1. Визуальные методы.

Визуальные - в которых на глазах сравниваются и уравниваются оптические плотности или интенсивности окрасок двух однородных растворов, в одном из которых известна концентрация поглощающего вещества.

D_ст - оптическая плотность известной концентрации

D_x - оптическая плотность неизвестной концентрации

Т.о.

Т.к природа сравниваемых растворов одинакова, то

В медицинской практике этот метод имеет 3 разновидности:

1) Метод стандартных серий

Суть: раствор неизвестной концентрации С_х сравнивается по интенсивности окраски с набором стандартных растворов известной концентрации С_ст.

Тот стандарт, который ближе всего по интенсивности окраски исследуемому раствору С_х и принимается за основу значения концентрации исследования раствора.

Преимущества: может не соблюдаться в точности закон Бугера-Ламберта-Бера. Недостатки: невысокая точность определения концентрации (2-5%)

2) Метод разбавления

Суть: Раствор неизвестной концентрации С_х разбавляют до тех пор, пока интенсивность его окраски или оптическая плотность не уравняются со стандартным раствором известной концентрации С_ст.

Зная степень разбавления по высоте подъема жидкости в пробирке L_x, легко определяется концентрация. Этот метод используется для определения гемоглобина в крови человека.

3) Метод погружения

Суть: в две измерительные пробирки с плоским дном помещают стандартный «С_ст» и неизвестный «С_х» растворы. Сверху в пробирки погружают стеклянные стержни-световоды с плоским полированным торцом. Принимая глубину погружения одного стержня за 1 (единицу), будем изменять глубину погружения др. стержня до тех пор, пока поле зрения в окуляре не будет иметь равную интенсивность окраски. При этом получим D_ст= D. Измерив по счетным устройствам глубину погружения каждого из стержней найдём концентрацию неизвестного раствора «С_х» по формуле:

Этот метод используется в визуальных калориметрах погружения.

2. Фотоколориметрические методы.

Они облегчаются от визуальных тем, что уравнивание оптических плотностей или интенсивностей окраски производят не визуально, а при помощи одного или двух фотоэлементов, включенных по специальной дифференциальной схеме. Условие D_CT=D_X выполняется когда стрелка измерительного прибора - индикатора устанавливается на «0». Этот метод реализуется в фотоэлектрокалориметрах.

3. Спектрофотометрические методы.

Используются в аппаратах - спектрофотометрах, которые позволяют построить или автоматически записать спектральную кривую поглощения данного раствора в определенном участке длин волн. Как правило, записывается зависимость «D» от «λ», или зависимость коэффициента пропускания или поглощения «» от «λ».

Каждый спектрофотометр состоит из оптической и электрической части.

Оптическая - включает источник света (водородная лампа, кварцевая и т.п.), измерительную щель, кюветы с исследуемым раствором.

Электрическая - включает фотоэлемент регистрирующий прошедший через раствор лучистый поток, регистрирующее устройство, позволяющее снять показания или записать кривую поглощения.

Для того, чтобы изменять «L» света, проходящего через раствор, каждый спектрофотометр снабжен монохроматором, разлагающим свет от источника в спектр и соответствующий участок спектра направляется на раствор.