MEDITsINSKAYa_VESNA-2015

Сх43 антител может оказывать влияние на экспрессию других белков данного семейства–коннексин-36(Сх36) и коннексин-50 (Сх50).

Цель: провести количественный анализ экспрессии Сх43, Сх50, Сх36 в сетчатке после двукратного введения анти-Сх43 антител беременным самкам на 10 и 17 дни гестации.

Материалы и методы: В эксперименте оценивали экспрессию Сх43, Сх36 и Сх50 в сетчатке у потомства крысы, получавшей анти-сх43 антитела в гестационном периоде, методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ ПЦР) на 1 и 2 неделе жизни. В исследование было включено потомство 2-х самок (средний вес 200220 грамм, возраст 3 месяца, самки достоверно не отличались p<0.05), одной из которых были введены моноклональные анти –Сх43 антитела на 10 и 17 дни гестации. Потомство самки, получившей специфичные антитела (8 детенышей), составило экспериментальную группу; не получившей антител (8 детенышей) – контрольную группу. Для обработки статистических данных использовалась программа

SPSSStatistics 17.0.

Результаты: было обнаружено, что при введении анти-Сх43 моноклональных антител, полученных ко 2-й внеклеточной петле Сх43, беременной самке у потомства наблюдается повышение экспрессии Сх43 (p<0,01) снижение экспрессии Сх36 (p<0,05), повышение экспрессии Сх50 (p<0,05) в сетчатке.

Выводы: введение моноклональных анти-Сх43 антител влияет не только на экспрессию Сх43, но и на Сх50 и Сх36, что может послужить основой для более детального изучения патогенеза врожденных заболеваний зрительного тракта.

Ключевые слова: коннексины, анти-коннексин-43 моноклональные антитела, сетчатка

CELL-FREE DNA AND EMOTIONAL STRESS: ARE THEY

CORRELATING?

ЖАРОВА М.Е.

Научный руководитель: проф., д.м.н. Умрюхин П.Е.

ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России постерный доклад

Background: In consideration of recent trend to increase psychological disorders associated with emotional stress (ES) it's important to study one. Effective prevention of ES can be accomplish after it`s detailed study. One

431

way to understand ES is to detect it`s marker. Konorova IL et al. (2012) demonstrated an increase of circulating DNA (cDNA) concentration in the rats’ blood after stress. Yet it is unclear if there are any changes in cDNA concentration in the cerebrospinal fluid (CSF) after stress. The aim of the present study is to compare cDNA concentration in the CSF of rats with different emotional stability (stress resistance) before and after ES.

Methods: A total of 22 male Wistar rats weighing 200-220 g were included in this study. All rats were divided into 3 groups depending on the motor activity: active (prognostically resistant to ES) – 9, animals predisposed to ES (passive) – 10 and ambivalent - 3 rats. The CSF was collected by puncture of the cisterna magna of the brain.

CfDNA was detected by phenol method in the samples diluted by saline to

400µl.

Results: The median concentration of cDNA in CSF the test animals made 27 ng/ml in passive, 68 ng/ml in active rats and 20 ng/ml in ambivalent. Median concentrations of cDNA in the CSF of rats after ES made 32, 46, 23 ng/ml for passive, active and ambivalent animals respectively. The difference between samples before and after ES was notstatisticallysignificant (p=0, 06).

In spite of foregoing experimentalanimalsdivided into two groups withstatistically significant difference in the CSF cDNA concentration – with high andlow cDNA concentration per probe. 70% animals with high level of cDNA in CSF were active rats and 30% - passive. The level of cDNA after ES showed a tendency to decrease in active animals, to increase in passive rats and didn`t change in ambivalent rats.

Conclusion: Some differences in cfDNA concentration in the CSF of active and passive rats we found. Active (stress resistant) rats demonstrated a predisposition to a higher cDNA level in the CSF in comparison to passive (stress-predisposed) animals. After ES, the cDNA level decreases in active rats and increases in passive ones. We need to continue our studies to explain these effects and determine the source of cDNA in the CSF. Therefore, our data suggests that the CSF cDNA may be used as a stress predisposition indicator.

Key words: emotional stress, cfDNA, CSF.

432

ПРОТИВОВИРУСНАЯ ЗАЩИТА КЛЕТКИ – МЕХАНИЗМЫ СУВЕРЕННОГО ИММУНИТЕТА

ЗУБАЧЕВА Д. О.

Научный руководитель: заведующий лабораторией молекулярной иммунологии, д.м.н. Свитич О. А.

ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России Введение: Иммунитет – это защита организма от потенциальной инфекции. Исследования показали, что существуют механизмы внутриклеточной защиты (суверенный иммунитет). Особенно важную роль играет их активация во время вирусной инфекции. Одним из таких путей является механизм распознавания нуклеиновых кислот специфическими белками OAS и cGAS. При инфицировании клетки РНК-содержащим вирусом OAS, выполняющая функции как рецептора, так и фермента, синтезирует 2’-5’ олигоадениловый нуклеотид, который связывает мономеры РНКазыLи активирует еѐ. РНКазаLразрушает мРНК, находящиеся в клетке, что ведѐт к остановке размножения вируса и индукции апоптоза. Если же в клетку попадает ДНК – содержащий обратно транскрибирующийся вирус, то активированная этой молекулой cGAS синтезирует cGAMP, который, взаимодействуя с STING, ведѐт к активации NF-kB и экспресcии генов, ответственных за антивирусную защиту.

Цель:Разработать систему invitro для определения влияния вируса герпеса простого на сигнальные пути суверенного иммунитета. Материалы и методы: Пересев клеток Vero проводили на 3-4 сутки. Культивирование осуществляли с использованием полной культуральной среды (среда DMEM с 5-10% содержанием эмбриональной сыворотки телят (ЭСТ)). Для проведения опытов использовали 96-луночные плоскодонные планшеты (COSTAR, США). В каждую лунку вносили по 200 мкл клеточной взвеси (концентрация 200 тыс. клеток в 1 мл). Через 24 ч (48ч) инкубации при 37оС в атмосфере СО2 в лунках формировался монослой клеток, далее в плашке проводили эксперименты, для чего использовали культуральную среду с 2% ЭСТ. К монослою клеток добавляли CpG антиген в разных разведениях – 1 ОЕ, 0, 1 ОЕ, 0,01 ОЕ. Через 4 и 7 дней проводили выделение РНК (набором РИБОсорб, ИЛС) и ОТ-ПЦР. Результаты: Нами была отработана система invitro, которая позволит в перспективе оценить экспрессию показателей сигнального пути (OAS, cGAS, XBP1Fwd, XBP1s-rev, PERK, ATF6, IRE1, ATF4, eiF2a)

433

суверенного иммунитета в ответ на вирусные антигены (нуклеиновые кислоты и др.).

Выводы: Нарушения механизмов суверенного иммунитета лежат в основе персистенции инфекции.

Ключевые слова: иммунитет, OAS1, STING, герпес, культура клеток

ИССЛЕДОВАНИЕ ПАРНЫХ КОРРЕЛЯЦИЙ ПРИ ФОРМИРОВАНИИ УСТОЙЧИВОСТИ ОРГАНИЗМА К УСЛОВИЯМ ГИПОКСИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ

РЯПОЛОВ А.В.

Научный руководитель: доц., к.м.н. Королѐв Ю.Н. Военно-Медицинская Академия имени С. М. Кирова Министерства обороны Российской Федерации

Введение: Изучение данного вопроса имеет большое значение в вопросах общей и спортивной физиологии, а также играет огромную роль в вопросах физиологии военного труда в условиях пониженного парциального давления кислорода в атмосферном воздухе.

Цель:исследование коэффициента парных корреляций (КПК) между показателями работы сердечно-сосудистой и системой крови при формировании устойчивости организма к гипоксической гипоксии.

Материалы и методы: В исследовании принимали участие 54 испытуемых курсанты - 2 курса 2 факультета. Регестрировалось содержание оксигемоглобина (SpO2) крови и частотой сердечных сокращений пульсоксиметром в исходном состоянии и при гипоксической нагрузке. Испытуемые были разделены на две группы по показателю содержания SpO2 устойчивых и неустойчивых.

Результаты: У устойчивы к гипоксии в исходном состоянии КПК составил на 1 минуте -0,42. ; на 5 минуте -0,21. При гипоксической нагрузке КПК на 1 минуте -0,42; на 5 минуте -0,20; на 10 минуте -0,41; на 15 минуте -0,19. При восстановлении КПК на 1 минута -0,50; на 5 минута -0,50. У неустойчивые к гипоксии были полученны следующие показатели КПК на 1 минуте -0,51 ; на 5 минуте -0,58; При гипоксической нагрузке на 1 минуте -0,06; на 5 минуте -0,52; на 10 минуте -0,01; на 15 минуте -0,57. При восстановлении КПК на 1 минута -0,05; на 5 минута -0,03.

