chudina_himia

Пользуются только стерильными средами и наиболее простым способом обеспложивания сред является воздействие на них высокими температурами.

Среды делятся на естественные и искусственные. К естественным средам относятся такие среды, на которых микроорганизмы развиваются в природе, например, пиво, вино, молоко, плодовые соки, овощи, фрукты и др.

Искусственные среды: растворы сахаров, солей и др. т.е. их готовят из различных соединений с учетом индивидуальных особенностей микроорганизмов.

По своему составу питательные среды делятся также на основные и специальные.

Основными питательными средами являются обычные или простые, на них растет большинство микроорганизмов.

Специальные среды, или как их иначе называют элективные среды (от английского electus – избирательный) применяются для выращивания определенных видов микроорганизмов, которые на обычных средах растут плохо или совсем не растут, эти среды применяются для выделения или идентификации микроорганизмов.

В настоящее время широко применяются сухие питетельные среды. Эти среды хорошоо хранятся, стандартны и быстро приготавливаются.

По консистенции питательные среды делятс на жидкие и твердые. Любую жидкую питательную среду путем добавления к ней агар-агара или желатина можно превратить в твердую.

Твердые питательные среды имеют широкое применение:

1.при микробиологическом анализе воздуха, воды, почвы;

2.для выделения чистых культур (особенно желатиновые);

3.для идентификации микроорганизмов;

4.для пересылки микроорганизмов на расстояние и хранение культур в течение длительного времени.

Преимуществом твердых питательных сред является то, что довольно легко невооруженным глазом заметить загрязнение культуры другими микроорганизмами: инородная культура отличается от той, какую заведомо развивают; на жидкой среде это установить тудно.

3.4Краски

Впрактике исследований микроорганизмов применяются анилиновые краски.

Косновным краскам относятся:

1.синие – метиленовый синий, Виктория;

2.красные – нейтральный красный, основной фуксин, сафранин;

3.фиолетовые – генцианвиолет, метилвиолет, кристаллвиолет, тионин;

4.коричневые краски – везувин, хризоидин;

5.зеленые - малахитовая зелень, метиленовый зеленый.

Кислые краски:

1.красные и розовые краски – кислый фуксин, эозин;

2.желтые краски – конго, пикриновая кислота, флоресцин.

Чаще всего применяются: основной фуксин (красная краска0, метилвиолет (фиолетовая краска). Эти краски продаются в виде аморфных или кристаллических порошков, из которых готовят крася-

щие растворы.

Прежде всего из перечисленных наиболее чаще применяемых красок сначала готовятся насущенные спиртовые растворы. Спиртовые растворы этих красок готовят впрок и сохраняют в склянках с притертыми пробками. Из насыщенных растворов красок готовятся краски необходимой концентрации.

Следует отметить, что большинство красок, применяемых для окрашивания микроорганизмов, являются для них токсичными. Поэтому применяются сильно разбавленные растворы красок – от 0,001 до 0,0001%.

3.5Приготовление препаратов. Простая и сложная окраска микроорганизмов

Для изучения микроорганизмов производят микроскопирование как живых, так и мертвых микробов в неокрашенном и окрашенном виде.

Препараты из микроорганизмов готовят на предметном стекле, которое должно быть чистым и обезжиренным (обработка сухим мылом). В случае применения жирного стекла нельзя приготовить хороший препарат. Покровное стекло также должно быть чистым.

3.5.1Приготовление препаратов для исследования микроорганизмов в живом виде

Микроорганизмы в микроскопе можно рассматривать как в мертвом (фиксированном), так и в живом состоянии, в специально приготовленных препаратах.

Дрожжи и плесневые грибы лучше рассматривать в ивом виде и препарате «раздавленная» капля. Эти довольно крупные микроорганизмы, при рассматривании в живом виде хорошо определяется их форма, размекры, тип размножения (почкование, деление, спорообразование).

бактерии ввиду их назначительных размеров часто рассматривают в мертвом виде в фиксированных окрашенных препаратах, при этом лучше определяется их форма, размеры. Для выяснения способности бактерий к движению необходимо их рассматривать в живом виде.

Препарат «Раздавленная капля» готовится следующим образом.

