состояние никотинамидадениндинуклеотидов и флавопротеидов, мы ингибировали фосфолипазу С (n=6), которая является основным ферментом фосфоинозитидного пути. Для этого препарат инкубировали в неомицине, а затем стимулировали одорантом.

В результате оказалось, что в 67% опытов камфора не инициировала изменений интенсивности собственной флуоресценции НАДН. В то же время интенсивность желто-зеленого свечения в 67% опытов увеличивалась на 13%, то есть в 2 раза меньше, чем одорант-зависимый ответ в нативном препарате. Следовательно, в подавляющем числе опытов выключение фосфолипазы С приводило к исчезновению индуцированного одорантом повышения НАДН и вдвое уменьшало реакцию окисленных ФП. Таким образом, без ФЛС окислительно-восстановительные процессы, вызываемые камфорой, прекращаются или резко снижаются.

На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что в действие камфоры на активность дыхательной цепи митохондрий вовлекается фосфоинозитидная сигнальная система.

3.2.3. Исследование влияния цинеола на активность дыхательной цепи митохондрий обонятельных клеток

На рис. 61 а, б, представлены данные по изменению интенсивности собственной флуоресценции НАДН и ФП при стимуляции обонятельной выстилки цинеолом, имеющим запах душистого эвкалипта. Видно, что под влиянием цинеола синее свечение в 80% случаев усиливалось на 1,8%, что указывает на повышение содержания в митохондриях восстановленных пиридиннуклеотидов. Своего максимального значения реакция достигала через 8 с и длилась 37 с.

Под действием цинеола интенсивность собственной флуоресценции ФП в 60% опытов усиливалась в среднем на 2,4%. Через 33 с ответ становился максимальным, а через 67 с возвращался к исходному уровню. Следовательно, под действием цинеола в большинстве опытов повышался пул окисленных флавопротеидов в митохондриях обонятельных клеток.

Таким образом, цинеол изменял окислительно-восстановительное состояние дыхательной цепи митохондрий.

Роль посредников во влиянии цинеола на митохондрии исследовали посредством ингибирования аденилатциклазы – основного фермента внутриклеточной сигнальной системы цАМФ. После инкубации в 2,5-дидеоксиаденозине препарат обдували цинеолом (n=5). Оказалось, что при ингибировании аденилатциклазы собственная флуоресценция НАДН под действием цинеола не изменялась, а интенсивность инициируемого цинеолом свечения ФП была в 2 раза меньше, чем в нативном препарате.

Следовательно, угнетение аденилатциклазы вызывало подавление одорант-зависимого изменения окислительно-восстановительных процессов в митохондриях обонятельных клеток, из чего можно заключить, что изменение активности дыхательной цепи митохондрий опосредуется внутриклеточной сигнальной системой цАМФ.