Выводы: Полученные результаты позволяют заключить, что при формировании устойчивости организма к гипоксической гипоксии не формируются положительные межсистемные взаимосвязи между

434

сердечно-сосудистой и системой крови, однако КПК у устойчивых испытуемых были выше.

Ключевые слова: Гипоксия, устойчивость, тренировки, парные корреляции. Hypoxia, investigations, pair correlations, training, stability.

ПОТЕНЦИАЛ ТЕХНОЛОГИИ CAS9/gRNA В ЛЕЧЕНИИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ И ИММУНИЗАЦИИ ПРОТИВ ВИЧ

КАТУНИН Н.А.

Научный руководитель: проф., д.м.н. Быков А.С.

ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России Введение: На 2015 год ВИЧ-инфекция остаѐтся неизлечимым заболеванием. Персистенция ВИЧ в клетках-резервуарах и способность реактивироваться после курса АРТ – основная причина невозможности полного уничтожения вируса в организме. В настоящее время идѐт поиск безопасных способов исключения ДНК провируса ВИЧ-1 из генома инфицированных клеток. Наиболее новой и совершенной технологией является технология, базирующаяся на системе

CRISPR/Cas9, полученной из Streptococcuspyogenes.

Цель: Анализ потенциала технологии Cas9/gRNA в лечении ВИЧинфекции и иммунизации против ВИЧ Материалыиметоды:Ретроспективныйанализданныхисследований

Yoshio Koyanagi (26.08.2013 Scientific Reports), Kamel Khalili (21.07.2014 Proceedings of the National Academy of Sciences), Juan Belomonte (10.03.2015 Nature Communications)

Результаты:Экспрессия комплекса gRNA/Cas9, направленного на область U3-промотора длинных концевых повторов (LTR) ВИЧ-1, ведѐт к мутациям в этой области и блоку реактивации провируса в клетках – моделях латентной ВИЧ-инфекции: CHME5 (микроглиальная клеточная линия с репортѐрным геном EGFP, под контролем U3промотора), J-Lat (Т-клеточная линия,EGFP+), U1/HIV-1 (промоноцитарная, субклон U937), TZM-bl(HeLa, luc+). Экспрессия Cas9/gRNA значительно уменьшает фракцию EGFP+ клеток CHME5 и J-Lat при обработке трихостатином А (TSA). Возможно полное блокирование TSA-индуцируемой реактивации провируса ВИЧ-1, определяемой методом флоуцитометрииEGFP. Показано, что система Сas9/gRNA способна инактивировать более одной копии провируса ВИЧ-1, расположенных на разных хромосомах. Предсуществующий в клетках комплексCas9/gRNAспособен устранять ВИЧ-1 до его

435

встраивания в геном хозяина. Длительная экспрессия Сas9/gRNAне оказывает негативного воздействия на рост и жизнеспособность клеток, указывая на низкую степень внемишеневой интерференции и возможной цитотоксичности белка Cas9.

Выводы:Предполагается клиническое применение технологии Cas9/gRNA особенно в области вирусных инфекций, генетических заболеваний и рака. Комплекс Cas9/gRNAспособен уничтожать геном ВИЧ-1 и эффективно иммунизирует клетки. Предстоит выяснить способен ли таргетинг провируса ВИЧ-1 обеспечить «стерильное» излечение от СПИДа. Исследования вакцинации от ВИЧ-1 на моделях животных со стабильной экспрессией Cas9/gRNA – следующий важный шаг для оценки способности Cas9-эндонуклеазы уничтожать резервуары вирусов invivo. Требуют изучения различные системы доставки Cas9/gRNA в клетки и ткани invivo. Становится возможной трансплантация модифицированных с помощью Cas9/gRNA аутологичных СКК для подавления ВИЧ-инфекции. Учитывая лѐгкость и быстроту разработки Cas9/gRNA в будущем возможно внедрение персонализированной терапии для отдельных пациентов на основе генотипирования ВИЧ-1.

Ключевые слова: CRISPR, Cas9/gRNA, HIV-1, genome editing, reservoir.

ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ ЭЛЕМЕНТОВ ЗАДНЕГО ФИКСИРУЮЩЕГО АППАРАТА КОЛЕННОГО СУСТАВА ЧЕЛОВЕКА В ОНТОГЕНЕЗЕ

КЛЯВЛИН С.В., ЯФАРОВА А.А., САГАДИЕВ Р.Р. Научный руководитель: доц., к.м.н. Рыбалко Д.Ю.

ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Минздрава России

Введение: В пренатальном онтогенезе морфология задне-латеральных структур коленного сустава отличается от таковой у взрослого человека. В данной работе представлены эти особенности с измерениями некоторых структур. В статье описана мышца, дано соотношение длин малоберцовой кости и подошвенной мышцы в разные периоды онтогенеза.

