- •Федеральное агентство по здравоохранению и социальному развитию
- •Индивидуальная карта учёта рейтинга успеваемости студента по дисциплине
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Курс: « общая микробиология » раздел: « морфология микробов »
- •Домен «bacteria» (эубактерии)
- •Раздел: « физиология микробов »
- •Протокол “выделение и идентификация чистых культур бактерий”
- •3 Этап. А. Идентификация выделенной чистой культуры бактерий по биохимическим и антигенным свойствам.
- •4 Этап. Учет результатов.
- •Раздел: « учение об инфекции и иммунитете »
- •Курс: « специальная микробиология » раздел: «частная бактериология»
- •__Brucella abortus__
- •_Clostridium botulinum Vibrio cholerae__
- •Вызванных Clostridium perfringens
- •Раздел: « санитарно-фармацевтическая микробиология »
- •Антисептике
- •Раздел: « общая вирусология »
- •Виды культур тканей
- •Оглавление
Раздел: « учение об инфекции и иммунитете »
Занятие 11. Дата ______. Тема: «Учение об инфекции. Факторы врожденного иммунитета. Фагоцитоз»
Streptococcus pneumoniae Фагоцитоз Neisseria gonorrhoeae в гное
(в органах) S.aureus _(незавершенный фагоцитоз)
Окраска водным фуксином Окраска по Граму Окраска метиленовым синим
Рисунок 5. Факторы вирулентности стафилококков
Плазмокоагулаза Рост на 5% кровяном агаре (β-гемолиз) Рост на ЖСА (лецитовителлаза)
Таблица 10. Механизмы и пути передачи возбудителей инфекционных заболеваний
Механизмы заражения |
Пути передачи инфекции |
Факторы передачи инфекции |
"Входные ворота" инфекции |
Группа инфекционных заболеваний | |
Фекально-оральный |
Пищевой (алиментарный) |
Контаминированные пищевые продукты |
Рот, желудочно-кишечный тракт |
Кишечные инфекции | |
Водный |
Инфицированная вода | ||||
Контактно-бытовой |
Грязные руки, контаминированная посуда, насекомые-переносчики (мухи, тараканы) | ||||
Аэрогенный |
Воздушно-капельный |
Капли слизи из зева при кашле, чихании, разговоре, шепоте и дыхании |
Слизистые оболочки дыхательных путей |
Респираторные инфекции (инфекции дыхательных путей) | |
Воздушно-пылевой |
Частицы пыли, несущие на себе микробы | ||||
Аэрозольный |
Пылевой или водный аэрозоль | ||||
Кровяной |
Прямой |
Трансфузионный |
Переливание зараженной крови |
Кровь |
Кровяные инфекции |
Трансплацентарный |
Через плаценту от матери к плоду | ||||
Половой |
Если были повреждения с выделением крови | ||||
Непрямой |
Трансмиссивный |
Через кровососущих насекомых | |||
Манипуляционный |
Через нестерильные инструменты (иглы, шприцы, "опасная" бритва) с остатками крови на них | ||||
Контактный |
Контактный (прямой) |
Контаминированные руки (при рукопожатии, дотрагивании и т.п.), поцелуй, укус животного, травма, прохождение плода через инфицированные родовые пути матери |
Кожа, слизистые оболочки мочевыделительной и половой систем, конъюнктива глаз, волосы, ногти |
Контактные инфекции | |
Половой (прямой) |
Половой контакт |
Сексуально-трансмиссивные инфекции | |||
Контактно-бытовой (непрямой) |
Контаминированные предметы (контакт или ранение), все виды оружия, медицинская аппаратура, перевязочный материал |
Контактные инфекции |
Занятие 12. Дата _______. Тема: «Реакции иммунитета (реакция агглютинации, РПГА, реакция Кумбса, реакция преципитации)»
Таблица 11. Развернутая реакция агглютинации с сывороткой больного
Ингредиенты |
пробирки | ||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Контроль сыворотки |
Контроль антигена | |
Изотонический раствор, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
-- |
1,0 |
Сыворотка больного в исходном разведении 1:25, мл |
1,0 |
→ |
→ |
→ |
→ вылить |
1,0 |
-- |
Разведения сыворотки |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
1:25 |
-- |
Диагностикум (в каплях) |
3 |
3 |
3 |
3 |
3 |
-- |
3 |
Термостат при 37оС в течение 2 ч., затем при комнатной температуре 24 ч. | |||||||
Результат: |
|
|
|
|
|
|
|
ВЫВОДЫ: реакция агглютинации положительная. Титр антител к антигену - ________. |
Рисунок 6. Реакция агглютинации на стекле
-
ч.к. бактерий+
эшерихиозная сыв.
