23.Биохимическая активность микроорганизмов, ее определение и дифференциально-диагностическое значение.

Для определения способности МКО ферментировать углеводы (сахаролитические свойства) используют короткий и длинный «пестрый» ряд. К первому относятся жидкие питательные среды Гисса с моно- и дисахаридами: глюкозой, лактозой, мальтозой и с 6-атомным спиртом - маннитом. В длинный пестрый ряд наряду с этими углеводами вводят среды с разнообразными моносахаридами (арабиноза, ксилоза), полисах. (инулин, крахмал) и спиртами (глицерин, инозит). В качестве индикатора ко всем средам добавляют индикатор – реактив Андреде или ВР. Чистую культуру засевают петлей в среды «пестрого» ряда. Инкубируют при темп. 37 град. в течении 18-24 ч. Если бактерии ферментируют углеводы до образования кислых прод., наблюдается изменение цвета среды; при разложении до кислоты и газа помимо изменения цвета появляется пузырек газа в поплавке. Если используются среды с полужидким агаром, то образование газа регистрируется по разрыву столбика. Т.к бактерии ферментируют не все, а только определенные для каждого вида углеводы, входящие в состав среды Гисса, наблюдается довольно пестрая картина, отсюда и название. Для определения протеолитических ферментов производят посев культуры бактерий уколом в столбик 10-20% желатина, пептонную воду. Посевы в желатине инкубируют при температуре 20-22 град. в теч. нескольких дней. При наличии протеолитич. ферментов бактерии разжижают желатин, образую фигуру, напоминающую воронку или елочку.

Реакция на аммиак. Узкую полоску лакмусовой бумаги укрепляют под пробкой так, чтобы она не соприкасалась с питат. средой. Посинение бумаги свидет. об образовании аммиака.

Реакция на индол. Способ Эрлиха: в пробирку с культурой бактерий прибавляют 2-3 мл эфира, содержимое перемешивают и добаляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор парадиметиламидобензальегида с хлороводородной кислотой). В присутствии индола наблюдается розовое окрашивание, при осторожном наслаивании образуетсяся розовое кольцо.

Реакция на сероводород. Делают посев культуры бакт. уколом в столбик с питательной средой, содержащей реактивы для выявления сероводорода (смесь солей: сульфат железа, тиосульфат натрия, сульфат натрия). При наличии сероводорода происходи почернение агара.

Обнаружение каталазы. На предметное стекло наносят каплю 1-2% р-ра пероксида водорода и вносят в нее петлю с бактеиальной культурой. Каталаза разлагает перекись на кислород и воду. Выделение пузырьков кислорода свидететельствует о наличии каталазы.

24.Понятие о патогенности, вирулентности, единицы ее измерения.

Патогенность — видовой признак, передающийся по наследству, закрепленный в геноме микроорганизма, в процессе эволюции паразита, т. е. это генотипический признак, отражающий потенциальную возможность микроорганизма проникать в макроорганизм (инфективность) и размножаться в нем (инвазионность), вызывать комплекс патологических процессов, возникающих при заболевании. Он характеризуется специфичностью(способность данного вида МКО вызывать определенное инфекц. забол.) и органотропностью (способность пат. МКО поражать окруж. клетки и органы, наиболее подходящие для их жизнедеят.). Чтобы вызвать инфекц. процесс, патогенный МКО должен проникнуть в орг-м в определенной критической инфицирующей дозе. Пути инфицирования: аэрогенный, алиментарный, трансмиссивный, контактный, половой, вертикальный, ятрогенный. Входные ворота инфекции – ткани и органы через кот. МКО попадает в макроорганизм. Периоды инфекц. процесса: 1) инкубационный (от времени внедрения до появления первых клинич. признаков), 2)Продрома (появление первых признаков забол. без четкой симптоматики, МКО продолж. размножаться), 3) Разгар и развитие заболев. (все факторы патогенности в досатат. кол-ве, видны все клинич. проявления), 4)Стадия спада и угасания, выздоровление. Фенотипическим признаком патогенного микроорганизма является его вирулентность, т.е. свойство штамма, которое проявляется в определенных условиях (при изменчивости микроорганизмов, изменении восприимчивости макроорганизма и т.д.). Вирулентность можно повышать, понижать, измерять, т.е. она является мерой патогенности. Снижение вирулентности может происх. при длительном пассированном культивировании. Стабильное уменьшение пат. получается при длительном действии факторов (вакцина БЦЖ). Полная утрата вирулентности связана с измен. генотипа. Единицы вирулентности: LD(90, 70, 50) – наименьшее кол-во возбудителей или токсина, вызывающее в определенный срок гибели конкретного кол-ва % животных. DCL – минимальная смертельная доза МКО, которая вызывает гибель 95% животных. DLM - гибель 100% животных. ID – минимальное кол-во МКО, способное вызывать инфекционное заболевание у определенного кол-ва особей. При этом учитывают вид животных, пол, массу тела, способ заражения, срок гибели.

Степень патогенности отдельных особей (отдельных штаммов, культур) может колебаться и быть различной. Эта изменяющаяся сила болезнетворности называется вирулентностью. Если патогенность является видовым признаком, то вирулентность есть индивидуальный признак отдельных культур определенного вида микробов. Вирулентность патогенного микроба можно повысить (например, путем заражения восприимчивого опытного животного) или, наоборот, понизить и даже совсем лишить его вирулентности (например, продолжительным выращиванием на искусственных питательных средах). На такой изменчивости вирулентных культур микробов основано создание живых стойко ослабленных в вирулентности вакцин.