Цель: измерить и описать подошвенную мышцу сустава плодов и коленного сустава людей без патологии опорно-двигательного аппарата, соотнести длину мышцы и длину малоберцовой кости (МБК).

436

Материалы и методы: Материалом для исследования служили 8 коленных суставов от трупов плодов человека в возрасте 26-30 недель, 20 коленных суставов лиц пожилого возраста без патологии опорнодвигательного аппарата. Применялось макро- и макромикроанатомическое препарирование, фотографирование. Измерения производились штангенциркулем. Расчет и анализ статистических параметров – Excel 2013.

Результаты: Подошвенная мышца у плодов имеет достаточно массивное брюшко, проходящее косо от боковой поверхности латерального мыщелка бедренной кости и продолжающееся в тонкое сухожилие, которое, располагаясь между головками трехглавой мышцы голени, прикрепляется к пяточной кости. В изучаемом периоде постнатального онтогенеза эта мышца имеет разные варианты развития: от массивного до истонченного брюшка, либо полного ее отсутствия. Данная мышца у плодов занимает значительную часть дистального отдела подколенной ямки, у взрослых же является структурой, занимающей промежуточное положение между косой подколенной связкой и латеральной головкой икроножной мышцы. Следует отметить, что как у взрослых, так и у плодов в месте прикрепления к боковой поверхности латерального мыщелка бедренной кости у подошвенной мышцы можно выделить 2 части (большую – нижнюю и меньшую – верхнюю). Были проведены следующие измерения: длина мышцы по верхнему краю, длина по нижнему краю, ширина верхней части, ширина нижней части.

В результате измерений и обработки данных были получены средние значения: Плодные ножки: длина МБК 52,5±5,9 мм. Длина по верхнему краю-15,4±2,4 мм, соотношение с длиной МБК – 0,29; длина по нижнему краю – 13,7±0,3 мм, соотношение – 0,26; ширина верхней части – 5,6±2,4 мм, соотношение – 0,1.

Ампутированные конечности взрослых: длина МБК 342,1±23,0 мм. Длина подошвенной мышцы по верхнему краю – 90,95±16,7 мм, соотношение с длиной МБК – 0,27; Длина мышцы по нижнему краю – 74,25±8,1 мм, соотношение с МБК – 0,22. Ширина верхней части –

29,5±7,8 мм, соотношение 0,09.

Выводы: При сравнении полученных соотношений линейных характеристик МБК и подошвенной мышцы обращает на себя внимание некоторое преобладание относительных размеров изучаемой мышцы в пренатальном онтогенезе над таковыми в постнатальном. Однако для получения достоверных данных, а также определения

437

критических периодов развития этой мышцы необходимо большее количество наблюдений.

Ключевые слова: подошвенная мышца, связки коленного сустава.

ЭКСПРЕССИЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ГЛИКОПРОТЕИНА-Р В ТКАНЯХ КРОЛИКОВ

ПРИ ПОДОСТРОЙ ГИПОКСИЧЕСКОЙ ГИПОБАРИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ

КОЛЕСНИКОВА Л.Е.,ЩУЛЬКИН А.В., ЧЕРНЫХ И.В. Научный руководитель: проф., д.м.н. ЯкушеваЕ.Н.

ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России Цель:Изучить экспрессию и функциональную активность

гликопротеина-Р (Pgp) у кроликов при подострой гипоксической гипобарической гипоксии (ГГГ).

Материалы и методы: Исследование выполнено на 18 половозрелых кроликах-самцах породы Шиншилла, массой 3500-4300 г. Животные были разделены на 3 группы: 1 группа – интактные животные при изучении экспрессии Pgp (n=6), 2 группа – животные, подвергнутые

ГГГ при изучении экспрессии Pgp (n=6); 3 группа - животные, подвергнутые ГГГ при изучении функциональной активности Pgp (n=6). Моделирование ГГГ проводили с помощью подъема животных на высоту 6000 м в барокамере со скоростью подъема и спуска 15 м/с и экспозицией на высоте 4 часа. Животных 1 и 2 групп выводили из эксперимента методом воздушной эмболии. Для исследования забирали образцы печени, тонкого кишечника и почек. Экспрессию Pgp в исследуемых органах определяли иммуногистохимически. У животных 3 группы за 4 суток до начала эксперимента и сразу после гипоксического воздействия определяли функциональную активность Pgp по фармакокинетике его маркерного субстрата – фексофенадина, который вводили peros в дозе 67,5 мг/кг массы. Концентрацию фексофенадина в плазме крови определяли методом ВЭЖХ. Данные обрабатывали критерием Манна-Уитни (изучение экспрессии) или тестом ANOVA повторных измерений (оценка функциональной активности).