ч.к. бактерий +
паратифозная сыворотка
Контроль
(ч.к.+физ.р-р)
ВЫВОД:
Рисунок 7. Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА)
Таблица 12. Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)
Ингредиенты |
пробирки | |||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Контроль антигена | |
Изотонический раствор, мл |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
Сыворотка больного в исходном разведении 1:25, мл |
0,25 |
→ |
→ |
→ |
→0,25 вылить |
-- |
Разведения сыворотки |
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
-- |
Эритроцитарный диагностикум, мл |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
При комнатной температуре в течение 30-60 минут | ||||||
Результат: |
|
|
|
|
|
|
ВЫВОД: реакция пассивной гемагглютинации положительная до титра __________.
|
Таблица 13. Реакция кольцепреципитации для определения неизвестного белка
Ингредиенты |
Неизвестный белок |
Преципитирующая сыворотка против белка человека |
|
Преципитирующая сыворотка против белка курицы |
|
ВЫВОД: Исследованный белок принадлежит ________________.
|
Занятие 13. Дата _______. Тема: «Реакции иммунитета с участием комплемента: реакция иммунного гемолиза, РСК»
Таблица 14. Реакция иммунного гемолиза
Ингредиенты |
Опыт 1 |
Контроль 2 |
Контроль 3 |
Контроль 4 |
Контроль 5 |
Гемолитическая сыворотка кролика, мл |
0,5 |
0,5 |
-- |
0,5 |
-- |
Эритроциты барана, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
-- |
0,5 |
Комплемент в разведении 1:10, мл |
0,5 |
-- |
0,5 |
0,5 |
-- |
Эритроциты собаки, мл |
-- |
-- |
-- |
0,5 |
-- |
Физиологический раствор, мл |
-- |
0,5 |
0,5 |
-- |
1,0 |
Общий объем, мл |
1,5 |
1,5 |
1,5 |
1,5 |
1,5 |
Инкубация при 37oC в течение 45-60 минут | |||||
Результат: (гемолиз/отсутствие гемолиза): |
|
|
|
|
|
ВЫВОД: Реакция иммунного гемолиза положительная (отрицательная), т.к. _______________________________________________________________________ |
Таблица 15. Реакция титрования комплемента
Ингредиенты |
пробирки | ||||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
Контроль комплем. 8 |
Контроль гем. сист 9 | |
Комплемент в разведении 1:10, мл |
0,2 |
0,25 |
0,3 |
0,35 |
0,4 |
0,45 |
0,5 |
0,5 |
-- |
Изотонический раствор, мл |
1,3 |
1,25 |
1,2 |
1,15 |
1,1 |
1,05 |
1,0 |
1,5 |
1,5 |
Гемолитическая система, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
0,5 |
1,0 |
Инкубация при 37oC в течение 30 минут | |||||||||
Результаты: (гемолиз/отсутствие гемолиза): |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ВЫВОД: титр комплемента ______ мл; рабочая доза комплемента ________ мл.