На чистое, обезжиренное предметное стекло стерильной петлей (прокаленной на пламени спиртовки) наносят каплю стерильной воды (можно пользоваться и обычной водопроводной водой), в которую вносят небольшое количество исследуемой культуры микроорганизмов (дрожжей, бактерий), взятой с твердой питательной среды. Если исследуемая культура в жидком виде, то в этом случае стерильной петлей рется капля жидкости, а при надобности добавляют для ее разведения каплю стерильной воды. Следует помнить, что суспензия культуры микробов на стекле должна иметь слабую муть.

При исследовании дрожжей в каплю жидкости на стекле можно добовать петлей небольшое количество раствора метиловой сини (определенного разведения), тщательно размешать и таким образом одновременно выяснить вопрос о наличии мертвых дрожжевых клеток, которые при этом окрасятся в синий цвет.

Приготовленный препарат на предметном стекле покрывают чистым покровным стеклам. Одним ребром покровное стекло ставят на край капли, затем его медленно опускают так, чтобы между стеклами не попали пузырьки воздуха, которые мешают микроскопированию. Излишек жидкости, выступающий за края покровного стекла, убирают полоской фильтровальной бумаги.

Подготовленный препарат немедленно исследуют, ибо с течением времени жидкость под покровным стеклом высыхает и препарат виден хуже. Сначала микроорганизмы рассматривают с помощью сухих объективов, а далее для более детального рассмотрения исаользуют иммерсионную систему. При просмотре дрожжей достаточно пользоваться объективом 40, а бактерии целесообразно рассматривать с иммерсионным объективом.

Для приготовления препарата из плесневых грибов надо осторожно, чтобы не разрушить органов спороношения, взять препаровальной иглой кусочек пленки гриба и перенести в каплю воды, нанесенную на предметное стекло. Препарат слегка надавливают покровным стеклом и немедленно рассматривают в микроскопе с объективом 8x.

Препарат из плесневых грибов рекомендуется готовить и другим способом.

Проволокой, изогнутой в виде крючка, захватывают мицелий гриба и затем осторожно расщепляют его при помощи препаровальных игл в капле воды. Наблюдению мешают обильные споры гриба, поэтому препарат готовят в уксусной кислоте или этиловом спирте, после чего промывают водой. Плесени сначала рассматривают при объективе 8x, а затем дальнейшее наблюдение производят при увеличении в 600-900 раз. Наблюдают строение конидиеносцев, цвет. форму, органы размножения.

3.5.2Окрашивание мертвых дрожжевых клеток

На предметное стекло наносят одну каплю дрожжевой суспензии и каплю раствора метиленовой сини, препарат покрывают покровным стеклом, излишек жидкости убирают кусочком фильтровальной бумаги и через 2 минуты микроскопируют. Мертвые клетки при этом окрашиваютс в синий цвет.

Лабораторная работа №12 МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОЗДУХА МЕТОДОМ СВОБОДНОГО ОСЕДАНИЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ НА ПОВЕРХНОСТЬ ТВЕРДОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

Воздух не является средой, в которой микроорганизмы развиваются, их пребывание в нем является временным.

Ввоздухе может содержаться значительное количество микроорганизмов, чему способствует скученность людей и содержание в нем пыли.

Ввоздухе можно обнаружить дрожжи, плесневые грибы, пигментообразующеие (сарцины) и спорообразующие бактерии, а иногда и патогенные бактерии.

Наиболее простым методом микробиологического анализа воздуха преимущественно закрытых помещений является седиментационный метод, предложенный Р.Кохом, который основывается на оседании под дейсвием силы тяжести бактериальных частиц и капель на поверхность агара в открытой чашке Петри.

Основными недостатками данного метода являются:

1.На чашках оседают в основном крупные пылевые частицы, а тонкодисперсные фракции, содержащие бактерии и мелкие пылевые частицы улавливаются плохо, поэтому метод малопригоден для количественного изучения микрофлоры воздуха закрытых помещений.

2.На чашки могут осесть не только микроорганизмы, находящиеся непосредственно над поверхностью питательной среды, но и заносимые из прилегающих воздушных слоев.

3.Этим методом определяется всего лишь 35-60% микроорганизмов, содержащихся в воздухе.

