2. Указания к занятию:

   1. Внимательно изучите инструкцию.

   2. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

   3. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, приборами.

   4. Используйте резиновую грушу с переходником. Работайте в перчатках!

   5. Соблюдайте дезинфекционный режим в работе!

Практическая часть.

1. Приготовление рабочего реагента.

Ход приготовления.

Смешать буфер и раствор ферментов в соотношении 9 : 1.

Рабочий реагент стабилен не менее 14 дней при температуре 2-8C в герметично закрытом сосуде.

2. Лабораторная работа. Определение концентрации триглицеридов в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом.

ПРИНЦИП: Триглицериды под действием липазы гидролизуются до глицерина и жирных кислот. Глицерин под действием глицерокиназы и кислорода воздуха образует диоксиацетонфосфат и перекись водорода, которая под действием пероксидазы образует окрашенное в красный цвет соединение хинонеимин, концентрация которого пропорциональна концентрации триацилглицеридов в сыворотке (плазме) крови.

Оборудование и реактивы: штатив с пробирками, пипетки градуированные (1 мл; 0,01 мл); набор реактивов «Абрис+», термостат; спектрофотометр; химические стаканы; дезинфицирующий раствор 0,5% раствор Полидеза.

Проведение анализа.

Отмерить (мл)	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Холостая проба, мл
Рабочий реагент Сыворотка крови Дистилированная вода Стандартный раствор	1,0 0,01 - -	1,0 - - 0,01	1,0 - 0,01 -

Время инкубации – 10 минут при температуре 37C или 15 минут при температуре 18-25C. По окончании инкубации измерить оптическую плотность пробы (Е_пр.) и калибратора (Е_кал.) против холостой пробы при длине волны 500 нм, кювета – 10 мм. Стабильность окраски – не менее 1 часа после окончания инкубации.

Расчёт:

С = 2,29  (Е_пр. / Е_кал.), ммоль/л.

Референтные пределы:

нормальные показатели: 0,15-1,71 ммоль/л;

пограничные показатели: 1,71-2,29 ммоль/л;

патологические показатели: свыше 2,29 ммоль/л.

4. Закрепление знаний, умений и навыков.

4.1. Выполнение лабораторной работы.

4.2. Учёт результатов.

5. Контроль конечного уровня знаний, умений.

5.1. Оформление работы. Вывод. КДЗ исследования.

Клинико-диагностическое значение.

Увеличение концентрации нейтральных жиров в крови отражает возрастание уровня ЛПОНП и хиломикронов. Наиболее высокое содержание в крови триацилглицеридов находят при гиперлипопротеинемии I, IV и V типа. Менее значительное увеличение уровня триглицеридов обнаруживают при гиперлипопротеинемии IIб и III типов.

Гипертриацилглицеринемия наблюдается у больных ожирением, хронической ишемической болезнью сердца, вирусным гепатитом, у страдающих жировой инфильтрацией, алкогольным циррозом печени, панкреатитами, нефротическим синдромом, хронической почечной недостаточностью, гипертонической болезнью, острым инфарктом миокарда, сахарным диабетом, подагрой, болезнью Дауна и др.

Гипотриацилглицеринемия наблюдается при гипо- и α-β-липопротеине-мии, хронических обструктивных заболеваниях лёгких, гипертиреозе, инфаркте мозга, лактозурии, недостаточности питания, поражении паренхимы печени (терминальная стадия).

5.2. Решение ситуационных задач.

Задача 1. Главным энергетическим субстратом для мозга в нормальных условиях является:

а) глюкоза; в) кетоновые тела; д) молочная кислота;

б) аминокислоты; г) жирные кислоты; е) триглицериды.

Задача 2. Гормончувствительная липаза обеспечивает:

а) гидролиз эфирных связей в гормонах;

б) адреналин-зависимый гидролиз пищевых липидов;

в) мобилизацию триглицеридов жировой ткани;

г) гидролиз триглицеридов в печени;

д) гидролиз триглицеридов в мозге.

Задача 3. У больного при биохимическом анализе крови обнаружено повышение уровня глюкозы в крови до 152 мг-% (норма – 100-120 мг-%), общих липидов – 1100 мг-% (норма – 400-800 мг-%), выделение мочи за сутки составило 3,5 литра. Какой предположительный диагноз можно поставить на основании полученных данных? Какие ещё методы исследования можно рекомендовать для подтверждения поставленного диагноза?

Задача 4. При анализе крови отмечено повышение уровня общих липидов. Повторное исследование крови через 4 часа показало нормальное содержание общих липидов. Какова в данном случае возможная гиперлипемия?

5.3. Фронтальная беседа.

1. Что представляют собой триацилглицериды?

2. Какие факторы оказывают влияние на изменение состава триацилглицеридов?

3. Какое клиническое значение имеет определение триацилглицеридов?

4. Какова норма триглицеридов в плазме крови? С чем связана нормальная величина этого показателя?

5. В чём принцип ферментного метода определения триглицеридов в сыворотке крови?

6. Как проводят расчёт концентрации триацилглицеридов?

7. Какие требования предъявляют к материалу исследования?

8. Какие показатели липидного обмена используются в лабораторной диагностике?

9. Что такое алиментарная гиперлипемия?

10. Что такое транспортная гиперлипемия?

11. Что является причиной увеличения триацилглицеридов в крови?