19

Содержание

Тема 1 Общая физиология крови 2

Л/р 1. Методы механического обездвиживания мелких грызунов. Техника взятия крови, подсчета форменных элементов у человека и крысы. 2

Методы обездвиживания мелких грызунов 2

Устройство смесителя 2

Устройство и подготовка счетной камеры (гемоцитометра) 2

Техника взятия капллярной крови у крыс 3

Техника взятия капллярной крови у человека 3

Л/р 2. Определение гематокрита методом Уинторба. 4

Тема 2 Физиология эритроцитов 5

Л/р 3. Подсчет эритроцитов. 5

Л/р 4. Определение содержания гемоглобина в крови. 7

Л/р 5. Определение границ осмотической устойчивости эритроцитов, наблюдение осмотического гемолиза. 9

Л/р 6. Агрегация эритроцитов в микроциркуляторном русле. 11

Тема 3 Физиология лейкоцитов 12

Л/р 7. Подсчет лейкоцитов крови. 12

Л/р 8. Освоение техники приготовления мазка крови, его фиксации и окраски. Подсчет лейкоцитарной формулы и лейкоцитарного профиля. 13

Тема 4 Физиология тромбоцитов 17

Л/р 9. Коагулометрия. 17

Тема 5 Иммунные реакции 18

Л/р 10. Определение групповой принадлежности крови 18

Основные источники, использованные при подготовке методических рекомендаций: 19

Тема 1Общая физиология крови л/р1. Методы механического обездвиживания мелких грызунов. Техника взятия крови, подсчета форменных элементов у человека и крысы.

Цель.

Ознакомиться с техникой взятия венозной и артериальной крови. Освоить методы механического обездвиживания мелких грызунов. Ознакомиться с устройством смесителя и счетной камеры. Освоить методы взятия капиллярной крови.

Приборы и материалы.

1. Пластиковые пеналы для обездвиживания крыс, скарификаторы, ножницы, вата, спирт этиловый 96%, диствода, йод, моток ниток, фильтровальная бумага.

2. Микроскопы, счетные камеры Горяева и Фукса-Розенталя, покровные стекла, смесители для эритроцитов и лейкоцитов, мандрены, резиновые трубочки, 3%-ный раствор хлористого натрия. Объект исследования: белая лабораторная крыса или человек.

Ход работы.

• Методы обездвиживания мелких грызунов

При взятии венозной крови крысу фиксируют в пластиковом пенале. Для этого ее помещают на ровную поверхность и, придерживая за хвост, ждут, пока она войдет пенал. Опускают задвижку (нужно следить, чтобы хвост попал в выемку в нижней части задвижки). Регулируют длину пенала в соответствие с размерами крысы (нужно быть осторожным, чтобы не придавить передние лапки). После этого переднюю часть пенала закрепляют с помощью винта. Если крыса не хочет входить в пенал полностью, нужно наклонить его слегка вперед. Если после лабораторной она не хочет выходить – пенал наклоняют слегка назад. Такое "приподнятое" положение крысе не нравится, и она выходит самостоятельно, ее не приходится вытягивать за хвост.

Выполнять фиксацию следует без шума и резких движений, иначе стресс может вызвать сужение сосудов и ускорение свертывания крови.

• Устройство смесителя

При определении количества форменных элементов с помощью счетных камер кровь предварительно разводится в специальных смесителях (меланжерах). Смеситель представляет собой пипетку с ампулообразным расширением, в котором находится стеклянная бусинка. Она способствует лучшему перемешиванию крови с жидкостью, которой ее разводят. В смесителе для эритроцитов бусинка красная, для лейкоцитов – белая. На капилляре смесителя нанесены две метки: 0,5 и 1,0. Третья метка стоит за ампулообразным расширением: на смесителе для эритроцитов 101, для лейкоцитов – 11. Последние метки указывают во сколько раз объем ампулы больше объема капилляра. Смеситель для эритроцитов дает возможность получить разведение в 100 и 200 раз, а смеситель для лейкоцитов – в 10 и 20.

Для подсчета эритроцитов а короткий конец смесителя натягивают резиновую трубку (стеклянный мундштук должен быть предварительно простерилизован). Длинный конец погружают в каплю крови и набирают ее до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха (смеситель при этом держат горизонтально). Вытирают кончик капилляра ватой или фильтровальной бумагой, опускают в 3%-ный раствор хлористого натрия и набирают его до метки 101, т.е. разводят кровь в 200 раз. С заполненного смесителя снимают резиновую трубку, и, зажав концы средним и большим пальцами правой руки, в течение 1-2 минут встряхивают его. После этого из смесителя выпускают 2-3 капли жидкости, притрагиваясь кончиком смесителя к фильтровальной бумаге.