Но несмотря на перечисленные выше недостатки, благодаря своей простоте, чашечный метод широко применяется в практике. Полученные данные по этому методу дают возможность ориентировачно судить о степени загрязненности вооздуха и о качественном составе микрофлоры.

Вкачестве питательной среды применяется питательный агар для определения гнилостных бактерий – мясопептонная желатина (МПЖ), плесени и дрожжи учитывают на сусло-агаровой среде (СА).

Методика определения

Встерильные чашки Петри со строгим соблюдением асептики вливают по 20 мл расплавленного питательного агара. Закрыв чашку, равномерно распределяют расплавленную среду по всему дну чашки. Дают питательной среде в чашках застыть, для чего они должны быть установлены на горизонтальной поверхности стола. Чашки Петри с застывшей питательной средой, завернутые в стерильную бумагу,

вкоторой проводилась стерилизация чашек, переносят в помещение, в котором исследуется воздух, открывают крышки. Крышки одним концом кладут на бумагу, в которую чашки были завернуты, а другим на самый край бортика открытой чашки, не закрывая поверхности среды.

Чашки оставляют открытыми (экспозиция) 5, 10, 15 минут, в зависимости от степени загрязненности воздуха. Затем их закрывают крышками и помещают в термостат.

Чашки с питательным агаром выдерживают в термостате 24 часа при темрератоуре 370C, а чашки с СА – 48 час при температуре 28 300C. Однако можно чашки с питательным агаром устанавливать в термостат на 48 час при 370C, а с СА – на 5 суток при комнатной температуре 22 240C.

После выдержки в термостате подсчитывают выросшие колонии. Количество выросших колоний характеризует загрязненность воздуха микроорганизмами.

Подсчет колоний производят невооруженным глазом или при помощи лупы. Хорошо для этих целей пользоваться прибором дя счета колоний.

Практически принимается, что колония является потомством одного микроорганизма, поэтому по числу выросшех колоний судят о количестве микробов, содержащихся в воздухе в момент посевов.

По Вольпе И.М. и др. (1970г.) в течение 5 мин на чашку площадью 100 см2 из воздуха оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 3 л воздуха.

Расчет содержания микроорганизмов в 1 м3 воздуха:

S – площадь чашки – 60 см2. За 5 мин на питательную среду оседает 40 микробных тел.

100 см2 – 3 л

60 см2 – x

x = 601003 = 1,8 л

1; 8 л – 40 м.т.

1000 л – x

x = 1000 40 = 22222 м.т. = 22000 м.т. (микробных тел)

1;8

Для общего представления о микрофлоре воздуха выросшие колонии исследуют качественно, т.е. готовят мазки, окрашивают их и микроскопируют. При рассмотрении мазков дается характеристкика рассматриваемых микроорганизмов: форма микрбов, взаиморасположение отдельных клеток между собой, подвижность.

Пример оформления данной работы Работа №1. Микробиологический анализ воздуха методом свободного оседания микроорганизмов

на поверхность твердой питательной среды.

1.Дата выполнения.

2.Указать помещение, в котором анализируется воздух.

3.Описать методику выполнения работы.

4.Произведен посев микроорганизмов из воздуха в чашки Петри с питательным агаром. Указать время экспозиции в мин : : : (5, 10, 15 мин).

Указать, при какой температуре поставлены чашки с посевами в термостат и на какое время. Дата : : : Привести общую характеристику роста колоний в каждой чашке в отдельности. Пример.

В чашке с питательным агаром выросло обильное количество колоний разной консистенции, формы и окраски. Запах из чашки гнилостный. Многие колонии окрашены в желтый цвет, их поверхность слизистая, форма – округлая, колонии мелкие. Имеет место развитие плесневых гибов, но в основном преобладает бактериальная микрофлора.

Результаты подсчета выросшех колоний:

в чашке с питательным агаром – 120 колоний:

количество микроорганизмов, содержащихся в 1 м3 исследуемого воздуха составит:

x = 1000 120 = 66666 м.т. = 67000 м.т.

1;8

Воздух исследуемого помещения загрязнен микроорганизмами.

