Учебная практика по микробиологии
Помещение и оборудование ветеринарной лаборатории
Ветеринарная лаборатория находилась в отдельном здании, туда отправлялись— трупы животных, их органы, части органов, кровь, выделения, содержимое желудка, кишок, кости, кожевенное и меховое сырьё, шерсть, молоко, мясо, мясные и др. сырые продукты. В лаборатории диагностируют инфекционные, паразитарные и незаразные болезни животных; устанавливают напряжённость иммунитета у привитых животных, определяют содержание в кормах белка, витаминов, минеральных веществ, а также наличие в них вредных примесей.
Результаты исследований и своё заключение лаборатория сообщает ветеринарному врачу, приславшему материал. В лаборатории работают ветеринарные врачи, специализировавшиеся по различным отраслям лабораторной диагностики, лаборанты.
Полы в коридоре покрыты линолеумом. Полы во вскрывочной, автоклавной, моечной, выложены плиткой. Стены вскрывочной, моечной, автоклавной от пола до потолка покрыты плиткой. Помещения имеет подводку горячей и холодной воды и присоединено к канализации. Возле раковин установлены бутыли с тубусом, в которых дезинфицирующий раствор. Вентиляция как искусственная, так и естественная.
Также там изложены важные правила лаборатории и сотрудники должны их строго придерживаться:
Перед тем как войти в отдел или другое производственное помещение лаборатории, работник обязан надеть специальную одежду (халат, медицинский колпак или белую косынку), а при входе в бактериологический и вирусологический отделы, кроме того, специальную обувь.
Работникам лаборатории не разрешается:
выходить за пределы лаборатории в спецодежде и спецобуви;
надевать верхнюю одежду на халат;
вносить в производственные помещения лаборатории посторонние вещи;
курить, принимать пищу в производственных помещениях и хранить в них продукты питания.
За каждым сотрудником бактериологического, вирусологического, серологического и других отделов закрепляют определенное рабочее место.
Все сотрудники обязаны всегда содержать свои рабочие места в строгом порядке и чистоте.
При работе с патологическим материалом, патогенными культурами бактерий и вирусов, а также с ядовитыми веществами следует избегать касаться руками лица и пользоваться носовым платком.
Работать с патологическим материалом необходимо в резиновых перчатках и пользоваться при этом инструментами (пинцетами, корнцангами, ножницами и др.). Прикасаться к исследуемому материалу непосредственно руками запрещается.
При работе с культурами микробов и вирусов, равно как и во всех вопросах, связанных с их хранением и обращением внутри лаборатории, работники лаборатории обязаны руководствоваться "Инструкцией о порядке хранения, обращения, отпуска, а также вывоза и ввоза из зарубежных стран культур микроорганизмов, токсинов и ядов животного и растительного происхождения", На сосудах, в которых хранят культуры, должны быть разборчивые надписи с указанием культуры и даты поступления материала. Ежедневно по окончании рабочего дня заразный материал помещают в термостат или шкаф, который опечатывают, а комнату, где он стоит, запирают. Все поступающие в лабораторию кислоты, щелочи и другие химические вещества подлежат учету и хранению в специальных помещениях с соблюдением соответствующих условий и мер предосторожности. Ответственность за хранение реактивов и других химических веществ в отделах (отделениях) лаборатории возлагается на одного из специалистов подразделения. Кислоты (азотную, соляную, уксусную и муравьиную) следует держать в шкафу с непрерывной вентиляцией, поскольку перегрев сосудов с этими кислотами может вызвать их взрыв. Для разливки кислот и едких жидкостей рекомендуется использовать стеклянные сифоны с грушей или специальные наклоняющиеся штативы. Работая с кислотами и щелочами, нельзя допускать попадания их на руки, одежду и стол
Приемная комната в лаборатории изолирована от других помещений лаборатории запирающейся дверью с окном.
В приемной комнате раковина с кранами, открывающимися нажимом локтя, а также 2 - 3 стола, покрытые оцинкованным железом или пластиком, устойчивым к щелочам и кислотам, шкаф для спецодежды. Здесь же хранят растворы дезсредств. Лаборант регистрирует поступивший материал и, выяснив, с какой целью он доставлен и характер требуемых исследований, принимает и осторожно расставляет материал в закрепленные за подразделениями лотки, гнездные контейнеры (железные ящики) или штативы на соответствующих столах .
