9. Бактерии, утратившие клеточную стенку. L-формы, сферо- и протопласты

При действии лизоцима, пенициллина и некоторых других веществ, разрушающих пептидогликан или нарушающих его синтез, бактерии вначале превращаются в сферопласты, а далее, полностью утратив клеточную стенку, – в бесформенные протопласты, быстро подвергающиеся плазмолизу.

Дефектные по клеточной стенке бактерии, которые образуются в организме, обладают жизнеспособностью и патогенностью, называют L–формами

Особенности L- форм

Сходство морфологии:образование нитевидных, волокнистых, шаровидных форм

Сходные культуральные свойства: анаэробные условия роста, потребность в холестерине, сывороточных белках

Превращение грам+ в грам- бактерии

Изменение антигенных свойств

Снижение вирулентности (утрата факторов адгезии, инвазии, эндотоксина)

Устойчивость к некоторым антибиотикам

Происходит переход острой формы болезни в хроническую

10. Капсула структура и функция, окраска по Бури-Гинсу

капсула - поверхностный слизистый слой, прочно связанный с клеточной стенкой и имеющий четкие внешние границы, толщиной более 0,2 мкм.

По химическому составу – это полисахариды или полипептиды. Молекулы гидратированы, поэтому капсула не воспринимает красители

Функции капсул:

Предохраняют бактерий от высыхания, повреждения

Содержат капсульные антигены (К-антигены)

Являются фактором патогенности (маскируют бактерии от фагоцитов, подавляют фагоцитоз)

Окраска:

в каплю туши, разведенной в 10 раз водой, вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметному стеклу; мазок высушивают, фиксируют (наносят 2–3 капли спирта и сжигают его на стекле), окрашивают в течение 3–5 мин фуксином Пфейффера, промывают водой, высушивают; на темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокруг красных бактерий.

11Роение и функции цитоплазматической мембраны

строение:

2-х слойный фосфолипид, в котором значительная часть фосфолипидной фракции наружного слоя замещена молекулами ЛПС

Имеет мозаичное строение

Содержит специфические белки (основные и второстепенные)

Липополисахарид (ЛПС)

Состоит из 3 звеньев:

Основное базисное : 2кето-3дезоксиоктаната (КДО), гал, глю, геп, NацГлю;

Липид А;

Специфические олигосахаридные, повторяющиеся звенья из 3-4 сахаров;

Функции цитоплазматической мембраны бактерий:

Она является барьером, поддерживающим осмотическое давление в клетке.

Совместно с клеточной стенкой участвует в регуляции роста и клеточного деления бактерий

В ней содержится значительное количество ферментов, в том числе системы переноса электронов

С ЦПМ связаны жгутики и аппарат регуляции их движения.

ЦПМ участвует в процессах транспорта (активного и облегченной диффузии) веществ.

Участвует в синтезе компонентов клеточной стенки, спор, капсул.

Участвует в образовании мезосом и стабилизации рибосом

12. Споры и спорообразование у бактерий. Методы окраски по Ожешки и Шефферу

Спорообразование наблюдается в условиях, неблагоприятных для вегетативных форм. У бактерий выделяют 3 вида спор:

1) ЭНДОСПОРЫ (истинные споры) – располагаются внутри, имеют высокий коэффициент светопреломления.

2) АРТОСПОРЫ – обр-ся в рез фрагментации вегетирующих Б!!

3) ХЛАМИДИОСПОРЫ (микроцисты) – формируются в рез утолщения стенок вегетирующей  и накопления запасных пит в-в.

К спорообразованию способна лишь небольшая группа эубактерий, а из патогенных для чка только – Clostridium и Bacillus. Каждая вегетативная  образует 1 эндоспору. Споры УСТОЙЧИВЫ к температуре, высыханию, радиации и химическим в-вам (включая 70° этанол). Могут сохраняться оч длительное время. Предположительно споры могут храниться в сухой почве до 1000 лет, но фактически уже за 50 лет 90% спор теряют жизнеспособность.

Морфологически споры м.б. круглыми, овальными, эллиптическими, некоторые снабжены «рёбрами жесткости».

ПРОЦЕСС СПОРУЛЯЦИИ начинается сразу при возникновении дефицита питательных в-в и длится около 8ч, при этом никаких внешних источников питания или энергии не требуется. Стимулируют – глюкоза, Р и NH₄, угнетают –пептон, лактоза, NaCl, CaCl₂. Выделяют след ЭТАПЫ:

1) Подготовительная стадия – прекращается деление, начинается накопление липидных включений.

2) Стадия предспоры – появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменённой плотностью и тинкториальными свойствами.

3) Формирование оболочки

4) Стадия созревания споры – происходит её уплотнение и прекращение любых перемещений в –спорангии.

5) Разрушение родительской .

В оптимальных условиях происходит прорастание споры. Сначала она активно поглощает воду и набухает, усиливается дыхание, возрастает активность ферментов, происходит выделение АК – активация метаболизма (в этот период спора УТРАЧИВАЕТ ТЕРМОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ). Затем спора лопается и из неё выходит вегетативная форма.

Спорообразующие микроорганизмы - это бациллы и клостридии. Отличия бацилл от клостридий: споры бацилл не превышают диаметр бактериальной клетки, у клостридий - превышает, бациллы по типу дыхания- аэробы, а клостридии- строгие(облигатные) анаэробы. Известны и спорообразующие кокки.

Метод окраски спор по Ожешко

1. На высушенный нефиксированный препарат наливают несколько капель 0,5% раствора хлористоводородной кислоты и подогревают 1 — 2 мин , после чего остатки кислоты сливают.

2. Остывший препарат промывают водой, подсушивают и фиксируют на пламени горелки.

3. Окрашивают карболовым фуксином Циля (рец. б, с. 343) с подогреванием до появления паров.

4. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение нескольких секунд.

5. Промывают водой.

6. Докрашивают метиленовым синим (рец. 9, с. 343) или 1% водным раствором малахитового зеленого (рец. 16) 3—5 мин.

Техника окраски по Шефферу-Фултону 1.нанести мазок

2.На раствор наносят водный раствор бриллиантовой зелени, и мазок с краской нагревают над пламенем горелки 3 мин

3.Краску сливают, препарат быстро промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой;

4.Окрашивают мазок раствором сафранина 2-3 мин, затем краску сливают, мазок вторично промывают водой и подсушивают фильтровальной бумагой.