- •Билет 1 Современная аналитическая химия. Классификации биологических объектов. Методология получения биологического материала и экстракции биологических молекул и субклеточных структур
- •Принципы ямр-спектрометрии
- •Билет 2 Основные типы ямр-спектрометров
- •Билет 3 Центрифуги и их роторы.
- •Билет 4 Методы центрифугирования для разделения клеток, субклеточных структур и биологических молекул
- •Билет 5 Мембранные технологии разделения биологического материала
- •Билет 6 Хроматография. Классификация методов хроматографии
- •Основные методы рентгеновского анализа биологического материала
- •Билет 7 Общая схема и основные элементы конструкции газовых хроматографов
- •Современная рентгеновская томография
- •Билет 8 Общая схема и основные элементы конструкции жидкостных хроматографов
- •Билет 9 Основные хроматографические методы разделения и анализа биологических веществ
- •Масс-спектрометрия (идентификация молекулы по ее осколкам). Основные типы конструкции масс-спектрометров
- •Билет 10 Основные электрофоретические методы разделения и анализы биологических объектов
- •Основные способы ионизации молекул для их масс-спектрометрического анализа
- •Билет 11 Спектрометрия и классификация методов спектрометрии
- •Масс-спектрометрия биологических объектов
- •Билет 12 Спектрометрия видимого и ультрафиолетового спектра. Общая схема и основные элементы конструкции спектрофотометров для измерений в видимом и ультрафиолетовом диапазонах спектра
- •Изотопные и радиоизотопные методы в биохимии и биофизике
- •Билет 13 Спектрофлюоресцентные методы анализа. Общая схема и основные элементы конструкции спектрофлюориметров.
- •Биофизические основы современных методов анализа первичной структуры нуклеиновых и белковых молекул
- •Билет 14
- •Принципы микроскопии сверхвысокого разрешения
- •Билет 15 Фурье- спектрометрия. Основные типы ик-Фурье-спектрометров
- •Методы электронной микроскопии
- •Билет 16 Спектрометрия комбинационного рассеивания (Раман спектрометрия)
- •Оптические методы анализа клеточной и субклеточной структуры
- •Билет 17 Принципы эпр-спектромерии
- •Билет 18 Проблемы измерения и анализа в современных биохимических, молекулярно-биологических, медицинских и биотехнологических исследованиях
Билет 9 Основные хроматографические методы разделения и анализа биологических веществ
Хроматография («хромо» цвет, «графо» пишу)– это метод разделения и определения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами –подвижной и неподвижной. Неподвижной (стационарной) фазой служит твердое пористое вещество (часто его называют сорбентом) или пленка жидкости, нанесенная на твердое вещество. Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу, иногда
под давлением. Различия в силе взаимодействия компонентов пробы с неподвижной фазой приводят к тому, что при достаточно большом времени движения компоненты разделяются. Предложена в 1906 г. М. С. Цветом, русским ботаником. Он использовал колоночную хроматографию для разделения цветных компонентов экстрагированных из листьев растений.
Газовая хр-я: метод разделения летучих компонентов, при котором подвижной фазой служит инертный газ (газ-носитель), протекающий через неподвижную фазу с большой поверхностью. Газ-носитель не реагирует с неподвижной фазой и разделяемыми веществами.
Различают газо-твёрдофазную и газо-жидкостную хроматографию. В первом случае неподвижной фазой является твёрдый носитель (силикагель, уголь, оксид алюминия), во втором — жидкость, нанесённая на поверхность инертного носителя.
Разделение основано на различиях в летучести и растворимости (или адсорбируемости) компонентов разделяемой смеси.
Жидкостная хр-я: хроматография, в которой подвижной фазой является жидкость. В настоящее время широко используется как классическая, так и высокоэффективная жидкостная хроматография.
ВЭЖХ - отличительной особенностью является использование высокого давления (до 400 бар) и мелкозернистых сорбентов (обычно 3—5 мкм, сейчас до 1,8 мкм). Это позволяет разделять сложные смеси веществ быстро и полно (среднее время анализа от 3 до 30 мин).
Ионообменная хр-я Ионообменная хроматография позволяет разделить молекулы, основываясь на ионных взаимодействиях. Неподвижная фаза имеет заряженные функциональные группы, которые взаимодействуют с анализируемыми ионизированными молекулами противоположного заряда. Этот вариант хроматографии классифицируется на два типа — катионную и анионную ионообменную хроматографию: Катионная ионообменная хроматография задерживает положительно заряженные катионы, так как неподвижная фаза имеет отрицательно заряженные функциональные группы, например, фосфат (PO43−). Анионная ионообменная хроматография задерживает отрицательно заряженные анионы, так как неподвижная фаза имеет положительно заряженные функциональные группы, например, +N(R)4.
Гель-фильтрация способ разделения веществ по размеру их молекул с использованием так называемых молекулярных сит (сефадексов).
Тонкослойная хр-я - является планарной разновидностью жидкостной хроматографии, в которой подвижная фаза (ПФ) движется в пористой среде слоя адсорбента. его преимуществом является большая скорость анализа, более высокое качество разделения, и возможность выбора одной из неподвижных фаз, обладающих наиболее подходящими свойствами. В настоящий момент является одним из основных методов анализа смесей органических веществ.
Сверхкритическая флюидная хр-я. В СФХ в качестве подвижной фазы используется сверхкритический (СК) флюид, обычно CO2, с добавками одного или более полярных органических растворителей, таких как спирты. Отличительным свойством СК флюида является слабое межмолекулярное взаимодействие, что приводит к низкой вязкости и высокому коэффициенту диффузии. Низкая вязкость позволяет увеличивать расход подвижной фазы (что ускоряет анализ) и использовать колонки большей длины (т.е. обеспечивает более высокую эффективность)