
- •Глава 1.
- •1.1.1 Предмет и задачи ферментного катализа и инженерной энзимологии
- •1.1.2. Первичная структура белка
- •1.1.3. Основы термодинамики. Типы связей в белках и энергетика.
- •1.1.4. Конформация пептидов. Вторичная структура белков
- •1.1.5. Структура глобулярных белков. Третичная и четвертичная структура.
- •1.2.2. Методы выделения и очистки ферментов
- •1.2.3. Единицы активности ферментов. Методы определения активности ферментов.
- •1.3.1.Класссификация ферментов.
- •1.3.2.Коэнзимы и другие кофакторы
- •1.3.3.Фермент-субстратные комплексы и механизм действия ферментов.
- •1.3.4.Кинетика ферментативных реакций.
- •1.3.5. Влияние температуры на ферментативные реакции.
- •1.3.6. Влияние рН на ферментативные реакции.
- •14.1. Эффекторы ферментов. Механизмы регуляции ферментных реакций.
- •1.4.2 Механизмы конкурентного ингибирования ферментативных реакций.
- •1.4.3. Механизмы неконкурентного (аллостерического) ингибирования ферментных реакций.
- •1.4.4.Кинетика ферментных реакций при конкурентном ингибировании.
- •1.4.5. Экспериментальная оценка кинетических параметров ферментативных реакций при полном конкурентном ингибировании
- •1.4.6. Кинетика ферментативной реакций при неконкурентном ингибировании.
- •1.4.7. Экспериментальная оценка кинетических параметров ферментативных реакций при полном неконкурентном ингибировании.
- •1.4.8. Субстратное торможение.
- •Глава 2.
- •2.1.Носители для иммобилизации ферментов и клеток
- •2.2.1.Физические методы иммобилизации ферментов
- •2.2.2. Химические методы иммобилизации
- •2.3.1. Гидролитические ферменты
- •2.3.2. Применение лиаз.
- •2.3.3. Применение изомераз.
- •2.3.4.Применение оксидоредуктаз.
- •2.4.Применение иммобилизованных ферментов в микроанализе.
- •2.5 Применение иммобилизованных биокатализаторов в медицине
1.3.1.Класссификация ферментов.
К настоящему времени известно свыше 2,5 тысяч различных ферментов. Название большинства ферментов образуют добавлением суффикса – аза к названию субстрата, т.е. того соединения, на которое действует фермент. Например, лактаза /β- галактозидаза/ гидролизует лактозу до глюкозы и галактозы. Однако это не всегда так. Некоторые ферменты имеют тривиальные названия – пепсин, хемотрепсин и т.д.
Согласно международной номенклатуре все ферменты подразделяют на 6 классов, подразделяющиеся на подклассы и т.д.
I класс – оксидоредуктазы или окислительно-восстановительные ферменты. Включает 20 подклассов, в зависимости от того, на какие соединения действует.
Например 1 подкласс действует на группу СН - ОН
2 на СН = О
3 на СН-СН
4 на СН – NH2
5 на СН – NH и т.д.
Каждый фермент имеет свой 4-х значный шифр. Это относится ко всем 6 классам ферментов. Первая цифра означает класс, вторая подкласс, третья подподкласс, четвертая конкретный фермент. Чаще всего мы пользуемся рабочим названием фермента, но более точным будет систематическое название, включающее в себя химическую информацию, указывающую природу химической реакции, катализируемой данным ферментом.
Например, все наверное, слышали о ферменте глюкозооксидазе окисляющей глюкозу до глюконовой кислоты. Шифр этого фермента I.I.3.4. Рабочее (тривиальное) название глюкозооксидаза, систематическое - β-Д - глюкоза, кислород – I – оксидоредуктаза.
Первая цифра I класс оксидоредуктазы, вторая – 1 – действеут на СН-ОН группу глюкозы, третья – 3 – при отнятии Н+ его акцептором служит О2 – газообразный, а не NАД+ как в случаи с дегидрогеназами, четвертая – 4 – номер фермента в группе 1.1.3.