Во вскрывочной: секционный стол, столик с инструментарием для вскрытия трупов животных, столик для записей, шкаф для хранения инструментов, лабораторной посуды, предметных стекол и т.д., шкаф для спецодежды. Также во вскрывочной устраивают бокс для проведения первичных посевов. Посевы из патологического материала, приготовление мазков, отбор материала для заражения лабораторных животных проводят над кюветом
Вскрытых животных (например мышей) кладут в бачок с дезраствором. Пробковую доску и марлю по окончании работы погружают в 5-процентный раствор хлорамина на 2 часа.
Инструменты для вскрытия стерилизуют кипячением; непосредственно перед применением их обжигают над пламенем спиртовки, в течение работы с одной и той же мышью периодически обеззараживают 5-процентным раствором хлорамина, после чего погружают в спирт и обжигают.
Во время работы инструменты (пинцеты, ножницы, булавки и др.) следует тотчас же после использования профламбировать, а закончив работу, обеззаразить кипячением. После окончания работы все предметы помещают на 24 часа в бак с 5-процентным раствором хлорамина для окончательного обеззараживания.
Трупы животных сначала погружают в бачки с дезраствором, а в конце рабочего дня специально собирают их в общий бак и сжигают. Если нет возможности сжечь трупы на месте, их вместе с бачками автоклавируют.
В специальном журнале регистрируют общее количество уничтоженных животных.
Подготовка лабораторной посуды к работе
Одним из факторов, оказывающих влияние на результаты проводимых исследований воды, является недостаточная чистота посуды.
Вся лабораторная посуда, вышедшая после проведения исследования (чашки, колбы, пробирки со средами), помещается в специальные биксы или ведра с крышками и обеззараживается автоклавированием при 126 °C в течение 60 мин. или 132 °C в течение 20 мин. Категорически запрещается освобождать использованную посуду от содержимого (питательных сред, растворов с посевами) до обеззараживания.
В исключительных случаях допускается обеззараживание кипячением в 2%-ном растворе пищевой соды или 0,5%-ном растворе нейтрального моющего средства в течение 60 мин. с момента закипания. Кипячение должно происходить в закрытой емкости с полным погружением в раствор.
Отработанные пипетки обеззараживают в высоком сосуде с полным погружением в дезраствор. Продолжительность обеззараживания зависит от применяемого дезсредства.
Приготовление питательных сред и дополнительных растворов
Одним из факторов, оказывающих влияние на результаты проводимых исследований воды, является недостаточная чистота посуды.
Вся лабораторная посуда, вышедшая после проведения исследования (чашки, колбы, пробирки со средами), помещается в специальные биксы или ведра с крышками и обеззараживается автоклавированием при 126 °C в течение 60 мин. или 132 °C в течение 20 мин. Категорически запрещается освобождать использованную посуду от содержимого (питательных сред, растворов с посевами) до обеззараживания.
В исключительных случаях допускается обеззараживание кипячением в 2%-ном растворе пищевой соды или 0,5%-ном растворе нейтрального моющего средства в течение 60 мин. с момента закипания. Кипячение должно происходить в закрытой емкости с полным погружением в раствор.
Отработанные пипетки обеззараживают в высоком сосуде с полным погружением в дезраствор. Продолжительность обеззараживания зависит от применяемого дезсредства.
Методы дезинфекции и стерилизации Стерилизация — обработка объектов, при которой достигается полное уничтожение всех микроорганизмов. В результате стерилизации объект становится свободным как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. Существуют различные методы и способы стерилизации, в основе которых лежит действие физических или химических факторов. Критерием гибели микроорганизмов является необратимая утрата способности к размножению, что можно оценить путем количественного подсчета числа колоний после высева смывов на чашки с питательными средами.
Наиболее широко применяют методы тепловой стерилизации: кипячением, сухим жаром в атмосфере горячего воздуха или влажным жаром при помощи пара, а также прокаливанием предметов в огне.