|
Рисунок 8. Схема реакции связывания комплемента (РСК)
Таблица 16. Реакция связывания комплемента с исследуемой сывороткой
Ингредиенты |
Опыт 1 |
Контроль сыворотки 2 |
Контроль антигена 3 | |
Исследуемая сыворотка в разведении 1:25, мл |
0,5 |
0,5 |
-- | |
Антиген (диагностикум), мл |
0,5 |
-- |
0,5 | |
Комплемент в рабочей дозе, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 | |
Изотонический раствор, мл |
-- |
0,5 |
0,5 | |
Инкубация при 37oC в течение 45-60 минут | ||||
Гемолитическая система, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 | |
Инкубация при 37oC в течение 45-60 минут | ||||
Результаты: (гемолиз/отсутствие гемолиза): |
Сыворотка больного |
|
|
|
Сыворотка здорового |
|
|
| |
ВЫВОДЫ: РСК положительная/отрицательная с сывороткой здорового, т.к. ________________________________________________________________. РСК положительная/отрицательная с сывороткой больного, т.к. ________________________________________________________________.
|
Условные обозначения: «+» - наличие гемолиза (РСК «-«),
«-» - отсутствие гемолиза (РСК «+«).
Занятие 14. Дата _______. Тема: «Реакции иммунитета с «мечеными» реагентами: РИФ (прямой и непрямой варианты), ИФА»
Рисунок 9. Схема проведения иммуноферментного анализа (ИФА, «метод сэндвича»)
Таблица 17. Схема постановки ИФА
Ингредиенты |
Опыт |
«Положительный контроль» |
«Отриц. контроль» | |||||
|
A1 A2 |
B1 B2 |
C1 C2 |
D1 D2 |
E1 E2 |
F1 F2 |
G1 G2 |
H1 H2 |
1. Буфер A (мл) |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
Инкубация при комнатной температуре 10 мин. | ||||||||
2. Сыворотка больного (мл) |
0,1 |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
3. Стандартный антиген 100 мкг/мл (мл) |
-- |
0,1 |
→ |
→ |
→ |
→ |
→0,1 вылить |
-- |
4. Отрицательный контроль (мл) |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
0,1 |
Инкубация при 37oC в течение 20 мин. | ||||||||
5. Конъюгат (мл) |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
Инкубация при 37oC в течение 20 мин. | ||||||||
6. Субстрат (мл) |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
Инкубация при комнатной температуре 20 мин. | ||||||||
7. 50%H2SO4 (мл) |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
Результаты:
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ВЫВОДЫ: ИФА ________________(положительная/отрицательная). Концентрация HBs антигена _______ мкг/мл |
Занятие 15. Дата ______. Тема: «Медицинские иммунобиологические препараты для лечения, профилактики и диагностики заболеваний»
Таблица 18. Схема реакции флоккуляции для титрования анатоксина
Ингредиенты |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Дифтерийный анатоксин, мл |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
Противодифтерийная антитоксическая сыворотка, мл (400 МЕ/мл) |
0,16 |
0,18 |
0,2 |
0,22 |
0,24 |
Водяная баня 40-45˚C в течение 45 минут | |||||
Результаты: (инициальная флоккуляция): |
|
|
|
|
|
Расчет:
| |||||
ВЫВОДЫ: Реакция флоккуляции ________________(положительна/отрицательна). Титр дифтерийного анатоксина __________ Lf/мл.
|
Таблица 19. Схема контроля дифтерийного анатоксина
Название анатоксина |
Тип вакцины |
Внешний вид (цвет, прозрачность) |
Стерильность |
Титр (см. табл.9) |
Дифтерийный анатоксин
|
Неживая молекулярная вакцина |
|
|
|
ВЫВОД: Дифтерийный анатоксин________________ (соответствует/не соответствует стандарту) по показателям _________________________________________.
|
Схема 4. Препараты для создания искусственно-приобретенного активного иммунитета
Схема 5. Препараты для создания искусственно-приобретенного пассивного иммунитета