Примечание. Если на поверхности твердой питательной среды в чашках Петри выросло более 300 колоний это затрудняет счет. В этом случае допускатся подсчет на отдельных площадках счетного прибора (например, в 20 квадратах площадью каждый по 1 см2), равномерно расположенных на площади чашки, а затем соответственно сделать пересчет.

5.Рассмотрение препаратов, приготовленных из наиболее характерых колоний, выросших в чашках Петри.

Лабораторная работа №13 МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

Вода является не только средой, в которой могут находиться микроорганизмы, но в ней они могут и развиваться.

Содержание в воде значительного клоичества сапрофитных бактерий – нежелательно, а болезнетворных микроорганизмов – представляет серьезную опасность для человека и животных.

Вода централизованного водоснабжения должна соответствовать ГОСт 2874-73 «Вода питьевая», по которому общее число бактерий в питьевой воде при посеве 1 мл неразбавленной воды, определяемое чилом колоний после 24-часового выпаривания при температуре 370С, не должно превышать 100. Количество кишечных палочек в 1 л воды не должно быть более 3.

Определение патогенных микроорганизмов в воде требует длительного времени (до 10 дней). Поэтому вместо прямого определения патогенных микроорганизмов применяют косвенную санитар-

ную оценку объектов внешней среды при помощи количественного и качественного учета санитарнопоказательных микроорганизмов.

Санитарно-показательные микроорганизмы – это такие микроорганизмы, которые постоянно находятся в естественных полостях человеческого или животного организма и не обитают во внешенй среде

всапрофитическом состоянии, но могут попасть в окружающую среду с экскрементами или выделениями ВДН. Сапрофитические микроорганизмы обычно не причиняют вреда организму человека, но при определенных условиях могут вызвать заболевания. В связи с этим такие микроорганизмы называются условно-патогенными. Например обычная кишечная палочка может явиться причиной пищевых отравлений, тероколитов и даже сепсиса.

Кишечная палочка является постоянным обитателем кишечника человека и поэтому ее используют

вкачестве показателя фекального загрязнения окружающей среды ( в том числе и воды) с 1988 г. С этого времени наличие кишечной палочки в различных объектах является индикатором фекального загрязнения.

Группа кишечной палочки многочисленна. В эту группу входят представители родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella. В стандартах нашей страны и за рубежом в качестве официально нормируемого показателя приняты все представители бактерий группы кишечной палочки (БГКП).

Кишечная палочка Escherichia coli является наиболее типичным представителем рода. Это короткие палочки с закругленными концами, спор не образуют, грамотрицательные аэробы или факультативные анаэробы. Отличаются полиморфичностью, имеют подвижные и неподвижные типы. Иногда встречаются формы, приближающиеся к коккам или, наоборот, в виде длинных нитей. Температура развития 30 370C, pH 7,2-7,5, а температурный оптимум роста 430C.

Некоторые разновидности Escherichia coli часто образуют на агаре Эндо колонии бесцветные или окрашенные в розовый, красный цвет, с металлическим блеском и без него.

Фекальное загрязнение воды устанавливают определением титра БГКП или индекса ВГКП. Титром БГКП (коли-титром) называется наименьшее количество исследуемого материала (воды),

выраженное в мл, в котором обнаруживается хотя бы одна кишечная палочка.

Для питьевой воды государственным стандартом установлен титр БГКП не ниже 333 мл. Колииндекс кишечной палочки – количество особой кишечной палоски, обнаруженное в 1 л жидкости (воды).

Для воды можно пересчитать титр в индекс и обратно по формулам:

1000

Титр = индекс

Индекс = титр1000

Пример. Коли-титр воды находится в допустимых пределах – 333 Коли-индекс для этой воды будет равен: 1000 : 333 = 3,3. Если коли-индекс равен 3,3, то коли-титр для этой воды будет равен: 1000 : 3,3 = 333.

Порядок отбора проб воды из водопроводного крана Водопроводный кран обжигают зажженым факелом (металлический стержень на конце плотно обер-

нут ватой), предварительно смоченным спиртом. Затем кран открывают на 10-15 мин, давая воде стечь. После этого наполняют стерильную склянку объемом 0,5 л водой, закрывают ее резиновой пробкой (при стерилизации пробка в бумажном колпачке привязывается к горлышку склянки) над пламененм горелки, завязывают колпачок и производят следующую запись: откуда взята проба водфы, дата и час

отбора, день исследования и фамилия лица, отобравшего пробу.

Анализ воды должен быть произведен не позднее двух часов после ее отбора. Если это условие выполнить невозможно, то анализ надо выполнить не позднее чем через 6 час после отбора пробы при условии сохранения воды при темрераторе от 1 до 50C.

Воду артезианских скважин и водопроводную, поступающую в городскую сеть, анализируют в количестве от 333 до ?00 мл (г.Москва, Ленинград), воду открытых водоемов – в зависимости от предполагаемой степени загрязнения: от 10 мл и ниже.

Согласно ГОСТ 2874-73 «Вода питьевая» в воде определяется: общее количество микробов в воде (в 1 мл) и титр ВГКП (индекс).

1.Определение содержания общего количества микроорганизмов в 1 мл воды (определение микробного числа воды)

Под микробным числом воды понимают количество колоний, вырастающих на питательном агаре в чашке Петри из 1 мл исследуемой воыд после инкубации посева при 370C в течение 24 час.

В питьевой воде согласно соответствующему ГОСТу микробное число должно быть не более 100; в воде колодцев и открытых водоемов – допускается до 1000 в 1 мл.

Если анализируется заведомо чистая вода, тогда 1 мл ее стерильнойпипеткой вносят в стерильную чашку Петри, куда вливают из пробирки расплавленный питательный агар, охлажденный до 450C. Осторожно поворачивая чашку вращательными движениями, смешивают воду со средой (крышка чашки должна быт закрыта). Дают среде застыть, а затем чашку Петри, перевернутую вверх дном, устанавливают в темостат при 370Cна 24 час. После этого подсчитывают количество выросших колоний и таким образом определяют содержание микроорганизмов в 1 мл воды.

В случае исследования загрязненной вды в связи с большим содержанием в ней микроорганизмов производят ее разведение в 10, 100 или 1000 раз с таким расчетом, чтобы после прорастания в чашке Петри было не менее 30 и не более 300 колоний, за исключением тех случаев, когда в 1 мл воды бедет меньше 30 микробов. Приготовление разведений: в пробирку №1, содержащую 9 мл стерильной водопроводной вды, соблюдая серильность, вносят стерильной пипеткой 1 мл исследуемой воды, тщательно перемешивают, вращая пробирку между ладоней и, одновременно

наклоняя ее вразные стороны, но не допуская смачивания ватной пробки. Получается разбавление исследуемой воды в 10 (1:10), т.е в 1 мл пробирки с водой содержится 0,1 мл исследуемой воды.

Затем из пробирки №1 стерильно переносят 1 мл в пробирку №2, в которой содержится 9 мл стерильной воды, тщательно перемешивают, получают второе разведение – 1:100 и т.д.

В подготовленные заранее стерильные чашки Петри со средой производится посев исследуемой воды подготовленных разбавлений. Чашек Петри нужно подготовить столько, сколько предполагается делать посевов из различных разбавлений.

Допустим, что производится посев исследуемой воды. Для этого перед взятием засевного материала содержимое пробирки разведения 1:10 перемешивают, как отмечалось выше, и с помощью стерильной пипетки набирают 1 мл данного разведения и вносят на середину чашки Петри. Крышку чашки при этом слегка приподнимают. После этого в чашку вливают из пробирки, соблюдая стерильность, 15 мл расплавленного и охлажденного до 450C питательного агара. Перед вливанием агара в чашку, ватную пробку, которой была закрыта пробирка и края пробирки слегка обжигают на пламени спиртовки.

Влитый в чашку агар быстро, но осторожно смешивают с исследуемой водой путем вращения чашки во све стороны. Необходимо избегать незалитых агаром участков чашки, образования пузырьков и попадания реды на борта чашки.

Таким образом производится посев и других разбавлений (1:100, 1:1000 и т.д.).

После тщетельного перемешивания чашки с агаром оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания агара. На донышках чашек делают надпись с указанием номера пробы воды, разведения и дату посева. Чашки с посевами устанавливают вверх дном в термостат при температуре 370C на 24 часа.

По истечении указанного времени производится подсчет выросших колоний на твердой питательной среде и с учетом разбавления рассчитывается количество микроорганизмов, содержащихся в 1 мл неразбавленной воды.

Пример расчета: В чашку Петри №1 с питательным раствором агара произведен посев 1 мл воды в разведении 1:100. Выросло колоний 34. Количество микроорганизмов в 1мл исследуемой воды составит:

34х100 = 3400м:т:

Если параллельно произведен посев в несколько чашек одинакового разбавления, тогда вычисляют среднее число выросших колоний. Если в чашках с посевами выросло более 300 колоний, допускается подсчет на отдельных секторах (например, 20 квадратов по 1см2) с помощью счетного прибора.

Для подсчета количества колоний на всю площадь чашки пользуются формулой:

X = A B

Б

где X – количество колоний на всей чашке, А – количество колоний в подсчитанных квадратах, B

– количество подсчитанных квадратов, Б – площадь чашки в см2, B = r2, r – радиус чашки в см.

После определения содержания микроорганизмов в 1 мл воды, необходимо дать заключение о ее качестве, руководствуясь ГОСТом.

Для того, чтобы иметь некоторое предствавление о микромлоре исследуемой воды, надо дать общую храрактеристику выросших колоний, т.е. описать их цвет, форму, размеры, вид поверхности колоний (сухие, слизистые, неровные или ровные края), запах из чашки и др. Затем из наиболее характерных колоний (обязательно зарисовать) приготовить мазки и промикроскопировать – привести характеристику рассматриваемого микроорганизма (форма, мелкие или крупные клетки, взаиморасположение отдельных клеток между собой).

2.Определение содержания в воде бактерий группы кишечной палочки методом мембранных фильтров

Метод мембранных фильтров разработан в СССР. Этим методом количество бактерий группы кишечной палочки определяют непосредственно подсчетом колоний. Этот метод имеет ряд преимуществ перед бродильным методом:

1.Простота

2.Ускорение анализа

3.Мембранные фильтры с выросшими колониями можно высушить и после обрабоки формалином длительно хнанить как документ, подтверждающий правильность проведенного анализа.

4.Экономия питательных сред, меньше расход посуды и реактивов.

Этот метод эффективен при контроле воды централизованного водоснабжения, но мало пригоде при исследовании воды с большим содержанием взвешенных частиц. Недостатком мембранного метода является снижение способности прорастания отдельных клеток в колонии вследствие неплотного прилегания фильтра к поверхности питательной среды и недостаточной диффузии питательных веществ через фильтр.

Для фильтрации воды применяются мембранные фильтры, которые представляют собой пористые нитроцеллюлозные плленки, выпускаемые в виде кружков диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм с различным диаметром пор.

Для исследования воды применяют фильтр №3, в котором средний диаметро пор составляет 0,7 мкм.

Всухом виде мембранные фильтры пригодны к использованию в течение года. Для более продолжительного хранения их помещают в герметически закрытую склянку с притертой крышкой, в которую наливают 30%-ый водный раствор спирта, который раз в 3 месяца заменяют новым.

Перед началом анализа фильтры, вынутые из фабричной упаковки, проверяют на отсутствие повреждений – отверстий, трещин и надломов, после чего опускают в по одному в химический стакан с дистиллированной водой, подогретой до 800C. Фильтры кипятят при слабом нагревании 10 мин, меняя 2-3 раза воду. Это делается с той целью, чтобы удалить из фильтров воздух и остатки растворителей, применяемых при их изготовлении.

Во избежания нарушения пор фильтров пузырьками водяного пара сильное кипение вды не допускается.

Подготовленные таким образом фильтры используют сразу же после некоторого охлаждения воды, но стакан при этом должен быть накрыт крышкой или чашкой Петри.

Фильтрацию воды производят на металлических фильтарх Зейтца с сеткой.

Непосредственно перед фильтрованием воды фильтр Зейтца обжигают факелом. После охлаждения на фильтровальный столик прибора укладывают обожженым пинцетом мембранный фильтр.

Затем на фильтр накладывают воронку и плотно завинчивают. В ворону наливают необходимый объем исследуемой воды, и прибор соединяют с водоструйным насосом. Вакуум в приемном сосуде (колбе Бунзена) должен быть не менее 0,5 атм (4; 9x104 н=м2).

