ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №

ТЕМА: «Исследование плазменной системы гемостаза»

Цель работы – составить коагулограмму и сравнить полученные результаты параметров с нормами.

Подготовка исследуемого материала:

Кровь для получения плазмы берется в пластиковую или силиконированную пробир-ку с 3,8% или 3,2% раствором цитрата натрия в соотношении 1 часть коагулянта к 9 частям крови (1 : 10), это соотношение является критическим. Необходимо следить за тем, чтобы кровь была взята точно в полном объеме. Важно не допускать травмы или стаза во время взятия.

При обнаружении микро или макро сгустков, а также несоответствие объема крови количеству добавленного цитрата проба не может быть использована!!!

Кровь центрифугируется при 3000 об./мин. в течение 10 минут. Плазму сразу после центрифугирования отобрать в пластиковую пробирку с крышкой. Плазма может храниться при комнатной температуре (18 – 26 ⁰ С) в течение 2-х часов; в холодильнике (2 – 8 ⁰ С) – до 4-х часов; в замороженном виде (при -20 ⁰ С) – до 2-х месяцев. Размораживать пробы следует быстро и сразу же анализировать. Для предотвращения потери факторов V и VII, не инкуби-ровать пробы дольше 5 минут при 37 ⁰ С.

Факторы, влияющие на точность анализа:

Гемолиз, повышающий уровень гемоглобина в плазме больше чем на 2000 мг/л, вызывает изменение времени образования сгустка в пределах 10%. Однако, гемолиз в свежо взятой крови может указывать на травматическое взятие крови, которое может привести к выделению тканевого фактора, так же влияющего на результаты анализов. В иктеричных пробах с уровнем общего билирубина более 20 мг/дл время образования сгустка может увеличиваться в пределах 10%. Но в то же время увеличение общего билирубина указывает на заболевания печени, которое часто приводит к снижению синтеза коагулогических факторов. Гепарин ингибирует образование сгустка. Слабая липемия не влияет на анализы.

1).Определение времени свертывания крови по методу Ли-Уайта.

Принцип метода:

Метод основан на оценке времени спонтанного свертывания цельной крови при температуре 37 ⁰ С.

Диагностическое значение анализа:

Нормальное значение 6 – 10 минут. Удлинение времени свертывания крови наблюдается при коагулопатиях (дефиците одного из факторов свертывающей системы плазмы: факторы XII, XI, IX, VIII). Укорочение времени свертывания указывает на тенденцию к гиперкоагуляции.

Ход работы:

В пробирку влить μл цельной крови. Пробирку поместить в водяную баню, нагретую до 37 ⁰ С и тут же включить секундомер. Содержимое пробирки постоянно перемешивать. Выключить секундомер в момент образование сгустка.

Результаты:

Выводы:

2).Определение времени рекальцификации плазмы по методу Бергергофа и Рока.

Принцип метода:

При добавлении 0.025 М раствора CaCl₂ плазма вновь обретает способность к свертыванию.

Диагностическое значение анализа:

В норме время рекальцификации составляет 60 – 120 секунд. Патологическим считается удлинение времени рекальцификации плазмы более 250 секунд, что указывает на наличие у больного коагулопатии, укорочение же свидетельствует о тенденции к гиперкоагуляции.

Ход работы:

В пробирке смешать 100 μл плазмы и 100 μл физ. раствора, прогреть в водяной бане при температуре 37 ⁰ С в течение 40 – 50 секунд. Прибавить 100 μл раствора CaCl₂ и одновременно включить секундомер. Содержимое пробирки непрерывно перемешивать. В момент образования сгустка выключить секундомер и снять его показания.

Результаты:

Выводы:

3). Протромбиновый индекс (пти) по методу в. П. Балуда.

Диагностическое значение анализа:

В норме ПТИ составляет 80 – 105%. Уменьшение значения ПТИ указывает на снижение свертывающих свойств плазмы, заболевания печени, прием антикоагулянтов, а увеличение может произойти при тромбоэмболических состояниях.

Ход работы:

В пробирке смешать 200 μл раствора CaCl₂ (0,025 М), 100μл физ. раствора и 100 μл тромбопластина. Прогреть на водяной бане при температуре 37 ⁰ С в течение 30 – 40 секунд, затем добавить 100 μл плазмы и одновременно включить секундомер. Содержимое пробирки непрерывно перемешивать. В момент образования сгустка выключить секундомер и снять его показания. Расчет ПТИ производить по формуле:

ПТИ =	время контроль	х 100%
	время проба

или по таблице (см. Приложение).

Результаты:

Выводы:

4).Определение активированного частичного тромбопластинового времени ачтв.

Диагностическое значение анализа:

АЧТВ – тест на внутренний путь активации протромбина при условии стандартизации активации факторов XI и XII. Он зависит от содержания в плазме крови факторов VIII, IX, X, XI, XII, а так же II, V и фибриногена. АЧТВ является тестом, на основе которого ставят заменные пробы для выявления дефицита факторов. Если добавление 10% контрольной плазмы (а тем более 50%) не корригирует первоначального удлинения АЧТВ, то это указывает на присутствие антикоагулянтов. Если нормализация удлиненного АЧТВ происходит уже при добавлении 10% контрольной плазмы, то это указывает на дефицит плазменных факторов. В этом случае проводят коррекционные пробы для качественного исследования дефицита отдельных факторов. Так же используется для контроля лечения прямыми антикоагулянтами (гепарином).

Удлинение АЧТВ бывает при гемофилии (А – наследственный дефицит фактора VII; В – фактора IX; С – фактора XI); болезни фон-Виллебранда; наличии ингибитотров сверты-вания крови (гепарин, продукты деградации фибриногена). Укорочение – повышенная свер-тываемость; неправильное взятие крови (попадание тканевого тромбопластина в пробирку).

Ход работы:

В пробирке смешать 50 μл плазмы и 50 μл реактива АЧТВ. Инкубировать в водяной бане при температуре 37 ⁰ С 3 минут, после чего добавить 50 μл CaCl₂, и одновременно включить секундомер. Содержимое пробирки непрерывно перемешивать. В момент образо-вания сгустка выключить секундомер и снять его показания.

Результаты:

Выводы: