MEDITsINSKAYa_VESNA-2015

достойным для широкого внимания специалистов в области онкологии и молекулярной биологии.

Ключевые слова: циркулирующая опухолевая ДНК, онкология, диагностика, онкологические маркѐры

ВОВЛЕЧЕНИЕ ОПУХОЛЕВЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК РАКА ПОЧКИ В ФОРМИРОВАНИЕ СТРУКТУР ВАСКУЛОГЕННОЙ МИМИКРИИ INVITRO

БАРДОВСКАЯ К.С.

Научный руководитель: д.м.н. Степанова Е.В. ФГБОУВО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Введение: Рак почки (РП) – злокачественное новообразование, характеризующееся высоким метастатическим потенциалом и химиорезистентностью. Васкулогенная мимикрия (ВМ) – особый вид кровоснабжения опухолей, характеризующийся наличием каналов, образованных низкодифференцированными опухолевыми клетками без привлечения эндотелиоцитов и окруженных базальной мембраной. Показано, что при РП она является неблагоприятным прогностическим фактором. Однако механизмы формирования ВМ и подходы к ее блокированию до сих пор не изучены.

Цель: Изучение вовлечения опухолевых стволовых клеток (ОСК) рака почки в формирование сосудисто-подобных структур (СПС) invitro. Материалы и методы: 1. Способность клеточных линий РП (SKRC1, SKRC52, SKRC59, Caki-1 и SN12C) к ВМ оценивалась invitro по формированию СПС на Матригеле (BDBioscience). 2. Анализ количества ОСК проводился с помощью теста ALDEFLUOR (StemCellTechnology), определяющего активность альдегид дегидрогеназы 1 класса (ALDH1).

Результаты: Клеточные линии РП SKRC1, SKRC52, SKRC59 и SN12C,

аналогично эндотелиоцитам, начинали формировать СПС через 2-8 часов после посадки клеток на Матригель, повторяя ангиогенный процесс in vivo. Клетки образовывали длинные, соединенные друг с другом трубочки, при этом отсутствовали незамкнутые, не ограниченные контактами с другими структуры. Caki-1 не была способна к формированию СПС invitro: клетки образовывали малые кластеры.

421

ALDH+ОСК обладают характеристиками стволовых: способностью к самовоспроизводству и формированию опухолей. Формирование СПС клетками SN12C сопровождается снижением количества ОСК: среднее количество при инкубации на пластике составляет 48,2±5,1%, а после 24-часовой инкубации на Матригеле – 20,8±6,1% (р<0,001), что может быть связано с их дифференцировкой в клетки с эндотелиальноподобными свойствами. При этом снижение количества ALDH+ ОСК после инкубации с индуктором дифференцировки DAPT до 27,4±2,0% приводит к формированию неполной сети с укороченными и утолщенными трубочками.

Выводы:Полученные результаты показывают, что ALDH+ клетки могут быть пулом клеток, которые дифференцируются в эндотелиоцитподобные опухолевые клетки на Матригеле. Изучение механизмов дифференцировки ОСК РП позволит обнаружить новые мишени для противоопухолевой терапии.

Ключевые слова: рак почки, васкулогенная мимикрия, опухолевые стволовые клетки

ВЛИЯНИЕ МЕЛАТОНИНА НА НОЦИЦЕПТИВНЫЕ РЕАКЦИИ У КРЫС ПРИ ОСТРОМ СТРЕССОРНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

БЕЛЯЕВА Е.В.

Научные руководители: проф., д.м.н. Перцов С.С.1, доц., к.м.н. Волков В.Ф.2

1 НИИ нормальной физиологии имени П.К. Анохина; 2 ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России

Введение: Нарушения нейроиммунных взаимодействий являются типовыми механизмами патогенеза болевых синдромов различной этиологии. Имеются данные о влиянии изменений иммунного статуса при стрессорных нагрузках на ноцицептивные реакции экспериментальных животных. Показано участие иммунных факторов в развитии феномена стресс-аналгезии у млекопитающих. Некоторые виды стресса у крыс, напротив, оказывают гипералгетический эффект. Актуальным представляется поиск эндогенных биологически активных соединений с иммуномодулирующими свойствами, способных предупреждать патологические изменения болевой чувствительности при острых стрессорных воздействиях. К ним относится эпифизарный нейрогормон мелатонин (М.), обладающий иммуномодулирующей активностью.

422

Цель: изучение действия М. на ноцицептивную чувствительность у крыс в динамике после острой стрессорной нагрузки.

Материалы и методы: Эксперименты проведены на 40 крысах-самцах Вистар. Животные были разделены на 2 группы: (I) в/б (внутрибрюшинное) введение физиологического раствора - 1 мл (контроль); (II) в/б введение М. в дозе 10 мг/кг (до 1 мл физиологического раствора). Все крысы подвергались 24 ч стрессорному воздействию (иммобилизация в пластиковых боксах) на 9-е сутки исследования. Вещества вводили на 1-е и 9-е сутки опыта.

Результаты: Ноцицептивные показатели у животных определяли в исходном состоянии и ежедневно в течение 17 суток. Оценивали перцептуальный и эмоциональный компоненты ноцицептивной чувствительности. Установлено, что при введении М. происходит статистически значимое усиление перцептуального компонента болевой чувствительности до стрессорного воздействия,но подавление– после однократного стресса.

Выводы: М. нивелирует выраженность изменений ноцицептивной чувствительности после острого стрессорного воздействия. Указанные изменения наиболее ярко представлены в динамике изменений показателей перцептуального компонента ноцицеции у крыс.

Ключевые слова: melatonin, nociception, neuroimmune inteactions,stress immobilisation.

ИЗУЧЕНИЕ РЕНТГЕНАНАТОМИИ ЗУБНОГО ЗАЧАТКА МЕТОДОМ КОМПЬЮТЕРНОЙ МОРФОМЕТРИИ

БОГЯН А. П.

Научный руководитель: старший преподаватель кафедры анатомии Чепендюк Т. А.

ГОУПриднестровский государственный университет им. Т.Г. Шевченко

Введение: Для объективной оценки степени минерализации тканей зубов, в ходе морфогенеза, была разработана методика, позволяющая проводить измерение плотности тканей зубов различной степени зрелости по единым стандартам.

Цель: Создать единую методику, позволяющую проводить морфометрические измерения оцифрованных рентгенограмм любого зуба, путѐм измерения плотности идентичных участков различных зубов.

Материалы и методы: На оцифрованных рентгенограммах проводим опорную прямую через края проксимальных точек тени корня развивающегося зуба.

423

В центре опорной прямой выделяем реперную точку, через которую возможно проведение “линий срезов” изучаемого объекта. Для сравнительной оценки уровня минерализации тканей зачатка, удобно воспользоваться срезом, проводимым через реперную точку и вершину бугра зачатка. С помощью компьютерной программы Image-Pro Plus 6.0проводим измерения плотности рентгенограмм по избранной линии среза.

Результаты: Данная программа выдает кривую плотности рентгенограмм, отражающую сравнительную минерализацию тканей зуба. На каждой кривой просматриваются участки, соответствующие пульпе, дентину и эмали зубного зачатка. Наибольшая степень плотности выявлена в эмали, что соответствует еѐ высокой степени минерализации. Графически это выглядит в виде наиболее возвышенного участка кривой плотности, а участки кривой в виде “провалов” позволяют визуализировать зону перифолликулярного пространства, которая локализуется между коронкой зубного зачатка и стенкой его крипты и соответствует зоне скопления жидкости. Участок кривой, соответствующий костной стенке представлен пиком, кнаружи от которого прослеживается зона пониженной минерализации.

Вывод: Данная методика позволяет: 1.выявить соотношение минерализованности тканей зачатка зуба и его крипты. 2. изучить рентгенанатомию зубного зачатка. 3. сравнить степень минерализации зачатков зубов на различных этапах их морфогенеза.

Ключевые слова: tooth rentgenanatomiya, computer morphometry, crypt.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЯДРА И ЦИТОПЛАЗМЫ КЛЕТОК МОНОЦИТАРНОГО РЯДА ПОСЛЕ ТРАНСМИГРАЦИИ В ТКАНИ

ВИЛОВА К. Г., КАШУТИН С. Л., СТЕПАНЕНКО Д.В. Научный руководитель: заведующий кафедрой кожных и венерических

болезней, д.м.н. Кашутин С. Л.

ГБОУ ВПО Северный государственный медицинский университет Введение: Известно, что миграция мононуклеарных фагоцитов в ткани при воспалении связана с изменениями их рецепторного аппарата [Фрейдлин И.С., 2003]. Закономерно предположить, что трансмиграция приводит к морфологическим изменения ядра и цитоплазмы.

Цель: Изучение морфологических изменений ядра и цитоплазмы мононкулеарных фагоцитов, мигрировавших в ткани при угревой болезни.

