- •1. Характеристика бактериоскопического метода исследования.
- •2. Световые микроскопы. Принципы устройства простого, фазовоконтрастного, темнопольного, люминесцентного микроскопов и их применение в микробиологии. Техника иммерсионной микроскопии.
- •3. Типы микроскопических препаратов. Этапы приготовления фиксированного мазка. Простые методы окраски.
- •4. Дифференциально-диагностические методы окраски микробов. Окраска по Граму, механизм и техника окраски.
- •5. Морфология бактерий. Отличия прокариотов от эукариотов. Основные формы бактерий.
- •6. Структура и функции поверхностных образований бактериальной клетки. Капсула. Методы выявления.
- •7. Структура и функции клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Формы бактерий с дефектами клеточной стенки.
- •8. Цитоппазматические структуры бактерий, функции, методы выявления. Кислотоустойчивые микробы. Метод окраски.
- •9. Покоящиеся формы микробов. Спорообразование у бактерий, стадии, методы выявления спор.
- •10. Подвижность бактерий, методы выявления подвижности.
- •11. Принципы систематики микробов. Систематическое положение микробов. Таксономические категории. Понятие и критерии вида.
- •17. Питание микробов. Источники углерода, азота, ростовых факторов и зольных элементов. Способы питания. Способы проникновения питательных веществ в клетку через мембрану.
- •18. Дыхательный аппарат бактерий. Пути биологического окисления. Классификация микробов по этому признаку
- •19 Способы размножения микробов. Механизм и фазы клеточного деления.
- •20. Характеристика бактериологического метода исследования
- •3. Заключение.
- •21. Питательные среды для аэробов и анаэробов. Требования, предъявляемые к питательным средам, классификация.
- •22. Методы выделения чистых культур аэробов.
- •23. Методы выделения чистых культур анаэробов.
- •24. Идентификация микроорганизмов морфологическая, культуральная серологическая, биологическая, генетическая.
- •26. Генетический аппарат бактерий (хромосомы, плазмиды) характеристика бактериальных транспозонов. Биологическая роль плазмид.
- •27. Виды изменчивости бактерий. Фенотипическая и генотипическая изменчивость. Понятие о популяционной изменчивости.
- •28. Мутационная изменчивость. Генетические рекомбинации. Практическое значение изменчивости микроорганизмов. Понятие о генной инженерии и биотехнилогии.
- •29. Молекулярная диагностика. Цель. Задачи. Методы.
- •30. Молекулярная гибридизация. Полимеразная цепная реакция.
- •31. Учение об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Отличительные признаки инфекционных заболеваний. Типы инфекций.
- •32. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность Факторы патогенности.
- •33. Роль макроорганизма, физической и социальной среды в инфекционном процессе.
- •34. Биологический метод исследования задачи, оценка этапы.
- •35. Химиотерапия и химиопрофилактика. Антибиотики определение классификация.
- •36. Механизм действия антибиотиков.
- •37. Побочное действие антибиотиков.
- •38. Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам.
- •39 Методы изучения чувствительности микробов к антибиотикам.
- •40. Экология микроорганизмов. Типы экологических связей.
- •41. Характеристика нормальной микрофлоры человека и ей биологическая роль. Методы изучения. Гнотобиология. Дисбактериоз. Причины развития, принципы коррекции.
- •42 Стерилизация, дезинфекция. Определение понятий, методы проведения.
- •43. Асептика, антисептика. Определение понятий. Способы проведения.
36. Механизм действия антибиотиков.
Ингибиторы синтеза клеточной стенки. бета-лакткмные.
Ингибиторы синтеза белка (левомицитин, тетрациклин, аминогликозиды)
Ингибиторы синтеза ДНК и РНК (фторхинолоны, многие противоопухолевые антибиотики)
Ингибиторы функции цитоплазматической мембраны (нистатин, полимексины).
Подавление синтеза НК:
а) РНК на уровне РНК – полимеразы.
б) ДНК на уровне ДНК
в) разрушение ДНК – гиразы, хинолоновые.
37. Побочное действие антибиотиков.
Аллергические реакции (наиболее частые).
Вызывают дизбактериозы.
Оказывают токсическое действие
Иммунодепрессивное действие.
Возникновение а/б устойчивых форм бактерий.
38. Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам.
Естественная
Приобретенная:
а) фенотипическая
б) генотипическая – связана с изменением генетической активности, носит стойкий наследственный характер.
Пути возникновения:
Спонтанные мутации в ДНК
эписомальный или плазмидный (наличие R плазмиды)
Культура считается устойчивой, если ее рост не подавляется теми минимальными концентрациями АБ, которые обычно подавляют бактерии этого вида.
Биохимические аспекты устойчивости:
Синтез ферментов, разрушающих АБ
Модификация мишени, на которую действуют антибиотики.
Изменение проницаемости клеточной стенки для антибиотика
Повышение скорости выведения антибиотика
Повышение скорости продукции субстрата.
39 Методы изучения чувствительности микробов к антибиотикам.
Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам применяют три метода: диффузии препарата в агар из бумажных дисков, серийных разведений в бульоне и в плотной питательной среде. Имеются также ускоренные методы.
