-
Оценка пролиферативной активности лимфоцитов. Реакция бласттрансформации лимфоцитов, принцип, применение, условия постановки.
Данный метод позволяет оценивать клональную экспансию клеток, а также может использоваться для установления сенсибилизации при типе IV гиперчувствительности. Митогены - это вещества, способные индуцировать митозы. Имеется несколько митогенов для лимфоцитов: липополисахариды грамотрицательных бактерий - для В-клеток, митоген лаконоса - для Т- и В-клеток, фитогемагглютинин - для Т-клеток.
20.Реакция бласттрансформации лимфоцитов, принцип, применение, условия постановки.
Принцип метода:
В основе метода лежит способность лимфоцитов, несущих соответствующий рецептор, трансформироваться в бласты при контакте с антигеном или митогеном.
4. Постановка реакции.
В стерильные флаконы наливают по 2 мл среды 199 с антибиотиками. Готовят 2 флакона спонтанной РБТЛ, 2-3 флакона с ФГА по 0,2 мл, 2-3 флакона с АГ, который вводят с одинаковой с ФГА дозе. Во все флаконы вносят по 0,2 мл крови. Флакон помещают на 2-3 суток в термостат при Т 37 °С. Каждый день флаконы встряхивают. Затем содержимое флакона переливают в центрифужную пробирку центрифугируют 5 минут при 3 000 об./мин. Супернатант отбрасывают. Осадок ресуспендируют воздухом и готовят по 2 мазка на каждый флакон. Мазки фиксируют, окрашивают азур-эозином по методу Романовского.
5. Учет реакции бласттрансформации лимфоцитов.
Мазки микроскопируют под иммерсионным объективом 90 х 10.
Подсчет процент, бласттрансформированных лимфоцитов производят следующим образом:
на общее количество лимфоцитов (100-500 клеток) подсчитывают количество средних лимфоцитов и бластов. Результат РБТЛ выражают в процентах бласттрансформации и коэффициент стимуляции, который считают по формуле:
Кст =% трансформированных клеток в опыте/ % трансформированных клеток в контроле
Процент трансформированных клеток на ФГА составляет 50-90°/о, на АГ - 15-30°/ спонтанно трансформированных клеток – 10%