Другой пример алкогольдегидрогиназа. Систематическое название – алькоголь: NAД+ оксидоредуктаза. Шифр 1.1.1.1. Давайте вместе расшифруем. Первая цифра – 1 – первый класс, вторая цифра 1 – действует на СН-ОН группу, третья 1 – акцептор NАД+, четвертая 1 – номер фермента.
К оксидоредуктазам относится такие, широко известные ферменты как: лактатдегидрогеназа, каталаза, пероксидаза, линоксигеназа и т.д.
II – класс – трансферазы, ферменты переносящие функциональные группы.
2.1.– трансферазы подкласс катализирующий перенос одноуглеродных остатков метильные, карбоксильные, формальдегидные;
2.2. – трансферазы – альдегидные и кетонные остатки;
2.3. – ацилтрансферазы – ацильные (кетонные) остатки (ацетил СН3СО, сукцинаты и т.д.);
2.4. – гликозилтрансферазы – гликозильные остатки;
2.5. – трансферазы – алкильные группы;
2.6. – трансферазы – группы содержащие азот (амидные, амидиновые);
2.7. – трансферазы – группы содержащие фосфор;
2.8. – трансферазы – группы содержащие серу;
К этому классу относятся протеикиназы, гексокиназы, тирозинаминтрансфераза.
Например, фермент протеинкиназа имеет шифр 2.7.1.37.
Давайте расшифруем. Систематическое название АТР – протеин фосфотрансфераза : АТР + протеин = АДР + фосфопротеин
Первая цифра 2 – трансфераза, вторая 7 – переносит группу, содержащую фосфор, третья 1 – подкласс белок, четвертая 37 номер фермента в гуппе 2.7.1.
III класс – гидролазы, ферменты катализирующие реакции гидролиза. Этот класс включает много ферментов имеющих промышленное значение.
3.1. ферменты, действующие на сложноэфирные связи (эстеразы);
3.2. на гликозидные соединения (амилазы α и β);
3.3.на эфирные связи;
3.4.на пептидные связи (протеолитические ферменты);
3.5 на связи С-N отличие от пептидных (амидные);
3.6.на кислотно-ангидридные связи;
3.7.на С-С связи;
3.8.на С- галоидные связи;
3.9.на P-N;
3.10.на S-N;
3.11.на С-Р связи.
Пример: липазы, фофолипазы, амилазы, пектинэстеразы, целлюлазы.
Третья цифра на эфиры кислот действует фермент. Карбоновые 1.
IV класс –лиазы, ферменты катализирующие реакции расщепления.
4.1. между атомами С; 4.2. - С и О ; 4.3. - С и N : 4.4. - С и S; 4.5-С и галоиды; 4.6. - Р и О и другие.
В промышленности широко применяют фермент аспартазу (£ - аспартат – аммиак - лиаза) катализирующий обратимую реакцию синтеза аспарагиновой кислоты из фумаровой кислоты и аммиака:
£- аспарат = фумарат + NH3
Фумарат - гидралаза – фермент, катализирующий обратимую реакцию гидратации фумаровой кислоты с образованием яблочной кислоты.
V – класс – изомеразы, ферменты, катализирующие реакции изомеризации:
5.1. рацемазы и эпимеразы - 5.1.1. изомеризация аминокислот, 5.1.2. –гидрооксикислот, 5.1.3. - углеводов
Пример: лактатрацемаза, £ и D молочная кислота ИДР глюкоза, эпимераза.
5.2. цис – трансизомеразы; 5.3. внутримолекулярные оксидоредуктазы; 5.4. внутримолекулярные трансферазы; 5.5 внутримолекулярные лиазы
VI – класс лигазы, ферменты, катализирующие образование связей за счет АТР.
6.1. лигазы образующие связи С-О (аминокислота, РНК-лигазы);
6.2. С-S присоединение ацилов (например, ацетил или суцилины к коэнзиму А);
6.3. С-N аспарагинсинтетаза – синтез аспарагина из дикарбоновых аминокислот;
6.4. 5 ферментов содержащих биотин и катализирующих реакции карбоксилирования органических кислот;
6.5. образуют фосфоэфирные связи (востанавливают фосфоэфирные разрушения) в нуклеиновых кислотах.