При исследовании водопроводной воды для фильтрации берут такое количество воды, чтобы выросло не более 50 колоний.

Взависимости от степени загрязненности воды для фильтрации берутся разные объемы воды. Так, при исследовании водопроводной воды для анализа берут от 333 до 500 мл; для воды, иссле-

дование которой производят впервые, берут 1000, 500, 100, 10, 5 и 1 мл. Однако через 1 мембранный фильтр фильтруют не более 100 мл воды.

Загрязненные воды перед фильтрованием предварительно разводят стерильной водой. Для этого к 100 мл стерильной воды привавляют 1 мл иследуемой воды и фильтруют.

По окончании фильтрации воронку снимают, и, сохраняя вакуум, фильтр осторожно приподнимают за край обожженным пинцетом (при этом удаляются излишки влаги на нижней стороне фильтра) и переносят его, не переворачивая, на поверхность фуксинсульфитного агара (среду Эндо) в чашку Петри, избегая образования пузырьков воздуха между поверхностью агара и ультафильтра. На чашке обычного диаметра можно поместить 3-4 фильтра, при этом на дне чашки под фильтром делают надпись с указанием даты посева, номера анализа и объема профильтрованной воды.

Чашки с фильтрами устанавливают в термостат при температуре 370C на 18-24 часа.

По истечении указанного срока фильтры просматривают с помощью лупы, дающей увеличение в 5-10 раз, и производят подсчет лишь тех колоний, которые характерны для бактерий группы кишечной палочки: темно-красные с металлическим блеском и без него, розовые, прозрачные.

Из каждого типа колоний делают мазки и окрашивают по Граму и микроскопируют. Если в мазках обнаружены грамотрицательные палочки, то из этих колоний делают посев в пробирки с разведенной глюкозо-пентонной средой. Посевы помещают в термостат при температуре 430C на 24 часа. Газообразование (сбраживание глюкозы) дает окончательный ответ (положительный) на наличие бактерий группы кишечной палочки.

Пример расчета.

1.Через фильтр было пропущено 300 мл исследуемой воды. Выросло на фильтре 3 колонии кишечных палочек.

Коли-титр воды равен: 300 : 3 = 100 Коли-индекс равен: 1000 : 100 = 10, т.е. в 1 л воды содержится 10 кишечных палочек.

2.Профильтровано два объема воды по 100 мл на два фильтра: на первом фильтре выросло 9 колоний, на втором 11. Всего в объеме 200 мл выросло 20 колоний.

Коли-титр равен: 200 : 20 = 10 Коли-индекс равен: 1000 : 10 = 100, т.е. в 1 л воды содержится 100 кишечных палочек.

Оформление работы Работа по анализу воды оформляется в принципе так же как это приведено для примера анализа

воздуха.

Схема оформления данной работы следующая:

1.Название выполненной работы.

2.Дата выполнения.

3.Описание методики определения микробного числа воды (общего содержания микроорганизмов в 1 мл воды)

4.Описание методики определения содержания в воде бактерий группы кишечной палочки (метод мембранных фильтров)

Привести соответствующие расчеты по анализам и дать заключение о качестве исследуемой воды.

Обязательно необходимо указать, из какого источника водоснабжения анализировалась вода, как отбиралась проба воды.

5.Привести подробную характеристику микроскопирования бактерий из мазков, приготовленных из развившихся колоний, зарисовать.

Литература

1.Голубовская Э.К. Биологические основы очистки воды. М. Высшая школа, 1978.

2.Вода питьевая. ГОСТ 2874-73

3.Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа. ГОСТ 1896373.

4.Руководство по химическому и технологическому анализу воды. Всесоюзный научно-исследовательский институт Госстроя СССР. – М. Стройиздат, 1973.

5.Руководство к практикуму по химии воды. Методическое пособие. Свердловск. Издание УПИ, 1972.

6.Сидоренко Г.И. Методы санитарно=микробиологического исследования объектов окружающей среды. М.: Механика, 1978.

7.Баранова А.Г. Практикум по химии воды. М.: Высшая школа, 1971.

СОДЕРЖАНИЕ

30