- •Методические рекомендации для студентов к практическому занятию
- •3. Цели занятия:
- •Режим работы в бактериологической лаборатории
- •2) При аварии без разбрызгивания пба:
- •3) При аварии, связанной с нарушением целостности кожных покровов:
- •Основные виды микроскопов
- •Дополнительные устройства к микроскопу
- •Приготовление и окраска микропрепаратов:
- •Способы фиксации мазков из микробов и смешанного материала
- •Существует два метода химической фиксации мазков:
- •Микроскопия препарата с иммерсионным объективом
Приготовление и окраска микропрепаратов:
1. Подготовить для микроскопии 4 предметных стекла:
- обезжирить предметные стёкла, тщательно протерев их мылом и марлей;
- стёкла с помощью пинцета внести в пламя спиртовки, прогреть, охладить;
- тщательно протереть сухим ватным тампоном.
2. Приготовить 3 мазка из микробов, выросших на жидкой среде (обратить внимание на правильное положение рук: правой - держащей пробирку с ростом микробов в МПБ и левой - бактериальную петлю и ватную пробку);
- обжечь петлю в пламени спиртовки;
- охладить;
- открыть пробку пробирки левой рукой (мизинцем), обжечь её края над пламенем спиртовки;
- внести в МПБ петлю, взять 1 каплю культуры;
- обжечь края пробирки, пробку, закрыть пробирку, поставив её в штатив (не выпуская из правой руки петлю с материалом);
- обезжиренное, обожжённое в пламени спиртовки и охлаждённое предметное стекло взять большим и указательным пальцами в левую руку;
- петлёй материал нанести на стекло, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности в виде круга;
- препарат высушить на воздухе и затем фиксировать методом фламбирования или прогрева, трижды внося в пламя спиртовки, охладить;
- пипеткой налить на мазок 3-4 капли красителя (метиленовый синий) на 3-4 мин.;
- промыть препарат водой, высушить на воздухе. Мазок готов для микроскопии:
3. Приготовить мазок из микробной культуры, выросшей на плотной среде - МПА:
- на обезжиренное стекло нанести каплю воды или физиологического раствора;
- с поверхности среды (обратить внимание на правильность положения пробирки с ростом скошенной поверхностью кверху), петлёй осторожно взять материал;
- обжечь края пробирки, пробку закрыть, поставить в штатив, не выпуская из рук петлю с культурой;
- внести материал петлёй в каплю воды на предметном стекле, равномерно растереть, на стекле с обратной стороны обозначить овалом или квадратом место нанесения материала;
- высушить на воздухе;
- фиксировать фламбированием, внося в пламя спиртовки трижды, охладить.
Приложение 6
Способы фиксации мазков из микробов и смешанного материала
Самым распространённым методом фиксации бактерий считается обработка жаром, что осуществляется путём трёхкратного проведения препарата мазком вверх над пламенем спиртовки или газовой горелки. Препарат находится в пламени спиртовки не более 3 сек. Для проверки надежности фиксации свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной стороне левой кисти. При правильном фиксировании стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущений ожога. После чего препараты из бактерий окрашиваются разными способами. Метод применим при работе с чистой культурой микробов.
Фиксация химическими веществамииспользуется для выявления и дифференциации структурных элементов: жгутиков, протоплазмы, нуклеоида, оболочки, при работе со смешанным материалом (кровь, отпечатки органов, соскобы со слизистых, гной, мокрота).
В качестве фиксаторов используют:
- метиловый спирт (фиксируют 5 минут),
- этиловый спирт 96% (фиксируют 10 - 20 минут),
- смесь Никифорова: равные объёмы спирта и эфира (фиксируют 10 - 20 минут),
- спирт - формол: смесь 5мл неразведённого формалина мл и 96 % этилового спирта – 95 мл (фиксируют 15 минут),
- жидкость Буэна (Bouin, 1898): неразбавленный формалин 10 мл, ледяная уксусная кислота 2 мл, насыщенный водный раствор пикриновой кислоты 30 мл (фиксируют 5 - 10 минут),
- ацетон (фиксируют 5 минут),
- жидкость Карнуа (Karnoy) - ледяная уксусная кислота 10 мл, хлороформ 30 мл и 96 % спирт 60 мл (фиксируют 10-15 минут). Жидкость Карнуа является прекрасным фиксатором, в особенности для изучения тонкого строения бактерий. Жидкость Карнуа нельзя применять для фиксации мазков крови и отпечатков внутренних органов, так как она вызывает полный гемолиз эритроцитов.