78. Клонирование генов. Векторы

Для исследования структуры и свойств выделенных

(синтезированных) генов и дальнейших манипуляций с ними необходимо иметь

не одну или две, а сотни и тысячи копий данного гена, которые получают

путем клонирования. Клонирование генов осуществляется путем встраивания

гена в плазмиды — векторы, способные при введении их в клетку автономно

реплицировать свою ДНК, а заодно и последовательность нуклеотидов

встроенного гена. С помощью векторов размноженный ген может быть

перенесен в клетки бактерий, растений или животных.

79. Уникальные и повторяющиеся посл-ти днк.

В геномных последовательностях ДНК можно приближенно выделить три составляющие: в первой содержатся многочисленные копии одинаковых фрагментов (сателлитная ДНК); во второй находятся умеренно повторяющиеся последовательности, рассеянные по геному; а в третьей уникальная ДНК. В сателлитной ДНК различные копии представлены неодинаково - их численность варьируется от сотен до миллионов. Поэтому они обычно еще подразделяются на мини- и микросателлитов.

Основные классы повторов – диспергированные и тандемные.

80. Регуляторные элементы генов.

У каждого структурного гена имеется большой регуляторный район, содержащий ряд различных последовательностей, например, для посадки фермента РНК-полимеразы, связывания транскрипционных факторов и много другого. Один из таких участков называется матрикс-ассоциированный район (МАР). Согласно современным представлениям, ген может считываться РНК-полимеразой, только если он к чему-то прикреплен. Как правило МАР расположены в промоторных областях и, реже, в интронах генов.

81. Мини-сателлитные днк.

Это неинформативные участки ДНК

Микро- (от 1 до 4 п.о. в основном повторяющемся блоке) и минисателлитные (с бoльшим числом п.о. в индивидуальном повторе) ДНК характеризуются высокой вариабельностью по числу копий в геномах организмов даже одного вида и в ряде случаев обладают генетической нестабильностью как в норме, так и при некоторых патологических состояниях организмов. Благодаря этому свойству мини- и микросателлиты часто называют тандемными повторами с изменяющимся числом копий

ОСОБЕННОСТИ ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ПРОКАРИОТ

82. Использование трансформации и трансдукции в генетическом анализе.

При трансдукции переносится один-два сцепленных гена что позволяет проводить картирование сцепленных локусов. Такой опыт проводили Демерек с сотрудниками.

83. Почему гены эукариот редко экспрессируют в бактериальных клетках.

Потому что у эукариот интрон-экзонное строение гена, а у прокариот оперонное. Кроме того различаются ферментативные системы транскрипции.

84. Эписомы. Плазмиды.

Плазмида - это кольцевой фрагмент ДНК, несущий один или несколько генов и находящийся в цитоплазме. Бывают искусственно синтезированные и естественно образующиеся у бактерий при конъюгации. Эписома - это плазмида, встроившаяся в бактериальную ДНК.

85. Схема лак-оперона.

Оперон- группа геном, транскрибируемых на одну молекулу мРНК и находящаяся под контролем одного оператора. В лак-опероне есть участок, кодирующий фермент бета-галактозидазу, расщепляющий лактозу, ген-регулятор и участок-оператор.Ген-регулятор кодирует белок-репрессор, который, соединяясь с оператором (иногда соединяясь с ко-репрессором), блокирует синтез генов. Вещество- индуктор(лактоза) блокирует репрессор и синтез идет нормально