В качестве критерия чувствительности микробов к антибиотикам избирают их терапевтические концентрации в крови и других биотопах животного организма после введения определенных доз препарата Мерой чувствительности микробов является минимальная концентрация препарата (мкг/ед/мл), которая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта (минимальная подавляющая концентрация - МПК).
Метод бумажных дисков Для его проведения нужны стандартные заводские диски, пропитанные антибиотиками в определённой концентрации, и стандартная питательная среда. Из суточной микробной культуры готовят взвесь на физрастворе (густота 1 млрд микробных тел в I мл), которую затем разводят в 10 раз. На поверхность плотной среды наливают 1-2 мл указанной культуры и покачиванием чашки равномерно распределяют ее по всей поверхности среды Остаток удаляют пипеткой. Среду подсушивают 10-15 мин при комнатной температуре, после чего на поверхность газона стерильным пинцетом накладывают диски (не более 6 на чашку) на расстоянии 2 см друг от друга и от краев чашки Инкубируют в термостате при 37°С - 24 часа
Учет: в падающем свете на фоне темной поверхности измеряют диаметр (с учетом диаметра диска) задержки роста. Оценку результатов проводят по специальной таблице путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны н таблице. Культуру относят к одной из трех категорий.
чувствительная, умеренно-чувствительная и устойчивая Укачанные категории предложены клинической химиотерапией, исходя из отношения между МПК и концентрацией препарата в крови при введении терапевтических доз. К чувствительным относят культуры, рост которых подавляется концентрациями препарата, создаваемыми в сыворотке крови больного в процессе назначения обычных доз антибиотика Умеренно-устойчивыми считаются культуры, подавляемые концентрациями, которые могут быть достигнуть при введении максимальных доз препарата. Устойчивые - культуры, рост которых не подавляется при введении даже максимально допустимых доз препарата.
Указанный метод является полу количественным. Для получения количественных результатов используют методы серийных разведений. Метод серийного разведения антибиотика в бульоне. Готовят ряд убывающих разведений антибиотика в пробирках с бульоном (кратные 2) и добавляют испытуемую культуру. Контролем служит пробирка с бульоном и культурой без антибиотика Через сутки инкубации в термостате определяют МПК. которая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста. Для определения бактерицидного действия из нескольких пробирок с задержкой роста делают высев петлей на сектора чашки Петри с МПА. За бактерицидную концентрацию принимают концентрацию препарата в последней пробирке, высев из которой не дал роста. Метод серийных разведений в плотной питательной Среде. Этот метод более чувствителен и точен. Каждый антибиотик испытывают в трех концентрациях (исходя из уровней чувствительности микроорганизмов), которые добавляют к расплавленному и охлажденному агару. Агар с антибиотиками разливают в три чашки Петри (по одной чашке на каждую концентрацию). Контролем служит чашка с агаром без антибиотика. Посев производят петлей или лучше штампом-репликатором, который позволяет одновременно определить чувствительность к трем концентрациям антибиотика 25-50 культур (в зависимости от числа лунок в штампе). Учет роста в термостате осуществляют спустя сутки. Культура считается чувствительной, если на месте посева нет ни одной колонии. Микроорганизмы, рост которых подавлен всеми 3 концентрациями, рассматривают как чувствительные (в этом случае можно применять антибиотик в терапевтической дозе); 2-й и 3-й концентрациями как среднечувствительные (антибиотик можно применять только в увеличенной дозе); 3-й как умеренно-устойчивые микроорганизмы (антибиотик можно применять только местно); растущие на всех трех концентрациях, относят к устойчивым (антибиотик нельзя применять).
Ускоренные методы. Позволяют получить результат через 3-4 часа. Чаше всего пользуются методом. основанным на изменении окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) среды в процессе роста микроба в присутствии антибиотика
Ход работы: при использовании метода бумажных дисков или серийных разведений антибиотика в агаре через 4-6 часов роста культуры поверхность чашки обрабатывают индикатором, реагирующим на ОВП среды (тетразолий хлорид). В местах роста микроба среда окрашивается в красный цвет, при отсутствии роста микроба цвет среды не меняется. Учет и критерии оценки, как и при обычных методах. В последние годы разработана специальная тест-система ускоренного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (посев тест-микроба в жидкую среду с антибиотиком, инкубация 4-6 часов с последующим определением прироста мутности раствора опытных образцов в сравнении с контрольными).
Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
Полуколичественный - диффузии в агар с применением бумажных дисков с антибиотиками. Учет -
диамметр зон задержки роста микроорганизмов вокруг диска. Оценка: устойчивость - отсутсвие зоны;
малая чувствительность - зона до 10 мм; чувствительность - зона более 10 мм Задача выбрать
эффективный аппарат.
Количественные:
а) разведение антибиотиков в мясо-пептонном бульоне;
б) разведение антибиотиков в мясо-пептонном агаре.
Учёт - наличие или отсутствие роста микробов в питательной среде с различными концентрациями препарата.
Оценка - минимальное количество препарата, подавляющее рост бактерий (мин в мкг'мм) Задача: позволяет рекомендовать эффект антибиотика и его дозу Ускоренный:
а) полуколичественный с дисками и индикаторами. Оценка - диаметр неокрашенных зон вокруг дисков
б) количественный разведение антибиотиков в МБП с углеводами и РН- индикаторами. Оценка- изменение цвета среды в пробирках