17. Внутривидовая идентификация бактерий.

После выделения чистой культуры можно идентифицировать бактерии внутри вида по активности их ферментов и способности расщеплять углеводы, белки и жиры.

Например:

• Определение серотипа сальмонелл при брюшном тифе по способности расщеплять углеводы до кислоты и газа, или отсутствию одного или обоих признаков.

• Внутривидовая идентификация по способности расщеплять галактозу, глюкозу, сахарозу и мальтозу.

18. Питательные среды, их классификацию. Требования к пс.

1. По происхождению: Естественные– молоко, крахмал, картофельные, яичные иИскусственные

2. По составу:

• Простые– являются основой для других сред. На простых средах растет большинство бактерий.

– МПБ – мясо-пептоный бульон – готовится из мясного бульона, обрабатывается ферментом пепсином, в результате чего образуется продукт неполного расщеплении белков – пептоны и до 70% свободных аминокислот.

– МПА – мясо-пептоный агар – это МПБ и уплотнитель агар-агар.

• Сложные– содержат различные биологические добавки или сыворотки, химические соединения, антибиотики.

3. По консистенции: Жидкие, Плотные, Полужидкие

Уплотнителем питательных сред является агар-агар – полисахарид из водорослей, он не переваривается ферментами бактерий, уплотняется при температуре 36-40⁰С.

4. По назначению питательные среды могут быть

• Среды обогащения– магниевая среда, сахарный МПБ

• Элективные среды– это среды, на которых одни виды бактерий получают преимущество для развития (возбудитель холеры хорошо растет на щелочном пептоном бульоне).

• на них хорошо развиваются определенные виды м/о (для стафилококка – желточно-солевой агар, в присутствии соли он хорошо развивается, ).

• Дифференциально-диагностические среды– это среды, на которых может отдифференцировать один вид м/о от другого по определению у них биохимических свойств.

  • Гемолитические свойства у стафилококков, стрептококков и других бактерий определяют на кровяном агаре – α-гемолитический образует бесцветные колонии, а β-гемолитический – зеленые колонии.

  • Сахаролитические св-ва – определяются на ПС с углеводами и различными индикаторами:

– среды Гисса – содержат глюкозу, мальтозу, лак­тозу, сахарозу, маниит… и индикатор Андреде (кислый фуксин в растворе NaOH). При разложении субстра­та среда приобретает красный цвет.

– среда Эндо – лактозный агара с индикатором (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия Na₂SO₃. Лактозо(+) – колонии красного цвета с металлическим блеском, лактозо(–) – бесцветные.

– Среда Левина – лактозный агар с индикатором (эозин и метиленовый синий), лактозо(+) – колонии красно-фиолетового цвета с металлическим блеском, лактозо(–) – бесцветные.

5. Консервирующие среды– предотвращают отмирание бактерий, например среды с глицерином

6. Среды для анаэробов:

• Китт-Тароцци – питательный бульон с 0,5% глюкозы и кусочками печени для адсорбции кислорода

• Вильсон-Блера – железосульфитный агар, на котором патогенные анаэробные клостридии образуют колонии черного цвета за счет восстановления Na₂SO₃ в Na₂S, который при соединении с хлоридом железа дает черный цвет.

Параметры питательных сред.

1. Определенный рН (определенная концентрацию Н⁺), для большинства ≈ 7,0.

2. Должна иметь воду и определенное осмотическое давление

3. В питательной среде должны быть источник и углерода.

4. Должна содержать серу и азот (сульфаты и нитраты)

5. Должен быть O₂или без него для анаэробов.

6. Должны быть микроэлементы (добавляют в виде солей).

7. Должна иметь оптимальную температуру (создается в термостатах)

По отношению к температуре бактерии подразделяются

• Тепофилы– оптимальная температура 40-80⁰С.

• Психрофилы(криофилы) – они развиваются приtниже 20⁰С.

• Мезофиллы– развиваются приt20-42⁰С (чаще всего 37⁰С)

8. Питательная среда должна содержат факторы роста.

Факторы роста – это вещества, которые вводят в бактериальную клетку, но эти вещества бактерия сама не способна синтезировать (пурины и пиримидины, витамины).

По потребностях в факторах роста бактерии делятся

• Прототрофы– не нуждаются в факторах роста

• Ауксотрофы– они нуждаются в факторах роста

9. Питательная среда должна быть более прозрачной

10. Питательная среда должна быть стерильной