Результаты: Моделирование ГГГ приводило к увеличению экспрессии Pgp в гепатоцитах на 49,2% (p<0,05), в энтероцитах тонкого кишечника на 19,0% (p<0,05) и не влияло на экспрессию белка-транспортера в эпителии проксимальных почечных канальцев. Гипоксическое

438

воздействие вызывало достоверное (p<0,05) снижение Cmax и AUC0- tфексофенадина на 54,5% и 24,9% соответственно, что свидетельствует о снижении содержания фексофенадина в организме кроликов и повышении функциональной активности Pgp.

Вывод: Развитие подострой гипоксической гипобарической гипоксии приводит к повышению экспрессии и функциональной активности гликопротеина-Р.

Ключевые слова: гликопротеин-Р,гипоксия, фексофенадин.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СТАТУСА НЕЙТРОФИЛОВ, АКТИВИРОВАННЫХ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОЙ АКРИЛОВОЙ ПЛАСТМАССОЙ И СТОМАТОЛОГИЧЕСКИМИ ШТАМПОВАННЫМИ СТАЛЬНЫМИ КОРОНКАМИ

С НАПЫЛЕНИЕМ НИТРИД ТИТАНА

КОМАРОВА И.А., ХАСАНОВА Д.М. Научный руководитель: проф., д.м.н. Шишкова Ю.С.

ГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный медицинский университет Минздрава России

Введение: на сегодняшний день наблюдается рост потребности в зубном протезировании пациентов разных возрастных групп. Однако воздействие посторонних факторов, одним из которых могут являться и зубные протезы, может вести к патологическим изменениям состояния противоинфекционной защиты слизистой оболочки полости рта. Интерес представляет изучение иммунобиологических основ взаимодействия нейтрофилов, как основных клеток секретов слизистых оболочек, участвующих в регуляции микробиоценозов, и наиболее востребованных материалов для зубного протезирования.

Цель: изучить invitro лизосомальную активность, фагоцитарную функцию и НСТ-редуцирующую активность нейтрофилов после их активации стоматологической акриловой пластмассой и стоматологическими штампованными стальными коронками с напылением нитрид титана, сравнить полученныеданные.

Материалы и методы: для исследования использовались нейтрофилы, выделенные из венозной периферической крови 18 условно-здоровых доноров. Изучались лизосомальная активность, фагоцитарная функция

икислородзависимый механизм бактерицидности нейтрофилов,

439

пластмассой и нейтрофилов, инкубированных со стоматологическими штампованными стальными коронками с напылением нитрид титана. Проводились сравнительный анализ и статистическая обработка полученных результатов.

Результаты: получены следующие значения показателей функциональной активности нейтрофилов, инкубированных с розовой акриловой пластмассой и со штампованными стальными коронками с напылением нитрид титана соответственно: лизосомальная активность

- 24±7,19 % и 24,4±13,65 %, активность фагоцитоза - 79,4±9,64% и 50,2±15,49 %, интенсивность фагоцитоза - 2,37±0,88 и 3,04±0,86 усл.ед,

активность НСТ-теста - 34±9,55 % и 28±25,68 %, интенсивность НСТтеста - 0,23±0,09 и 0,34±0,23 усл.ед. Статистически значимых различий между значениями данных показателей у нейтрофилов, активированных исследуемыми стоматологическими протезными материалами, выявлено не было.

Выводы: полученные результаты указывают на идентичность функционального ответа нейтрофилов при их активации стоматологической акриловой пластмассой и стоматологическими штампованными стальными коронками с напылением нитрид титана.

Ключевые слова:neutrophils,immunity,phagocytosis, dentures

БИОХИМИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ

КОРОТКОВ Д.А.

Научный руководитель: доц., к.б.н Борисов Ю. П.

ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России Введение: Актуальность темы «костная регенерация» связана с клиническими условиями, при которых регенерация кости требуется с большей интенсивностью, например, при реконструкции крупных дефектов костей или при остеопорозе, особенно широко распространѐнным среди женщин старше 50 лет (постменопаузальный остеопороз). Терапия перечисленных состояний требуетглубокого понимания биохимических основ регенерации.

Цель: выявить ключевые звенья биохимической регуляции в регенерации костной ткани, что может служить основой фармакологической коррекции резорбции и формирования костной ткани.

440