Mikrobiologia_Kholera_obzor

Холера — острая кишечная инфекция, сопровождающаяся поражением желудочно-кишечного тракта, интоксикацией, нарушением водно-солевого обмена, обезвоживанием и расстройством сердечно-сосудистой деятельности. Холера относится к группе особо опасных инфекций.

Классификация: По определителю Берджи – 5 группа - факультативно анаэробные Гр- палочки

Семейство: Vibrionaceae

Род: Vibrio

Виды: V. cholerae,

V. parahaemolyticus,

V. vulnificus и др.

Вид V. cholerae подразделяют на 4 биовара: V. cholerae, V. eltor, V. proteus и V. Albensis

Морфология: Холерный вибрион представляет собой грамотрицательную слегка изогнутую палочку размером в среднем 0,3x3 мкм, с одним жгутиком на конце (монотрихи) - подвижен. Характеризуется значительным полиморфизмом: может иметь форму нитей, кокков, палочек. В исследуемом материале, вибрионы часто располагаются в виде стайки рыб. Спор и капсул не образуют

Культуральные свойства: Строгий аэроб.

Растет при температуре от 16 до 40°С (оптимум 37°С). Очень неприхотлив к питательным средам. Хорошо размножается на 1 %-ной щелочной (рН 8,6—9,0) пептонной воде (ПВ). При росте образует через 6—8 ч на поверхности ПВ нежную рыхлую сероватого цвета пленку, которая при встряхивании легко разрушается и падает на дно в виде хлопьев, ПВ умеренно мутнеет.

Также используют щелочной МПА, на котором холерный вибрион образует гладкие стекловидно-прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции.

Дифференциально-диагностическими являются:

1.среда TCBS или ТЦБС (тиосульфат-цитрат-биллиарно-сахарозный агар): V. cholerae образует ярко – желтые колонии, холероподобные вибрионы – нет роста или неокрашенные колонии.

2. среда Мансура (таурохолат-триптиказо-телуритовая среда) - V. cholerae образует колонии черного цвета с серой каемкой, холероподобные вибрионы – бледно – серые колонии;

Биохимические свойства: Холерные вибрионы обладают широким спектром биохимической активности в отличие от других вибрионов, которые менее активны. Благодаря наличию протеолитических ферментов они образуют индол (реакция холера рот). Расщепляют до кислоты ряд углеводов, в том числе маннозу, сахарозу, не ферментируют арабинозу (холероподобные не ферментируют), их относят к I группе Хейберга, что помогает дифференцировать их от других вибрионов. V.сholerae разжижает желатин и расщепляет крахмал.

Антигенные свойства: О-АГ и Н-АГ

Основной АГ – это О, он определяет серогруппу.(типоспецифический)

H АГ – видоспецифический.

Холерные и холероподобные вибрионы имеют общий Н-антиген, но различаются по О-антигенам.

По О-антигену холерные и холероподобные вибрионы к настоящему времени распределяют на 139 О-серогрупп, но их количество все время пополняется.

Холерный вибрион относится к О1 группе. (V.cholera и V.eltor)

Он (О1 АГ) имеет общий А-антиген и два типоспецифических антигена — В и С, по которым и различают три серовара V. cholerae — серовар Огава (АВ), серовар Инаба (АС) и серовар Гикошима (ABC).

V. cholerae О139 bengal.

Токсиногенные свойства: Холерный вибрион вырабатывает эндотоксин (ЛПС), обусловливающий основные клинические проявления болезни. (энтеротоксин – по механизму действия, вызывает слущивание (десквомацию) эпителия кишечника). Он стабильный.

Экзотоксин (холерогентоксин) содержит компоненты А и В. Не стабильный.

В выполняет функцию акцептора, обеспечивает прикрепление к специфическим рецепторам энтероцитов и способствует трансмембранному переносу А субъединицы в цитоплазму.

Субъединица А вызывает активацию аденилатциклазы, что приводит к нарушению водносолевого обмена, блокируется АТФ фаза и нарушается внутриклеточный транспорт Na и H₂O.

Резистентность: Выживаемость холерного вибриона во внешней среде невелика. Он быстро погибает при высушивании и действии света. При нагревании до 80°С погибает через 20 мин, а при кипячении — мгновенно. Низкие температуры этот микроб переносит довольно хорошо, во льду сохраняется в течение нескольких дней. При значительной резистентности к щелочной среде и к довольно высокой концентрации соли вибрион очень чувствителен к растворам кислот и дезрастворам даже весьма слабой концентрации. Дезинфицирующие вещества (3—5% карболовая кислота, хлорамин, сулема 1 :1000) убивают его в течение нескольких минут. В пищевых продуктах, воде, почве, испражнениях холерный вибрион живет от нескольких суток до нескольких недель. В водопроводной воде живет около 2 недель, в соленой около месяца. При УФО погибает через 10 мин. По сравнению с классическим биотипом холерного вибриона биотип Эль-Тор более устойчив к действию различных внешних факторов.

Эпидемиология: Источник - человек (антропоноз) больной или бактерионоситель

Пути передачи: механизм – фекально-оральный; пути: водный, контактно-бытовой, алиментарный (пищевой).

Восприимчивый коллектив – любой человек без специфического иммунитета, особенно дети и пожилые люди.

Группы риска — лица с антацидным гастритом (пониженная кислотность желудка), с ахлоргидрией.

Животные не болеют. Экспериментально удается заразить морских свинок, кроликов-сосунков, котят, обезьян введением культуры холерного вибриона в желудок с предварительной нейтрализацией желудочного сока раствором бикарбоната натрия. Однако клиническая картина болезни у них иная, чем у человека. Животные погибают в течение нескольких дней при явлениях энтерита

Патогенез:

Инкубационный период 1-5 дней.

