43) Реакції з міченими антитілами або антигенами. Принципи та практичне використання реакцій імунофлюоресценції (ріф), імуноферментного (іфа) та радіо імунного аналізу (ріа).

Серологічні реакції з міткою засновані на виявленні взаємодії антигену з антитілом за міткою одного з учасників реакцій, що виявляється або візуально, або за допомогою спеціальних високочутливих приладів, що дозволяють кількісно виявити мічений субстрат і, відповідно, невідомий антиген чи антитіло.

РІФ заснована на вл-ті флуоресціюючих антитіл специфічно з’єднуватись з гомологічним антигеном і викликати їх світіння в фіолетовій і ультрафіолетовій частині спектру люмінесцентного мікроскопу. РІФ специфічна, високочутлива, використовується в основному для ідентифікації антигену і може бути здійснена в кількох варіантах.

Пряма РІФ – заснована на використанні імунофлуоресціюючих сироваток проти кожного досліджуваного антигену.

Непряма РІФ – заснована на використанні двох різних сироваток. Спочатку на першому етапі вживають немічені антитіла проти досліджуваного антигену, а на другому етапі реакції утворений комплекс антиген-антитіло обробляють флуоресціюючою сироваткою, що містить антитіла проти гамма-глобулінів того виду тварин, на яких була одержана специфічна немічена сироватка.

Или так

Реакція iмунофлюорiсценції— РIФ (метод Кунса) — заснована на тому, що антиген, оброблений iмунними сироватками з антитiлами, мiченими флюорохромами, здатний світитися в ультрафiолет.променях люмiнесцентного мiкроскопу (прямий метод). Р-цiя Кунса може бути викор. як для виявл. антигенiв, так i для визнач.антитіл. Рiзновид — непрямий метод Кунса (РНIФ). Застос. одна універсальна флюоресцируюча сироватка - антиглобулінова. На утвореному комплексі (специфічні антитіла –досліджуваний антиген) фіксуються флюоресцируючі антиглобулінові антитіла, які визивають світіння при люмінісцентний мікроскопії.

ІФА – заснований на використанні як мітки антитіл ферментів, здатних розкладати субстрати з утворенням забарвлених продуктів. Використовується як прямий, так і непрямий варіанти. Суть в тому, що спочатку на якомусь твердому матеріалі сорбують антигени (або антитіла), а потім додають всі інші інгредієнти серологічної реакції. Як твердо фазні носії антигену чи антитіл широко використовуються пластикові планшети, шарики, плівки, пробірки з різних синтетичних матеріалів. Адсорбовані на поверхні таких матеріалів антигени чи антитіла навіть висушені довго зберігають свою імунологічну специфічність і здатність вступати в СР.

Наявність і активність ферменту, зв’язаного з антитілом чи комплексом антиген-антитіло виявляють і оцінюють візуально за інтенсивність забарвлення після інкубації з відповідним субстратом. ІФА може бути виконаний за допомогою спеціального обладнання, в якому автоматично відбувається промивка реагентів буфером (вошер) та результат реєструється за допомогою фотометра (рідер).

РІА – заснований на використанні як мітки одного з компонентів СР радіоактивних ізотопів. Метод найбільш чутливий і дозволяє виявляти незначні кількості реагентів. Як і при постановці ІФА використовують прямий і непрямий варіанти. Необхідна спеціальна радіометрична апаратура для проведення РІА і реєстрації результатів.