Прокаливание на огне — надежный метод стерилизации бактериологических петель, металлических и стеклянных предметов. Однако применяется ограниченно ввиду их порчи.
Стерилизация сухим жаром или горячим воздухом производится в сушильных шкафах или печах Пастера при температуре 160—170°С в течение 1—1,5 ч по достижении заданной температуры. Этим методом стерилизуют лабораторную посуду, инструменты, минеральные масла , вазелин. Жидкости и резину сухим жаром стерилизовать нельзя. Предметы, подлежащие стерилизации, заворачивают в бумагу или закладывают в металлические пеналы для предохранения от последующего загрязнения. Необходимо помнить, что при температуре выше 170°С начинается обугливание бумаги, ваты, марли, а при более низкой температуре не происходит гибели спор.
Стерилизация кипячением в течение 30 мин убивает вегетативные формы микробов. Споры многих бактерий при этом сохраняются, выдерживая кипячение в течение нескольких часов. Для уничтожения вирусов — возбудителей болезни Боткина необходимо кипячение в течение 45—60 мин. Кипячению в специальных стерилизаторах подвергают шприцы, хирургические инструменты, иглы, резиновые трубки. Для повышения точки кипения и устранения жесткости воды добавляют 2% гидрокарбоната натрия.
Стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование) является наиболее надежным и быстрым методом стерилизации. Обеспложивание достигается воздействием пара, температура которого под давлением выше, чем температура кипящей воды: при давлении 0,5 атм 112°С, при 1 атм. 121 °С , при 1,5 атм 127°С и при 2 атм 134°С.
Стерилизацию производят в автоклаве. Он представляет собой двухстенный металлический котел, покрытый снаружи кожухом и имеющий герметически закрывающуюся крышку. В современных горизонтальных автоклавах под рабочим котлом находится бачок с водомерным стеклом и электронагревательными элементами, куда наливают воду до определенной метки на водомерном стекле. Вода нагревается и образующийся при этом пар по специальному патрубку, соединенному с котлом автоклава, поступает в рабочую камеру котла. Пар постепенно вытесняет из рабочей камеры воздух, который выходит наружу через специальный выпускной кран. После того как воздух будет полностью вытеснен из рабочей камеры паром и из выпускного клапана пойдет насыщенный «сухой пар», крышку герметически закрывают. Пар доводят до нужного для стерилизации давления, которое определяют по имеющемуся на автоклаве манометру, и проводят стерилизацию в течение 20 мин. По окончании стерилизации автоклав отключают, ждут, пока давление не снизится до нуля, выпускают постепенно пар и открывают автоклав. Для контроля надежности работы автоклава и режима стерилизации применяют физические, химические методы и бактериологические тест-объекты. В автоклаве обычно стерилизуют при давлении 1 — 1,5 атм различные питательные среды, растворы, белье, резину, перевязочный материал и др. При давлении 2 атм обеззараживают инфицированный материал и отработанные культуры микробов. Стерилизация в автоклаве таких веществ, как вазелин, масло, песок, малоэффективна вследствие того, что в них пар проникает плохо или совсем не проникает. Некоторые питательные среды (например, содержащие сахара) нельзя стерилизовать паром под давлением, так как они карамелизуются, поэтому их подвергают дробной стерилизации текучим паром.
Стерилизация текучим паром проводится в аппарате Коха или в автоклаве при не завинченной крышке и открытом выпускном кране. На дно аппарата Коха наливают воду и нагревают до 100°С. Образующийся пар движется вверх через заложенный материал и стерилизует его. Так как однократное действие паров воды не убивает споры, применяют дробную стерилизацию — 3 дня подряд по 30 мин. Споры, не погибшие при первом прогревании, прорастают до следующего дня в вегетативные формы и погибают при втором и третьем прогревания.
Для веществ, разрушающихся при 100°С (например, жидкости содержащие белок), применяют другой вид дробной стерилизации — тиндализацию. Стерилизуемое вещество прогревают на водяной бане по 1 ч при 56— 60°С в течение 5—6 дней. Для освобождения от вегетативных форм микробов прибегают к пастеризации — однократному прогреванию при 70°С в течение 30 мин с последующим быстрым охлаждением и хранением на холоду, чтобы не проросли споры. Этот метод применяют для обеззараживания и сохранения молока.