Клиника: Диарея, стул учащается, испражнения становятся все более обильными, принимают водянистый характер, утрачивают фекальный запах и имеют вид рисового отвара (мутная жидкость с плавающими в ней остатками слизи и клетками эпителия). Затем присоединяется изнурительная рвота, сначала содержимым кишечника, а затем рвотные массы приобретают вид рисового отвара (плохой прогностический признак). Ацидоз (уменьшение рН). Нарушение деятельности ССС. Температура у больного падает ниже нормы, кожа становится синюшной, морщинистой и холодной — холерный алгид. В результате обезвоживания происходит сгущение крови, развивается цианоз, кислородное голодание, резко страдает функция почек, появляются судороги, больной теряет сознание и наступает смерть.

Иммунитет:

Гуморальный иммунный ответ. 2 вида АТ: к О АГ – лизины, агглютинины и антитоксичские АТ к холерогену. Секреторные иммуноглобулины препятствуют адгезии вибриона. Перенесенное заболевание оставляет стойкий иммунитет, который носит характер антитоксического и антимикробного.

Лабораторная диагностика:

Исследуемый материал: испражнения, рвотные массы, секционный материал (отрезки тонкого кишечника и желчный пузырь), вода

Экспресс – метод

• РНТФ с индикаторными холерными бактериофагами IV типа и Eltor

• РИФ с люминесцирующей холерной сывороткой

• РПГА с суспензионными холерными АТ

• Реакция иммобилизации холерных вибрионов с О1 (О139) холерной сывороткой, учет – темнопольная микроскопия

• ИФА, ПЦР

Микроскопический метод

- окраска по Граму: грамотрицательные мелкие изогнутые в виде запятой палочки

- серебрение по Морозову (выявление жгутиков).

Бактериологический метод – основной

I этап: посев на 1% щелочную пептонную воду, щелочной агар, элективные дифференциально - диагностические среды (ТЦВС, Мансура).

II этап: изучение роста вибрионов на щелочной пептонной воде, щелочном агаре, элективных дифференциально - диагностических и выделение чистой культуры на скошенном щелочном агаре

III этап: дифференциация холерного и холероподобных вибрионов, дифференциация биоваров классического и Эль-Тор, определение серовара холерного вибриона. Заключение через 36 часов после начала исследования

2-ой этап

• очень неприхотлив к питательным средам.

• Хорошо размножается на 1 %-ной щелочной (рН 8,6—9,0) пептонной воде (ПВ).

• при росте образует через 6—8 ч на поверхности ПВ нежную рыхлую сероватого цвета пленку, которая при встряхивании легко разрушается и падает на дно в виде хлопьев, ПВ умеренно мутнеет.

Изучают рост на 1-й пептонной воде (через 6 – 8 часов):

- мазок с окраской по Граму

- определение подвижности в препарате «висячая капля» или «раздавленная капля» в темном поле

- ориентировочная реакция агглютинации на стекле с О1 агглютинирующей холерной сывороткой (при отрицательном результате – с сывороткой О139)

- реакция иммобилизации холерных вибрионов

- нитрозо - индоловая реакция (холера-рот реакция) с пептонной водой, на которой выросла пленка (1 мл пептонной воды + несколько капель серной кислоты, при положительном результате – розовое окрашивание)

- и производят высевы на щелочной агар и 2-ю пептонную воду.

Через 12 – 14 ч после начала исследования

Изучают рост на 2-й пептонной воде (и производят высевы на щелочной агар) и щелочном агаре.

На щелочном МПА образует гладкие стекловидно-прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции.

На среде TCBS (тиосульфат-цитрат-билиарно-сахарозный агар): V. cholerae образует ярко – желтые колонии, холероподобные вибрионы – нет роста или неокрашенные колонии.

На среде Мансура (таурохолат-триптиказо-телуритовая среда) - V. cholerae образует колонии черного цвета с серой каемкой, холероподобные вибрионы – бледно – серые колонии;

Из подозрительных колоний выделяют чистую культуру на скошенном щелочном агаре.

3-ий этап

Дифференциация холерного вибриона от холероподобных

По биохимическим свойствам:

используют среды Гисса с маннозой, сахарозой, арабинозой

холерный вибрион относится к I группе по Хейбергу

По антигенным свойствам:

Холерные и холероподобные вибрионы различаются по О-АГ: распределяют на 139 О-серогрупп. Холерный вибрион относится к О1 группе. Также выделен V. cholerae О139 bengal. Ставят РА с О1 и О139 агглютинирующими сыворотками

Дифференциация классического биовара от Эль-Тор

Определение серовара.

Холерный вибрион имеет общий А-антиген и два типоспецифических антигена — В и С, по которым и различают три серовара V. cholerae — серовар Огава (АВ), серовар Инаба (АС) и серовар Гикошима (ABC).

Ставится реакция агглютинации (РА) на стекле с сыворотками Инаба и Огава

Серологический метод

- Может быть использован для выявления вибрионосителей.

- РА с холерными диагностикумами

- РПГА с эритроцитарными холерными диагностикумами

Специфическая профилактика:

1) Вакцина холерная бивалентная химическая таблетированная (смесь холероген-анатоксина и О-антигенов сероваров Инаба и Огава). Иммунитет 6-8 месяцев

2) Вакцина холерная инактивированная, содержащая серовары Огава и Инаба классического биовара или биовара Эль-Тор холерного вибриона цельноклеточная.

3) Холерные бактериофаги