Хроматография ‒ … |
|
|
|
||
|
|
32 |
|
|
|
… физико-химический метод разделения |
|||||
компонентов подвижной фазы при контакте с |
|||||
неподвижной фазой, основанный на многократно |
|||||
протекающих процессах адсорбции ‒ десорбции. |
|||||
Эффективность хроматографии |
зависит: 1) |
||||
от физико-химических свойств неподвижной и |
|||||
подвижной фазы; 2) от сродства разделяемых |
|||||
веществ |
к |
фазам; |
3) |
от |
условий |
хроматографирования (T, υпф, τразд.) |
|
|
|||
33 |
Cущность хроматографии |
|||
|
|
|
||
Практическа |
|
|
|
|
я ценность |
|
|
Z |
|
|
|
|
||
Разделяемые |
X |
|
X |
|
вещества |
|
|
↓↑ |
|
выделяются в том |
|
Y |
Y ↓↑ |
|
же виде, в |
X |
Y |
Z ↓↑ |
|
котором они |
Z |
|||
|
|
|
||
существовали в |
Вывод: чем больше сродство у вещества к |
|||
смеси. |
||||
неподвижной фазе, тем меньше скорость |
||||
|
||||
|
его передвижения с подвижной фазой и |
|||
|
накапливаться оно будет ближе к старту. |
|||
Классификация хроматографических методов
34
1.По механизму разделения
2.По аппаратурному оформлению
3.По агрегатному состоянию фаз
Адсорбционна |
|
По |
|
Молекулярно- |
||||
|
я |
|
механизму |
|||||
(основана |
на |
ситовая |
|
|||||
избирательной |
разделени |
(основана |
на |
|||||
адсорбции |
|
|
я |
|
различии |
в |
||
веществ |
на |
|
|
|
размерах молекул |
|||
твёрдом |
|
|
|
|
адсорбтива) |
|
||
адсорбенте) |
|
|
|
|
|
|
|
|
Распределительн |
|
|
|
|
|
|||
|
ая |
|
|
|
|
Афинная / |
|
|
(основана на различиях |
|
|
|
|||||
|
биоспецифическа |
|||||||
в |
растворимости |
|
||||||
отдельных |
|
|
|
|
я |
|
|
|
компонентов смеси в 2- |
|
(основана |
|
на |
||||
х |
несмешивающихся |
|
геометрическом |
|
||||
жидкостях) |
|
|
|
соответствии |
активного |
|||
|
Ионообменная |
структуры |
||||||
(основана |
на |
различной |
центра адсорбента |
и |
||||
способности |
к |
обмену |
ионов |
структуры адсорбтива) |
||||
адсорбента |
на |
ионы |
веществ, |
|
|
|
|
|
входящих в состав смеси) |
35 |
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Молекулярно-ситовая хроматография … |
|
||
36 |
|
|
|
… используется для |
|||
разделения |
смесей |
||
белков по фракциям. |
|
||
В роли |
адсорбента |
||
выступают |
|
|
|
сефадексы ‒ пористые |
|||
гранулы |
с |
разным |
|
размером пор, |
в которые |
||
попадают |
|
белки |
с |
соизмеримыми |
размерами |
||
молекул. |
|
|
|
А |
|
|
|
|
|
Афинная А/ биоспецифическая адсорбция… |
|||||
т |
37 |
|
|
|
|
т |
Особое |
распространение |
|||
|
|||||
|
получила |
для |
разделения |
||
|
белков, |
|
БАВ, |
ферментов, |
|
|
антител, гормонов и т.п. |
||||
Аг |
На |
адсорбент |
наносят |
||
|
антиген и пропускают смесь |
||||
|
антител, |
из которых только |
|||
|
один |
|
комплементарен |
||
|
антигену. |
|
|
|
|
2. По аппаратурному |
||
оформлению |
|
|
|
38 |
|
Хроматографи |
||
|
я |
|
Плоскостна |
Объёмная |
|
я |
||
|
||
Бумажна |
Колоночн |
|
я |
ая |
|
Тонкослойна |
Капиллярна |
|
я (ТСХ) |
я |
|
39 |
Тонкослойная |
|||
Неподвижная |
хроматография |
|||
|
|
|
|
|
фаза: |
|
|
|
|
Al2O3, |
|
|
|
|
силикагель, |
|
|
Z |
Z |
целлюлоза |
|
|
||
|
|
|
||
Подвижная |
X |
|
|
X |
|
|
|
|
|
фаза: |
|
Y |
|
Y |
органические |
X |
Y |
Z |
|
растворители |
|
|||
|
|
|
|
|
Детектирование хроматограмм ‒
обнаружение зон разделённых веществ.
Для этого используются специфические и универсальные реагенты ‒ вещества, дающие окрашенные соединения с компонентами смеси.
Для идентификации веществ
используют:
1) свидетели (как правило, свидетели и компоненты имеют одинаковую окраску при
40
детектировании);
2)коэффициент распределения Rf,
представляющий собой отношение пути (ℓ), пройденного компонентом смеси, к пути, пройденному растворителем.
Rf x
p
ℓ(p) ‒ путь от линии старта до линии
фронта.
41