Б. Изучение фотосенсибилизирующих действий хлорофилла на реакцию переноса водорода по Гуревичу.

Берут четыре пробирки: в первые три наливают по 5 мл спиртовой вытяжки хлорофилла, в четвертую - 5 мл этилового спирта. В первую, вторую и четвертую пробирки вносят приблизительно по 50 мг кристаллической аскорбиновой кислоты и несколько раз хорошо встряхивают раствор. Во все пробирки с хлорофиллом прибавляют по каплям отфильтрованный спиртовой раствор метилового красного до тех пор, пока зеленая окраска не перейдет в красно-бурый цвет. В четвертой пробирке спирт доводят с помощью индикатора до ярко-розовой окраски. Вторую пробирку закрывают чехлом из черной бумаги, а затем все пробирки ставят в штатив и освещают электрической лампой (300 Вт), расположив ее на расстоянии примерно 15 см от штатива. Для поглощения тепловых лучей между пробирками и источником освещения желательно поместить заполненный водой сосуд с плоскопараллельными стенками.

После 10-15-минутного освещения в первой пробирке вследствие восстановления метиловый красный обесцвечивается, и раствор вновь приобретает зеленую окраску. В опытных пробирках окраска раствора не изменяется, так как в отсутствие света, аскорбиновой кислоты или хлорофилла метиловый красный не восстанавливается лейкосоединение.

Исследование можно продолжить и установить зависимость фотосенсибилизирующего действия хлорофилла от интенсивности света и его спектрального состава. Результаты исследований занести в таблицу 2.

Таблица 2

Влияние света на фотосенсибилизирующее действие хлорофилла

№ п/п	Состав смеси в пробирках					Условия опыта		Результаты (окраска вытяжки)
	Хлоро-филл (мл).	Этило-вый спирт (мл)	Кристалли-ческая аскорбиновая кислота (мг)	Насыщенный спиртовой рас­твор метилового красного
	5	-	50	Добавляется до появления красно-бурой окраски	Свет
	5	-	50		Темнота
	5	-	-		Свет
	-	5	50		Свет		|

Задание: на основе анализа результатов таблицы 2 делают выводы.

Опыт 6. Определение количества хлорофилла в листьях колориметрическим методом

Цель работы: овладеть колориметрическим методом определения хлорофилла в листьях растений.

Количество хлорофилла в листьях растений подвергается значительным колебаниям, которые определяются внутренними особенностями (вид растения, возраст органа) и условиями внешней среды (интенсивность света, температура, минеральное питание и др.). Содержание зеленых пигментов и его динамика в растениях существенно влияют на интенсивность фотосинтеза и продуктивность организма. Поэтому в эксперименте часто ставят задачу учета количества хлорофилла, для чего применяют колориметры и спектрофотометры различных систем.

Ход работы: работа состоит из двух этапов: 1) получение спиртового экстракта пигментов; 2) определение его концентрации. Для приготовления раствора хлорофилла используют свежие листья растений. Величина навески зависит от количества хлорофилла в листе. При работе с интенсивно зелеными листьями достаточно 0,25–0,50 г; слабоокрашенных тканей брать в пробу 1 г и более. Навеску поместить в фарфоровую ступку и растереть пестиком до однородной массы. Для лучшего измельчения тканей необходимо перед растиранием к навеске добавить немного кварцевого песка или битого стекла. Чтобы не произошло феофитинизации хлорофилла за счет эндогенных кислот, для нейтрализации последних добавить щепотку мела.

К растертой массе прилить небольшое количество этанола, снова тщательно растереть. Содержимое ступки количественно перенести на воронку с фильтром. Использовать фильтр с белой лентой. Его размер подбирать так, чтобы края фильтра не были выше краев воронки. Особое внимание обратить на аккуратное перенесение зеленой массы на фильтр. Эту операцию надо осуществлять без потерь, соблюдая следующие правила:

носик ступки с внешней стороны смазать тонким слоем вазелина;

переносить жидкость по стеклянной палочке;

ступку при сливании жидкости наклонять резко, а значит, порция спирта не должна приливаться больше той, что вместится в воронку за один прием.

Ступку и пестик ополаскивать небольшими порциями спирта и переносить его на фильтр до тех пор, пока не останется следов зеленых пигментов на ступке, пестике и фильтре. Фильтрат собрать в мерную колбу на 25–50 мл, после полного извлечения пигментов довести этанолом до метки, тщательно перемешать и использовать для количественного определения хлорофилла с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК) или спектрофотометра.