Ход работы Приготовление препарата молочнокислых бактерий

Оборудование и материалы: Кефир (йогурт), предметное стекло, кристаллизатор, матрасик, капельницы с метиленовым синим и со смесью спирта с эфиром, микроскоп, фильтровальная бумага, метиленовый синий, спирт+эфир , бактериологическая петля.

Для микроскопического исследования за молочнокислых бактерий готовят препарат из скисшего молока. Бактериологическую петлю вносят в сгусток и, повернув ее вокруг оси, извлекают, прикоснувшись ею и к пленке. Сгусток размазывают на предметном стекле очень тонким слоем без воды. Сушат на воздухе. Фиксируют смесью спирта с эфиром (1:1), несколько раз нанося на мазок смесь и сливая ее. При такой фиксации погибают и прикрепляются к стеклу бактерии, и параллельно эфиром удаляется жир. Последнее необходимо, т.к. капли жира на препарате мешают окраске и микроскопированию.

Фиксированный препарат окрашивают, заливая метиленовым синим на 2-3 минуты, промывают водой, высушивают и микроскопируют при большом увеличении.

Под микроскопом на препаратах видно преобладание мелких округлых клеток - Streptococcus lactis, соединенных в короткие цепочки ( см. приложение, рис.1). Этот микроорганизм - возбудитель естественного скисания молока в наших широтах. Оптимальная температура для его развития - 30^оС. В результате жизнедеятельности молочнокислого стрептококка накапливается до 1% молочной кислоты.

Нередко на препарате видны тонкие палочки рода L.bulgaricus разных размеров. Чаще всего встречаются так называемая болгарская палочка - возбудитель естественного скисания молока в южных широтах. Оптимальная температура для нее - 40^оС. Этот микроорганизм кислотоустойчив, накапливает до 3.5% молочной кислоты.

Если на поверхности прокисшего молока появилась пленка, то в мазке обнаруживается также и молочная плесень. Четырехугольные или овальные клетки ее отличаются от клеток молочнокислых бактерий большими размерами.

Задание: Зарисуйте и опишите обнаруженные вами в мазке формы микроорганизмов. Постарайтесь определить род, к которому они относятся. Обнаружили ли вы наличие плесени? Дрожжей?

Лабораторная работа №5 биология бактерий р.Clostridium как продуцента биотехнологии

1. Понятие о маслянокислом брожении

Под термином маслянокислое брожение понимается анаэробный процесс превращения различных органических соединений в масляную кислоту. Такой тип брожения характерен для бактерий рода Clostridium. Однако многие представители этого рода помимо масляной кислоты образуют такие дополнительные продукты как: уксусная кислота, этанол, бутиловый и изопропиловый спирты, ацетон, углекислый газ и водород. Из-за этого некоторые маслянокислые бактерии иногда называют в литературе ацетонобутиловыми.

Субстратами брожения для клостридиев могут служить самые разнообразные соединения. В связи с этим принято различать три группы бактерий рода клостридий.

Сахаролитические клостридий способны сбраживать углеводы (глюкозу, фруктозу, лактозу, ксилозу и пр.). Некоторые виды могут использовать крахмал (С. butiricum), целлюлозу (С. cellobioparum), пектиновые вещества (С. felsineum), хитин (С. sporogenes). Типичными сахаролитическими клостридиями являются и наиболее известные виды: С. butiricum, С. pasteurianum.

К протеолитическим клостридиям относятся бактерии, имеющие активные протеолитические ферменты, и поэтому способные сбраживать белки и пептиды, гидролизуя их сначала до аминокислот. В эту группу входят многие сапрофитные виды (С. putrificum, С. histolyticum), а также некоторые патогенные формы: С. botulinum - продуцент смертельно ядовитого токсина ботулина; С. tetani - столбнячная палочка, образующая в организме человека столбнячный токсин.

Пуринолитические клостридий приспособились к сбраживанию пуринов и пиримидинов.

Таким образом, типы брожений, осуществляемые клостридиями, необычайно разнообразны как в отношении используемых субстратов, так и образуемых конечных продуктов.

Что касается биосинтетических процессов, многие клостридий способны использовать углекислый газ для построения органических молекул в своей клетке (С. kluyveri), а также молекулярный азот. Первый анаэробный азотофиксатор был выделен из почвы и назван в честь Л. Пастера Clostridiun pasteurianum.