Стерилизация фильтрованием (холодная стерилизация) через бактериальные фильтры применяется для освобождения жидкостей от бактерий. Этот метод используют в тех случаях, когда стерилизующая жидкость портится от нагревания, при необходимости отделения бактериальных клеток от растворимых продуктов их жизнедеятельности (экзотоксины, антибиотики и др.), фагов, вирусов. Бактериальные фильтры изготовляют из фарфора, каолина, мелко пористого стекла пирекс, асбеста, целлюлозы, нитроклетчатки и других мелкопористых материалов. В механизме стерилизации фильтрованием играют роль размер пор и адсорбция микробов на стенках пор фильтров. Фильтры имеют форму свечей (Шамберлана, Беркефельда) или пластинок из асбеста, нитроцеллюлозы (мембранные фильтры), которые вкладывают в специальные фильтровальные приборы (аппарат Зейтца, прибор Рублевской водопроводной станции). Перед работой их стерилизуют. Фильтрацию производят с разрежением воздуха внутри сосуда-приемника.
Химическая стерилизация применяется в том случае, если объекты нельзя автоклавировать. Обычно это питательные среды, содержащие термолабильные вещества. Химическое вещество должно быть не только токсичным, но и летучим для быстрого исчезновения из простерилизованного объекта. Наилучшим является окись этилена — жидкость кипящая при 10,7°С. Окись этилена в жидком виде добавляют в раствор при температуре от 0 до 4°С в конечной концентрации 0,5—1%. При температуре выше точки кипения окись этилена используют как стерилизующий газ, для стерилизации сложной медицинской аппаратуры. Окись этилена губительно действует на вегетативные и споровые формы бактерий. Ее используют в промышленности для стерилизации пластмассовых чашек Петри и других предметов, которые плавятся при температуре выше 100°С. Применение окиси этилена ограничено, так как вещество токсично, нестойко, взрывоопасно.
Дезинфекция — уничтожение патогенных микробов в окружающей человека среде. Методы и способы дезинфекции. Различны, но они преследуют цели уничтожения не всех микроорганизмов, а только патогенных. Уничтожение возбудителей инфекционных заболеваний в переносчиках называют дезинсекцией, а в организме грызунов — источников инфекции — дератизацией.
Дезинфекция имеет большое значение в системе профилактических и противоэпидемических мероприятий. С учетом роли дезинфекции ее делят на профилактическую и очаговую. Профилактическая дезинфекция позволяет предупредить распространение инфекционных болезней среди населения. Такой вид дезинфекции проводят в пищевых объектах, местах торговли пищевыми продуктами, на предприятиях по переработке животного сырья, в местах общественного пользования, в сооружениях водоснабжения, медицинских учреждениях, бактериологических лабораториях. Очаговая дезинфекция осуществляется в эпидемическом очаге: в больнице или дома, где находится больной (текущая дезинфекция) либо после госпитализации, выздоровления или смерти больного (заключительная дезинфекция). Задачей текущей дезинфекции является обеззараживание выделений больного (испражнения, моча, рвотные массы, мокрота) или предметов домашнего обихода, на которые могли попасть патогенные микробы. Она исключает заражение лиц, общающихся с больным. Задача заключительной дезинфекции — обеззаразить объекты, с которыми соприкасался больной (помещение, предметы обстановки и ухода, белье, одежда, остатки пищи и др.).
При выполнении различных видов дезинфекции применяют механические, физические и химические способы и средства. К первым относятся мытье рук с мылом и щеткой, влажная уборка помещений, стирка белья, проветривание помещений и др., преследующие цель удаления микроорганизмов с объекта. Физические способы: кипячение, сжигание, обработка паром (текучим и под давлением) с использованием автоклава и дезинфекционных камер, приводят к уничтожению патогенных микробов. Применение химических дезинфицирующих средств целесообразно сочетать с механическими способами и действием физических факторов.
За время прохождения практики мною были изучены составные части микроскопа, изучила правила пользования им. Исследовала соскобы из ушей, шерстный покров морской свинки, были выявлены ушной клещ и власоеды.