424

Материалы и методы. Морфологические изменения ядра и цитоплазмы мононуклеарных фагоцитов, выделенных из пустул 40 пациентов с угревой болезнью оценивали по методикам, предложенным Григоровой О.П. и Кассирским Н. А.

Результаты: Изменения ядра в виде вакуолизации регистрировали у 1,0% (0;2,0) промоноцитов, у 4,0% (2,0; 6,0) собственно моноцитов и у 2,0% (0; 4,0) полиморфноядерных моноцитов. Изменения только в цитоплазме клеток, в виде зернистости и вакуолизации, наблюдали у

6,0% (4,0; 14,0) промоноцитов, у 19,0% (14,0; 27,0) собственно моноцитов и у 5,0% (2,0;9,0) полиморфноядерных моноцитов. Среди сочетанных изменений регистрировали вакуолизацию ядра и цитоплазмы у 2,0% (0;4,0) промоноцитов, у 6,0% (2,0; 12,0) собственно моноцитов и у 3,0% (1,0; 5,0) полиморфноядерных моноцитов; вакуолизацию ядра и зернистость цитоплазмы - только у 4,0% (2,0; 6,0) собственно моноцитов и у 1,0% (0;3,0) полиморфноядерных моноцитов, вакуолизацию ядра и вакуолизацию с зернистостью цитоплазмы - у 3,0% (0; 6,0) промоноцитов, у 11,0% (8,0; 14,0)

собственно моноцитов и у 3,0% (1,0; 6,0) полиморфноядерных форм, вакуолизация ядра в сочетании с вакуолизацией, зернистостью и включениями в цитоплазме регистрировали только у собственно моноцитов в пределах 2,0% (0; 4,0).

Вывод: Развитие воспалительного процесса в тканях при угревой болезни сопровождается трансмиграцией мононукларных фагоцитов с последующими сочетанными морфологическими изменениями ядра и цитоплазмы.

Ключевые слова: трансмиграция, моноциты.

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНАЯ МОДИФИКАЦИЯ ПЛАЗМЕННОГО ФИБРИНСТАБИЛИЗИРУЮЩЕГО ФАКТОРА

ВЛАДИМИРОВА А.П.

Научные руководители: к.х.н. Бычкова А.В.1; проф., д.б.н.Розенфельд М.А.1

ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 1 ФГБУН ИБХФ им. Н.М. Эмануэля РАН

Введение: Фибринстабилизирующий фактор (FXIII) принадлежит к семейству трансглутаминаз и играет решающую роль в создании устойчивого тромба путем ковалентной стабилизации фибринового сгустка, сопровождающейся увеличением его механической прочности

425

иустойчивости к плазминовой деградации. Подобно многим другим белкам, циркулирующим в плазме крови, FXIII может подвергаться окислительной модификации под действием активных форм кислорода (АФК), что вызывает нарушение его функциональных свойств.

Цель: Целью данной работы было выявление структурных и функциональных изменений в плазменном фибринстабилизирующем факторе под действием окисления.

Материалы и методы: В работе был использован фибринстабилизирующий фактор, выделенный из человеческой плазмы

иокисленный молекулярным озоном на разных стадиях его активации. Для анализа модификации были использованы динамическое светорассеяние, ИК-спектроскопия и спектроскопия комбинационного рассеяния, УФ-спектрофотометрия, ПААГ-электрофорез, массспектрометрия.

Результаты: Совокупностью методов доказана зависимость степени структурных и функциональных изменений pFXIII от стадии активации белка, на которой было проведено его озон-индуцированное окисление. Выявлена модификация некоторых аминокислотных остатков. Наименьшие структурные и функциональные изменения наблюдались при окислении профермента, наибольшие – при окислении активной формы белка и профермента, обработанного ионами кальция.

Выводы: Полученные данные указывают на повреждение как химической структуры, так и пространственной организации плазменного фибринстабилизирующего фактора в результате окисления. Увеличение чувствительности белка к действию озона при разрыхлении белка и пространственном отстранении регуляторной субъединицы от каталитической может служить поводом предполагать, что регуляторная субъединица также выполняет функцию перехватчика свободных радикалов.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 15-04-08188 а.

Ключевые слова: fibrin-stabilizing factor; ROS.

426

АНАЛИЗ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ И СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМ К МОДЕЛИРОВАНИЮ ПСИХОЭМОЦИОНАЛЬНОГО СТРЕССА

У СТУДЕНТОВ МЕДИКОВ

ГИЗАТУЛЛИНА Г.Р., ТУРЧИНА В.В., СУФЬЯНОВА К.Р., ХМАРА П.Г., ВЕНГЕР Ю.В., ВЫПИРАЙЛО Е.А.,

ПЕТЛЕВАННЫЙ Е.В., КРИВОНОСОВА М.Ю., ГОЛОВИНСКАЯ В.А. Научный руководитель: доц., к.м.н. Залата О.А.

