Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
MR_LF_stud_org_lab.docx
Скачиваний:
39
Добавлен:
19.06.2017
Размер:
65.6 Кб
Скачать

Приготовление и окраска микропрепаратов:

1. Подготовить для микроскопии 4 предметных стекла:

- обезжирить предметные стёкла, тщательно протерев их мылом и марлей;

- стёкла с помощью пинцета внести в пламя спиртовки, прогреть, охладить;

- тщательно протереть сухим ватным тампоном.

2. Приготовить 3 мазка из микробов, выросших на жидкой среде (обратить внимание на правильное положение рук: правой - держащей пробирку с ростом микробов в МПБ и левой - бактериальную петлю и ватную пробку);

- обжечь петлю в пламени спиртовки;

- охладить;

- открыть пробку пробирки левой рукой (мизинцем), обжечь её края над пламенем спиртовки;

- внести в МПБ петлю, взять 1 каплю культуры;

- обжечь края пробирки, пробку, закрыть пробирку, поставив её в штатив (не выпуская из правой руки петлю с материалом);

- обезжиренное, обожжённое в пламени спиртовки и охлаждённое предметное стекло взять большим и указательным пальцами в левую руку;

- петлёй материал нанести на стекло, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности в виде круга;

- препарат высушить на воздухе и затем фиксировать методом фламбирования или прогрева, трижды внося в пламя спиртовки, охладить;

- пипеткой налить на мазок 3-4 капли красителя (метиленовый синий) на 3-4 мин.;

- промыть препарат водой, высушить на воздухе. Мазок готов для микроскопии:

3. Приготовить мазок из микробной культуры, выросшей на плотной среде - МПА:

- на обезжиренное стекло нанести каплю воды или физиологического раствора;

- с поверхности среды (обратить внимание на правильность положения пробирки с ростом скошенной поверхностью кверху), петлёй осторожно взять материал;

- обжечь края пробирки, пробку закрыть, поставить в штатив, не выпуская из рук петлю с культурой;

- внести материал петлёй в каплю воды на предметном стекле, равномерно растереть, на стекле с обратной стороны обозначить овалом или квадратом место нанесения материала;

- высушить на воздухе;

- фиксировать фламбированием, внося в пламя спиртовки трижды, охладить.

Приложение 6

Способы фиксации мазков из микробов и смешанного материала

Самым распространённым методом фиксации бактерий считается обработка жаром, что осуществляется путём трёхкратного проведения препарата мазком вверх над пламенем спиртовки или газовой горелки. Препарат находится в пламени спиртовки не более 3 сек. Для проверки надежности фиксации свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной стороне левой кисти. При правильном фиксировании стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущений ожога. После чего препараты из бактерий окрашиваются разными способами. Метод применим при работе с чистой культурой микробов.

Фиксация химическими веществамииспользуется для выявления и дифференциации структурных элементов: жгутиков, протоплазмы, нуклеоида, оболочки, при работе со смешанным материалом (кровь, отпечатки органов, соскобы со слизистых, гной, мокрота).

В качестве фиксаторов используют:

- метиловый спирт (фиксируют 5 минут),

- этиловый спирт 96% (фиксируют 10 - 20 минут),

- смесь Никифорова: равные объёмы спирта и эфира (фиксируют 10 - 20 минут),

- спирт - формол: смесь 5мл неразведённого формалина мл и 96 % этилового спирта – 95 мл (фиксируют 15 минут),

- жидкость Буэна (Bouin, 1898): неразбавленный формалин 10 мл, ледяная уксусная кислота 2 мл, насыщенный водный раствор пикриновой кислоты 30 мл (фиксируют 5 - 10 минут),

- ацетон (фиксируют 5 минут),

- жидкость Карнуа (Karnoy) - ледяная уксусная кислота 10 мл, хлороформ 30 мл и 96 % спирт 60 мл (фиксируют 10-15 минут). Жидкость Карнуа является прекрасным фиксатором, в особенности для изучения тонкого строения бактерий. Жидкость Карнуа нельзя применять для фиксации мазков крови и отпечатков внутренних органов, так как она вызывает полный гемолиз эритроцитов.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Оставленные комментарии видны всем.

Соседние файлы в предмете Микробиология