ФГАОУ ВО Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского Медицинская академия им. С.И. Георгиевского

Введение: В условиях все возрастающего информационного прессинга и расширении за счет интернет ресурсов способов получения информации, у целевой аудитории возникают новые риски формирования психо-эмоционального напряжения, в том числе и у студентов.

Цель: Сравнительный анализ чувствительности центральной нервной и сердечно-сосудистой систем в условиях психо-эмоционального стресса у студентов медиков.

Материалы и методы:В обследовании принял участие 31 студентМА им. С.И. Георгиевского, 18-19 лет. У волонтеров в состоянии покоя, после просмотра индифферентного ролика и после демонстрации видеосюжетов интернет сервиса YouTube, содержащих кадры жестокости и насилия (5 минут) регистрировали: биоэлектрическую активность мозга (электроэнцефалография, Tredex); показатели гемодинамики (осциллометрия, Microlife BP 3AG1); оценивали психоэмоциональные характеристики личности (индивидуальное тестирование). Для анализа данных использовали (M±SD), критерий Стьюдента.

Результаты: Оценка ситуативной тревожности испытуемых после просмотра видеосюжетов обнаружила повышение этого показателя до 42,25±9,1 баллов по шкале Спилбергера-Ханина по сравнению с исходным уровнем 40,9±8,1 балла. Наиболее реактивными на просмотр значимых видеосюжетов были показатели биоэлектрической активности мозга испытуемых. Обнаружили достоверные изменения спектра плотности медленно-волновой и высокочастотной части ЭЭГдиапазона (0,05≤р≤0,01). Их увеличение указывало на усиление эмоционального фона и внутренней психической активности студентов при зрительном восприятии видеокадров, содержащих сцены жестокости и насилия. В этих же условиях не удалось обнаружить

427

существенных сдвигов в состоянии гемодинамики волонтеров, имели место изменения только на уровне тенденции.

Выводы: В условиях предложенной модели психо-эмоционального стресса наиболее чувствительными показателями у студентов медиков были корреляты нервных процессов – параметры биоэлектрической активности мозга.

Ключевые слова: студенты, стресс, нервная система, гемодинамика

ВЛИЯНИЕ РАЗНЫХ ДОЗ ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ НА СТРУКТУРУ СЛЕПОЙ КИШКИ

ДЕВЯТОВА Н.В., КУНИЦА В.Н., ЯРОВАЯ О.Я., НОВОСЕЛЬСКАЯ Н.А., ЕГОРОВ Н.Г., КУНИЦА В.В., ВОЮЦКИЙ В.П.,

Научный руководитель: доц., к.м.н. Кривенцов М.А. ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского» Медицинская академия

им. С.И. Георгиевского Введение: Ксеногенная цереброспинальная жидкость (КЦСЖ)

обладает уникальными физико-химическими и биологическими свойствами, но данных о влиянии еѐ на структуры слепой кишки (СК), нами не найдено.

Цель: определить изменения слизистой оболочки СК крыс при парентеральном введении КЦСЖ в зависимости от дозы.

Материал и методы: КЦСЖ получали от коров путем субокципитальной пункции с дальнейшей криоконсервацией в жидком азоте при температуре –196°С. В эксперименте использовали 12 самцов белых крыс линии Вистар, разделенные поровну на 2 серии. В 1-й вводили КЦСЖ один раз в 3 дня из расчета 2 мл на 1 кг массы животного. 2-й группе вводили КЦСЖ однократно в дозе 10 мл/кг массы. Контролем служили интактные крысы. Животные выводились из эксперимента на 14-е сутки. Проводились общепринятые гистологические исследования.

Результаты: У интактных крыс число желез составляет 86,97±8,62 на 1мм2. Длина желез составляет 405,73±28,52мкм, ширина 83,26±7,24мкм. В 1-й группе плотность желез значительно увеличивается. Число их на 1мм2 составляет 96,25±11,26, длина –

430,42±37,89мкм, ширина – 90,56±8,27мкм. Много гипертрофированных бокаловидных клеток. Увеличивается толщина слизистой оболочки, число пейеровых бляшек, и их размеры. Растет число межэпителиальных лимфоцитов, гранулоцитов и макрофагов. В

428

целом, изменения в СК свидетельствуют об активации синтетических процессов. Во 2-й группе отмечаются обратные процессы. Число желез на 1мм2 составляет 79,27±10,34, длина – 371,48±40,83мкм, ширина – 76,62±9,28мкм. Уменьшается количество бокаловидных клеток. Собственная пластинка слизистой оболочки разрыхлена, бедна клеточными элементами. Уменьшается толщина слизистой оболочки, количество и размеры пейеровых бляшек. В целом, картина представлена явлениями атрофии.

Выводы: КЦСЖ в дозе 2 мл на 1 кг массы животного может использоваться для стимуляции репаративных процессов в структурах СК. Доза 10 мл/кг массы, приводит к развитию процессов атрофии.

Ключевые слова: цереброспинальная жидкость, слепая кишка;cerebrospinalfluid, cecum

РАЗРАБОТКА НОВОГО ПОДХОДА К ОЦЕНКЕ РИСКА РАЗВИТИЯ КРИЗА ОТТОРЖЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА

ДОКШУКИНА А.А.

Научный руководитель: д.б.н. Кофиади И.А. Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова Факультет Фундаментальной Медицины; НПФ «ДНК-технология»

на базе НИИ Иммунологии Введение: Применение ПЦР-диагностики для изучения степени

отторжения трансплантата при пересадке органов является перспективным путем развития трансплантологии. При отторжении органа в крови у реципиента появляется следовое количество ДНК донора, и чем выше степень отторжения, тем больше количество ДНК.

Цель: Разработать высокоспецифическую тест-систему, распознающую короткие фрагменты ДНК донора среди молекул ДНК реципиента, и определить степень начавшегося отторжения и, возможно, предотвратить его, изменив тактику лекарственной терапии. Материалы и Методы: сбор образцов крови, выделение ДНК разными видами экстракции, постановка PCR-realtimeи анализ библиотеки результатов.

Результаты: 1.Оптимизация процедуры выделения ДНК. Степень эффективности метода выделения ДНК оценивалась с помощью проведения ПЦР с тест-системой IC443. Был выбран метод фенольной экстракции. 2.Выбор тест-системы. Было проанализировано 17 систем. Выбрана пара праймеров, позволяющая на фоне мажорной

429

последовательности избежать неспецифических сигналов. 3.Генотипирование доноров и реципиентов. С помощью выбранной пары праймеровпроизведено генотипирование образцов. Далее выбиралась пара донор-реципиент, генотипы которых отличались, для того, чтобы в следующем этапе эксперимента установить минорные мишени в биообразцах. 4.Установка минорных мишеней в биообразцах. Данный этап необходим для определения порога чувствительности тест-системы. Было показано, что выбранная тест–система высокоспецифична к минорным фрагментам ДНК в очень низких концентрациях и не создает фонового сигнала от ДНК реципиента.

Выводы: 1. Была разработана высокоспецифичная тест–система, с помощью которой будет возможна идентификация отторжения трансплантата на ранних его этапах. 2. Необходимо апробировать данную методику на большей выборке. 3. При подтверждении гипотезы на большой выборке будет возможно широкое применение разработанной методики в лечебных учреждениях.

Ключевые слова: отторжение трансплантата, тест-система, генотипирование, минорные мишени.

ВЛИЯНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИ-КОННЕКСИН-43 АНТИТЕЛ НА ЭКСПРЕССИЮ КОННЕКСИНА-43, КОННЕКСИНА-36 И КОННЕКСИНА-50 В СЕТЧАТКЕ У КРЫС

ДУДАРЕВА А.В., КОШКИН Ф.А., ЛЕОПОЛЬД А.В., ЧЕРНИКОВА Н.А., ЮСУБАЛИЕВА Г.М.

Научный руководитель: старший научный сотрудник фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ «Государственный научный центр социальной и судебной психиатрии им. В. П. Сербского»

Минздрава России, к.м.н.Юсубалиева Г.М.

ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России Введение: Коннексин-43(Сх43)–белок щелевых контактов, функцией которого является участие в процессах миграции и дифференцировки клеток ЦНС. Сетчатка – периферическая часть зрительного анализатора, которая оказывается наиболее доступной для исследования зрительного анализатора. Известно, что при введении анти-Сх43 моноклональных антител, полученных ко 2-й внеклеточной петле Сх43, во время гестации наблюдаются расстройства когнитивных функций у потомства, однако характер изменения экспрессии белка остается неизвестным. Необходимо также оценить, как введение анти-

430